地中海贫血诊断检查

地中海贫血诊断检查,地中海贫血概况,地中海贫血（Thalassemia）于1925年由Cooley和Lee首先描述，最早发现于地中海区域，当时称为地中海贫血，国外亦称海洋性贫血。这是一类由于常染色体遗传性缺陷，引起珠蛋白链合成障碍，使一种或几种珠蛋白数量不足或完全缺乏，因而红细胞易被溶解破坏的溶血性贫血。我国自然科学名词审定委员会建议本病的名称为珠蛋白生成障碍性贫血。,地中海贫血概况,定义：地中海贫血是遗传性慢性溶血性贫血；本质特征：由于珠蛋白基因的缺失或点突变使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成(mRNA,但肽链结构正常)，导致血红蛋白的组分改变，肽链失平衡， 导致RBC寿命缩短及过早破坏所致的慢性溶贫。,地中海贫血概况,地贫：珠蛋白基因缺失或缺陷使珠蛋白链的合成受到部分或完全抑制，造成链的合成减少，过剩的链聚合成四聚体，在红细胞内沉积，使红细胞变形性降低，不易通过微循环及脾窦与脾索间的基膜而造成红细胞的过度破坏。,地中海贫血概况,地贫：珠蛋白基因突变导致珠蛋白链合成受到部分或完全抑制，过剩的链聚合成不稳定的四聚体，在红细胞内沉积，造成无效造血和红细胞的过度破坏。,地贫地域分布,地中海贫血多见于黑人(黑人中25%至少有一个基因缺陷)，地中海贫血多见于地中海地区或东南亚。 我国以广东、广西、海南、四川、重庆等省区发病率较高，在北方较为少见。,地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一,中国南方不同高发地区人群携带率 1 23%,中国南方地中海贫血人群携带率,地贫的危害性,重型地贫 - 致死中间型地贫 - 致残,地贫纯合子：致死性出生缺陷,重型地贫:胎儿水肿综合征 早产死胎或出生前后死亡 可导致严重产科并发症 无理想治疗方法,重型地贫 出生后1年内发病 多于未成年前因严重贫血而夭折 输血和去铁治疗可维持,代价昂贵,致残,地贫的病因,人类珠蛋白基因的遗传缺陷所至;人类珠蛋白基因簇位于11p15.5。点突变（少数为缺失）地贫；人类珠蛋白基因簇位于16pter-p13.3。缺失（少数为点突变）地贫；,地贫的遗传方式, 常染色体隐性遗传病若夫妻为同型地中海型贫血的携带者，每次怀孕，其子女有1/4的机会为正常，1/2的机会为带因者，另1/4的机会为重型地中海型贫血患者，因此，在遗传咨询及产前诊断方面，这是非常重要的疾病,地贫的分类,根据遗传缺陷导致不同的肽链（等）合成障碍通常将地贫分为、和四个类型，以和地贫最常见。,地贫临床类型,临床上将地贫分为轻、中、重三个临床类型。 (1)轻型：轻度贫血或无症状，一般在调查家族史时发现。 (2)中间型：轻度至中度贫血，患者大多可存活至成年。 (3)重型：出生数日即出现贫血、肝脾肿大进行性加重，黄疸，并有发育不良，其特殊表现有：头大、眼距增宽、马鞍鼻、前额突出、两颊突出，其典型的表现是臀状头，长骨可骨折。骨骼改变是骨髓造血功能亢进、骨髓腔变宽、皮质变薄所致。少数患者在肋骨及脊椎之间发生胸腔肿块，亦可见胆石症、下肢溃疡。常见并发症有急性心包炎、继发性脾功能亢进、继发性血液病。,缺失型贫-静止型(地贫2，缺失1 )标准型(缺失型地贫1，缺失2 )中间型(Hb H 病，缺失3) 重型(Hb Barts 胎儿水肿综合征，缺失4 ) 。非缺失型地贫-中间型(Hb CS型Hb H 病)中间型(Hb QS型Hb H 病),地贫临床分型,地贫临床分型,重型地贫：又叫HbBarts水肿综合征，4个基因都缺失了(-SEA /-SEA) ，在孕后期或出生后即死亡。,地贫临床分型,中间型地贫：缺失3个基因( -/-SEA)或缺2个基因另有一个基因突变( T/-SEA) ，又叫HbH病，电泳大多可见HbH区带。Hb大多在 T60-100g/L左右。,轻型地贫：缺失2个基因( /-SEA)(-/ -)或2个基因突变( T / T ) T T T或缺1个基因另有一个基因突变(-/ -) ，又叫地贫1。轻度贫血或不贫血。,地贫临床分型,静止型地贫：缺失1个基因(/-) 或1个基因突变(/T ) 又叫地贫2，不会贫血。 T,地贫临床分型,轻型地贫：贫血在100g/L以上，杂合子 地贫。中间型地贫：Hb60-100g/L之间。双重杂合 子或杂合子地贫。重型地贫：Hb在60g/L以下。纯合子地贫或 双重杂合子地贫。静止型地贫：不贫血，杂合子地贫。,地贫基因的遗传缺陷(1),地贫多为基因缺失所致。根据基因缺失多寡将地贫分为4种类型： 正常: 共4个基因 地贫2：缺失一个基因； 地贫1：缺失2个基因； HbH病 ：缺失3个基因； HbBart,s胎儿水肿综合症：缺失所有4个 基因；,常见的地贫基因缺陷1)正常: /东南亚缺失型（-SEA)：- -/ (地贫1)右侧缺失型（-3.7）: - / (地贫2)左侧缺失型（-4。2）：-/ (地贫2),常见的地贫基因缺陷2),地贫的点突变（较少见）： HbC.S (2 基因编码第142终止密码子突变); HbQS(2基因第125密码子的三联碱基突变);,地贫基因的遗传缺陷(2),地贫多为基因的点突变所致。