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文档简介

新型重组人肿瘤坏死因子 肿瘤坏死因子研究历史及其作用新型肿瘤坏死因子的应用前景新型重组人肿瘤坏死因子的发酵工艺肿瘤坏死因子的发酵工艺 肿瘤坏死因子的研究历史 肿瘤坏死因子 tumornecrosisfactor TNF 是1975年由Carswell等发现的 是人巨噬细胞分泌的细胞因子具有特异性杀伤瘤细胞的功能20世纪80年代末 西方国家就已批准了人TNF治疗恶性肿瘤的临床试验 但因毒副作用太强而未能进行下去 肿瘤坏死因子的研究历史 1995年 第四军医大学生物技术中心主任张英起教授带领课题组研制的突变体新型人重组肿瘤坏死因子 nrhTNF 其杀伤肿瘤细胞的活性是天然人TNF的100倍 毒性降低了3倍 2003年4月 该药获国家食品药品监督管理局颁发的一类新药物制品证书 8月 正式获得新药生产文号 这是目前世界上第一个被批准生产的重组改构人肿瘤坏死因子药物 也是我国第一个上市的一类基因工程抗肿瘤药物 也是世界上第一个获准上市的全身应用的肿瘤坏死因子衍生物 肿瘤坏死因子的作用 借助机体免疫功能 对同一肿瘤产生直接和间接双重活性的抗癌效应 并使营养血管出血坏死 刺激成纤维细胞 修复 增殖 抑制脂蛋白的脂质活性 增进凝血因子及组织因子 血液凝固 的活性 肿瘤坏死因子的作用 诱导产生IL 2 白介素2 参与抗肿瘤效应 及IL 6增强中性粒细胞 趋化 吞噬和杀菌 对血管内皮的黏附性 产生菌溶刺激因子等 在体外对人类肿瘤细胞 如鼻咽癌 子宫癌 白血病等 有直接抑制增殖作用 在体内可引起肿瘤坏死 瘤体缩小以致消失 肿瘤坏死因子的发酵工艺 工艺流程菌种选育 扩大培养 接种 发酵 提取培养基 LB培养基接种量 4 二级种子液接种发酵方式 补料分批发酵控制参数 溶氧控制在30 60 之间 肿瘤坏死因子的发酵工艺 温度 前期控制在30 发酵期控制在42 碳源 用产酸量较少的甘油代替葡萄糖 采用分阶段控制补料的步骤 来控制有害物质 主要是乙酸 的积累nrhTNF表达量测定 常规SDS PAGE分析粗提取工艺流程 细胞破碎 热变性 40 硫酸铵处理 离心 60 硫酸铵沉淀TNF大部分都在细胞内 因此要先破碎细胞 常见的方法是酶解破壁 超声波破碎和球磨破碎 工业常用球磨破碎 肿瘤坏死因子的粗提取工艺 nrhTNF具有耐热性 故热处理使大部分蛋白质失活 硫酸铵能除去大量杂蛋白 并保持目标蛋白的活性 起到浓缩作用 该方法的目标蛋白回收率和活性蛋白回收率分别为90 3 85
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