高二生物 DNA的粗提取 课件选修1.ppt

dna的粗提取与鉴定 无论是果胶酶还是加酶洗衣粉中的酶制剂 都是从细胞中提取出来的 从今天开始 我们学习生物化学成分的提取与改造技术 基础知识 dna粗提取的原理提取dna的溶解性原理包括哪些方面 提取dna的原理包括dna的溶解性和耐受性两个方面 dna在不同浓度nacl溶液中溶解度不同 dna不溶于酒精 思考1 分析图5 1 dna在不同浓度nacl溶液中溶解度有何特点 要使dna溶解 需要使用什么浓度 要使dna析出 又需要使用什么浓度 在0 14mol l时溶解度最小 较高浓度可使dna溶解 0 14mol l可使dna析出 思考2 在溶解细胞中的dna时 人们通常选用2mol lnacl溶液 将dna分子析出的方法是向溶有dna的nacl溶液中缓慢注入蒸馏水 以稀释nacl溶液 酒精是一种常用有机溶剂 但dna却不能溶于酒精 特别是95 冷却酒精 但细胞中蛋白质可溶于酒精 问 采用dna不溶于酒精的原理 可以达到什么目的 将dna和蛋白质进一步分离 思考3 提取dna还可以利用dna对酶 高温和洗涤剂的耐受性原理 利用该原理时 应选用怎样的酶和怎样的温度值 蛋白酶 因为酶具有专一性 蛋白酶只水解蛋白质而不会对dna产生影响 温度值为60 80 因为该温度值蛋白质变性沉淀 而dna不会变性 补充 dna的变性是指dna分子在高温下解螺旋 其温度在80 以上 如在pcr技术中dna变性温度在95 dna的鉴定原理当鉴定提取出的物质是否是dna时 需要使用什么指示剂进行鉴定 在沸水浴条件下 dna遇二苯胺呈现蓝色 原理总结 通过利用不同浓度nacl溶液溶解或析出dna 可以从细胞中提取和提纯dna 再利用酒精进一步将dna与蛋白质分离开来 达到提纯的目的 最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是dna 1实验材料不同生物的组织中dna含量不同 在选取材料时 应本着dna含量高 材料易得 便于提取的原则 你认为教材提供的材料中哪些不适合提取dna 从核dna数目来看 猪38条 鸡78条 哺乳动物血0条 猕猴桃58条 洋葱16条 豌豆14条 菠菜12条 大肠杆菌1条 请选择动植物材料各一种 哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠杆菌 鸡血 猕猴桃 2破碎细胞 获取含dna的滤液若选用鸡血和洋葱作实验材料 则怎样获取含dna的滤液 在以上实验中 加入蒸馏水 洗涤剂和食盐的作用分别是什么 过滤时应当选用 滤纸 尼龙布 在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅拌 过滤后收集滤液 切碎洋葱 加入一定量洗涤剂和食盐 搅拌研磨 过滤后收集滤液 血细胞在蒸馏水中大量吸水而张裂 洗涤剂瓦解细胞膜 食盐溶解dna物质 选用尼龙布进行过滤 在处理植物组织时需要进行研磨 其目的是什么 研磨不充分产生什么结果 具体做法 10ml鸡血 20ml蒸馏水 同方向搅拌 3层尼龙布过滤 滤液 破碎细胞壁 使核物质容易溶解在nacl溶液中 研磨不充分会使dna的提取量减少 3去除滤液中的杂质最初获得的dna滤液含有蛋白质 脂质等杂质 需要进一步提纯dna 阅读教材提供的三种方法 分析其中的原理 方案一的原理是dna在不同浓度nacl溶液中溶解度不同 方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质 不分解dna 方案三的原理是蛋白质和dna的变性温度不同 具体做法 方案一 30ml滤液 35gnacl 同方向搅拌 dna溶解 加入蒸馏水 dna析出 过滤得到过滤物 放到2mol lnacl溶液中溶解 dna nacl溶解液方案二 30ml滤液 嫩肉粉 木瓜蛋白酶 静置10 15分钟 dna滤液方案三 30滤液 60 67 处理 过滤获得dna滤液 4dna析出与鉴定在滤液中仍然含有一些杂质 怎样除去这些杂质呢 得到的dna呈何颜色 滤液与等体积的冷却酒精混合均匀 静置2 3分钟 析出的白色丝状物就是dna dna呈白色 怎样鉴定析出的白色丝状物就是dna呢 阅读教材 阅读 简述dna的鉴定过程 具体做法 试管2支 编号甲乙 各加等量5mlnacl溶液 甲中放入少量白色丝状物 使之溶解 各加4ml二苯胺 混合均匀 沸水浴5min 观察颜色变化 3 实验操作制备鸡血细胞液 加柠檬酸钠 静置或离心 破碎细胞 释放dna 加蒸馏水 同一方向快速通方向搅拌 过滤 除去细胞壁 细胞膜等 溶解核内dna 加入nacl至2mol l 同一方向缓慢搅拌 dna析出 加蒸馏水至0 14mol l 过滤 在溶解到2mol l溶液中 除去细胞质中的大部分物质 dna初步纯化 与等体积95 冷却酒精混合 析出白色丝状物 除去核蛋白 rna 多糖等 dna鉴定 二苯胺 沸水浴 呈现蓝色 其它注意事项 在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固 鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度 使用塑料烧杯 使用尼龙布过滤 玻