有些点突变使链完全不能生成，称0地贫；有些突变仅使链生成减少，称+地贫。据此可将地贫分为： +/ 0/； +/+； +/0； 0/0；,中国常见的地贫基因缺陷,地贫基因突变 地贫基因突变类型共27种； 广西、百色市常见的地贫基因突变类型： CD41-42(-TTCT);CD17(A-T); -28(A- G); IVS-654(C-T);CD71-72(+A)等。前二者 占71%。 地贫的基因缺失：少见；,临床表现和实验室检查,轻型地贫包括2、1、+/或0/地贫杂合子等。临床上几乎无症状； MCV和（或)MCH ,RBC脆性，新生儿脐血HbBart,s含量1%-15%之间（2、1）或肽链分析链+（地贫1）、血红蛋白分析HbA2(+/或0/地贫杂合子)；家系调查其父母中一方或双方为或地贫杂合子；此型无需治疗。,中间型包括HbH病、+/+、+/0、0/0合并地贫等。婴儿期以后渐出现贫血，为小细胞低色素性中度贫血，地贫貌-+，肝脾轻至中度肿大； MCV和（或)MCH ,RBC脆性，Hb电泳可见HbH和/或HbBart,s区带（HbH病）、HbF 区带增浓HbF%之间（地贫）；父母双方均为或地贫的杂合子；,重型地贫 HbBart,s胎儿水肿综合症（重型地贫）：严重的孕毒症；流产、死产或产后不久死亡，胎儿水肿，大胎盘，HbBart,s含量（80%）；,重型地贫：包括+/+、+/0、0/0；地贫貌+，小细胞低色素性重度贫血（生后3个月出现），肝脾肿大明显，体格发育迟晚；铁超负荷器官功能障碍如心衰等;少年早夭;MCV,RBC脆性，Hb电泳可见HbF 区带增浓HbF，%；父母双方均为地贫的杂合子；,诊断,临床特点实验室检查父母调查阳性基因分析,地中海贫血检查,1.血细胞分析2.红细胞脆性试验3.血红蛋白分析4.地贫基因检测 第1-3项为筛查项目,地中海贫血初筛检查,1.血细胞分析MCV 80fl 和（或）MCH 27pg ,则高度怀疑为地贫; 平均红细胞体积（MCV）80fl为地贫表型阳性，地贫和中间型、轻型地贫和部分静止型地贫基因携带者均为阳性，但有部分静止型地贫基因携带者是正常的。,地中海贫血初筛检查,2.红细胞脆性试验红细胞渗透脆性试验阳性（ROFT ; 0.60 ): 即可怀疑为地贫; 红细胞脆性试验在基层单位可用，但在有血细胞分析仪的单位就不应该单用于地贫筛查，此项检测误漏诊率高，且英美地贫筛查指南中均没有此项目。,地中海贫血初筛检查,3.血红蛋白分析HbA2 3. 5 % ,则为地贫基因携带者HbF:中间型和重型地明显增高新生儿脐血HbBarts定量：HbBarts达1%-2%为 静止型地贫基因携带者 ，HbBarts达5%-15% 为轻型地贫 ，HbBarts达25%为HbH病。,地中海贫血确诊试验,地贫诊断基因芯片地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多重PCRASO寡核苷酸探针点杂交DNA测序,DNA诊断技术, 多重PCR （multiplex PCR） 等位基因特异性性寡核苷酸杂交（ASO） 反向点杂交 （RDB） 变性高效液相色谱（DHPLC） 基于微孔板 (microtiter well-based ) 高通量检测 实时PCR (real-time PCR),单管多重PCR,PCR-ASO,GenotypeFather CDs41-42 (CTTT) / N MotherIVS-2-654 (CT) / N FetusCDs41-42 / IVS-2-654Normal control N / N,鉴别诊断,缺铁性贫血遗传性球形红细胞增多症传染性肝炎或肝硬化,预防,地贫宣教地贫筛查遗传咨询、风险率计算、建议;地贫杂合子间的婚配应进行地贫高危胎儿的产前诊断,地贫的人群筛查,育龄妇女(或孕妇)的筛查新生儿筛查学生等群体的筛查,产前诊断,产前诊断的指征及告知和知情同意产前诊断的取材:绒毛/羊水/脐带血/外周血或宫 颈液胎儿细胞产前诊断的流程及其采用的方法,地贫的婚前或产前筛查原则,1.地贫高发区夫妻双方要做地贫筛查。2.血液学表型结合分子诊断，必要时进行家系 分析，综合各种检查结果才能得出结论。3.表型与基因诊断结果有不相符时，要谨慎处理，需用其它分子诊断方法进一步分析。,地贫的产前诊断流程:,产科筛查MCV 80fl和MCH 27pg Hb 分析遗传咨询:HbA2(-Thal) HbA2 或链阳性(thal-) 一方HbA2正常,另一方HbA2正常方进行基因分析;一方链阳性,另一方链阴性阴性方进行基因分析; -一方HbA2正常,另一方HbA2双方进行基因分析;如夫妇双方为同类型地贫 抽羊水进行地贫的基因分析 告知结果*,地贫筛查后哪些情况需做地贫基因检测？,1.Hb正常或轻度下降，MCV下降和（或）MCH下降，但电泳没有阳性发现的（HbA2检测误差，轻型或静止型地贫 ），要做地贫基因检测。2.夫妇双方一方确定为（ ）地贫 ，另一方做地贫基因。,地贫的基因分析局限性,1.由于分子诊断技术本身的局限性，地贫基因诊断的误诊及漏诊率约2%。,地贫的基因分析局限性,2.只能检测三种常见的缺失型（