临床病原体检测-诊断学-一护理系

病原微生物的诊断,华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科曾 吉,微生物的概念；病原微生物标本的采集；病原微生物检查方法；细菌耐药性；常见病原微生物的分类及检测；性传播疾病病原体检测；医院感染。,微生物的概念,微生物（microbiology):是指不能用肉眼直接观察到的一大类单细胞生物，可分为真核细胞、原核细胞和病毒三大类型。临床常见的病原微生物有真菌、细菌、支原体、衣原体、螺旋体、病毒等。,1. 给临床感染的诊断提供实验室的依据2. 给临床抗感染治疗提供参考3. 临床流行病学的调查微生物检验的一个重要功能就是进行细菌耐药监测，以指导临床合理使用抗生素,临床微生物检验的主要功能,实验结果的影响因素,实验前因素,实验室因素,实验后因素,常见微生物标本的正确采集,血液和骨髓的采集;痰标本的采集;咽拭子标本的采集;尿液标本的采集;脓、创伤感染标本的采集;穿刺液标本的采集;粪便标本的采集;,血液和骨髓的采集,采血的时机？正确的采血量应该是多少?采血的方法？ 血培养阳性率为什么不高？ 如何认识血培养结果？,什么情况需要做血培养,有不明原因的发热、体温过低等症状；怀疑有菌血症或脓毒症。,采集血培养标本的最佳时间？,1.有发热等症状时；2.在使用抗生素的情况下；3.怀疑有亚急性心内膜炎时。,细菌入血、内毒素释放和体温上升的关系示意图,浓度 1：细菌（温度）2：内毒素3：体温 1 2 3 时间,正确的采血方法,采血时的皮肤消毒推荐采用三步消毒法：1 首先用70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒钟以上。2 然后用一根碘酊或碘伏棉签消毒皮肤（1%2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒），从穿刺点向外以1.5cm2cm直径画圈进行消毒。3 最后用70%酒精脱碘。注意对碘过敏的患者，只能用70%酒精消毒，消毒60秒钟，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。,血养瓶消毒程序：1 用70%酒精或碘溶液(不要使用碘)消毒血培养瓶橡皮塞子。2 酒精作用约60秒。3 在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。,正确的采血量应该是多少?,血培养阳性率为什么不高？,1.菌血症、脓毒症只是发热原因中的一小部份；2.采血量、采血时间等人为因素的干扰；3.部份苛养菌用常规方法难以培养。,血培养结果的解释,1.培养出革兰阴性菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌等时，多数可以确认为病原菌；2.培养出凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、芽胞杆菌等时，感染？污染？,有临床意义的前10位细菌(1990-1993): CID 1997,解决方案,需多次多部位/天 采血。,什么情况需要采集骨髓标本,1.疑为细菌性或真菌性骨髓炎的患者；2.疑为伤寒感染的患者；,痰标本的采集,要求采集肺深部的痰液，不要唾液。一般采用自然咳痰法，但以气管镜采集法标本质量最好。 自然咳痰法 ； 气管镜采集法； 小儿取痰法；(4) 导管尖送检；,下呼吸道标本,所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至微生物室，并于1小时内接种室温下放置1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的分离率而定植于上呼吸道的非致病菌则会过度生长下呼吸道标本勿放冰箱或运输时勿置于冰块中,痰涂片检查是否标本合格,痰肉眼观察: 记录标本外观 唾液、带血、粘液样、水样、脓性的、粘液脓性、脓性粘液样显微镜检查：取脓性部分涂在玻片上作革兰染色. 低倍视野下看涂片，记录5个视野下平均细胞数。,痰涂片的判定,分类 WBC 鳞状上皮细胞 6 25 25 25 10-25 3 25 25 2 10-25 25 1 25分类中13类不做培养，要求重新留取标本；4、5类为合格标本；6类为气管穿刺液时，如未见白细胞，而鳞状上皮细胞10/低倍，亦应重新留取标本。,咽拭子标本的采集,标本采集应在用药前，最好在清晨，嘱患者用清水漱口，由检查者将舌向外拉，使悬雍垂向外牵引，将咽拭子超过舌根到达咽后壁或悬雍垂的后侧，在咽部肉眼见明显发红或有假膜处局部反复涂抹棉拭(注意不要碰着口腔粘膜)，放入无菌试管内立即送检。,尿液标本的采集,中段尿采集法导尿法膀胱穿刺取尿法留尿法,脓、创伤感染标本的采集,首先用无菌生理盐水拭净病灶表面的污染杂菌。对已破溃的脓肿用无菌的棉拭子取深部的脓液和分泌物；未破溃的脓肿消毒皮肤后，用无菌注射器抽取脓液及分泌物立即送检。如深部脓肿在送需氧培养的同时应考虑送厌氧培养，厌氧培养标本应隔绝空气立即送检。当创伤出血时，敷用药物2h以内及烧伤在12h内不应采集标本，此时获得阳性结果的机会很少。,穿刺液标本的采集,应在患者用药之前或停药12d后进行穿刺，标本应立即送检或保存于4冰箱。脑脊液标本应保温（2537），抽2ml直接注入小儿瓶中,同时再另抽12ml于无菌容器同时送检并立即送检。,粪便标本的采集,自然排便采集法直肠拭子采集法 有腹泻的病人，在送培养标本的同时可以送细菌涂片检查。抗生素相关性腹泻性腹泻，培养是阴性，但涂片检查却可以看到细菌比例失调，涂片临床意义大于培养。,病原微生物的检测方法,1.直接显微镜检测；2.病原体特异性抗原检测；3.病原体核酸检测；4.病原体的分离培养和鉴定；5.血清学实验,细菌耐药性检查,一、耐药机制：1.灭活酶的产生；2.细菌靶位置的改变；3.旁路途径的产生；4.细菌膜通透性的改变和主动泵出机制。,体外抗菌药物敏感试验（antimicrobial susceptibility testing in vitro):对敏感性不能预测的临床分离株进行药敏试验，以指导临床选择治疗药物；并了解常见病原菌耐药性的变迁，有助于临床经验性治疗选择用药和医院感染流行病学调查。,二、检测方法：1.K-B法； 肉汤稀释法2.稀释法； 琼脂稀释法3.E试验,中介（intermediate，I）:指测试菌可被测定药物大剂量给药后在体内能达到的浓度所抑制，或在测定药物浓集部位的体液中，如尿中被抑制。耐药（resistant，）:表示测试菌不能被在体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制。敏感（susceptible,S）:表示测试菌能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭。最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC):能抑制侍检菌肉眼可见生长的最低药物浓度，多以MIC(g/ml )数值表示.,常见病原微生物的分类：,细菌： 根据细菌的形态和染色性可分为：革兰阳性球菌、革兰阳性杆菌、革兰阴性球菌、革兰阴性杆菌。根据对氧气的需求与否可分为需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌。真菌：根据在人体分布部位不同可分为浅表真菌和深部真菌浅表真菌：主要引起各类皮肤病，如癣等深部真菌：有很重要的临床意义，常引起各类真菌感染，可分为霉菌、酵母菌、似酵母样真菌、双相真菌等。,寄生虫:从病人的血液、组织液、排泄物、分泌物或活体组织中检查寄生虫的某一发育虫期为最可靠的诊断方法。螺旋菌：血清学方法为常用方法支原体：培养结合血清学试验衣原体：检查细胞质内的包涵体有参考价值病毒：血清学、病毒培养和分子生物学方法,性传播疾病病原体检测,常见的临床类型：AIDS梅毒淋病非淋病尿道炎生殖道疱疹尖锐湿疣,梅毒病原体检测：暗视野显微镜检查：是诊断早期梅毒唯一准确、可靠的方法。梅毒血清学试验,淋病病原体检测：涂片检查：主要适用于男性急性淋病培养PCR,非淋病尿道炎病原体检测：支原体的分离培养血清学试验分子生物学方法,医院感染(nosocomial infections)：也称为医院内感染，是指在患者在住院期间获得的感染。医院感