精子形态分析及染色.ppt

精子常规分析与形态学染色 河南省人口和计划生育科学技术研究院 孕前优生健康检查临床检验操作技术培训 精液常规检验 采集 采集前必须禁欲2 7天 采集后立即送检 存放时间不要超过1小时 运送时温度与体温相近 外观和气味 正常呈灰白或乳白色 厚稠胶冻状 液化后呈乳白色半透明状 精子数量少 精液透明且稀薄 精液中有较多红细胞 可呈红褐色 黄色精液见于精液中有较多脓细胞 或服用药物 量 正常 2mL 下限是1 5mL 小于1mL 视为异常 见于精囊腺和前列腺病变 液化 室温正常5 10分钟液化 20 40分钟可完全液化 1小时仍不液化应视为异常 一般与缺乏蛋白水解酶有关 粘稠度 精液粘稠度异常可影响精子的活力和穿透力 用吸管吸入精液 滴落精液观察 粘稠度增加时 精液悬滴可形成 2cm的拉丝 PH值 正常精液PH呈弱碱性 7 2 滴PH试纸 30秒 精液的PH过低 可影响其对阴道酸性环境的调节作用 影响精子活力 亦可能与精囊发育不良有关 精子浓度的参考值下限为 15X106 mL精子总数的参考值下限为 39X106 mL精子密度过低或无精见于 1 睾丸生精功能异常2 输精管 射精管 精囊存在缺陷3 精索静脉曲张4 生殖道炎症5 流行性腮腺炎并发睾丸炎6 绝育手术后7 放射性照射 有害化学物质污染及药物作用等 精子存活率 活精子数量在精子总数量中所占的比例 伊红 苯胺黑染色 50uL精液与等体积的染液混匀 等待30秒 采用拉薄技术制成涂片 空气中干燥 高倍镜观察 活精子头部成白色或淡粉红色 死精子头部呈红色或暗粉红色 正常参考值 参考下限是58 70 射精后1h 40 50 射精后3h 20 30 射精后6h 精子活力 正常精子的活动力 精子向前运动的能力 计数200个精子的分级情况 WHO把精子的活动力分为4级 5版分3级 d 不动PR 前向运动c 非前向运动NP 非前向运动b 慢速或呆滞的前向运动IM 不活动a 快速向前运动 正常为 a级 25 或a b 50 5版 的参考值下限是前向运动精子 PR 32 精子总活力 PR NP 40 临床意义 活力下降 弱精子症 见于液化不良 粘稠度增高 精液凝集 精子结构异常 内分泌功能异常 精索静脉曲张等 精子细胞形态学检查 1 正常精子形态 正常在精液中占15 5版 参考下限为 4 2 畸形精子 头部形状 大小异常 体部异常 尾部异常 临床意义 精子形态异常与生殖系统的感染 外伤 雄激素变化 化学药物中毒及遗传因素有关 3 生精细胞 精原 初级精母 次级精母 精子细胞 正常时少量 当曲精管的生精能力受到损害时 精液中可出现较多的病理性幼稚细胞 4 其他成分红细胞 极少 血精症 睾丸瘤 前列腺瘤白细胞 1X106 mL 生殖道炎症癌细胞 输精管恶性肿瘤 人精子形态模式图 头部 轮廓规则 顶体清楚 顶体帽至少覆盖头部表面的1 3 中段 细长 不超过头宽1 3 轮廓直而规则 尾部 细长 弯曲不卷曲 正常形态精子的概念 把 具备潜在受精能力精子 亚群 的外观作为形态正常的标准 人为设定临界标准 规定 临界形态精子都是异常 操作前准备 一侧有磨砂载玻片盖玻片 24mmX50mm 10uL移液器及吸头纱布或纸巾记号笔巴氏染液或Diff染液 精液涂片的制备 每份新鲜的精液标本应制备两张或更多的涂片 以防染色发生问题或载玻片破碎 每次取样前要充分混匀精液 对于未稀释的精液 采用拉薄技术 对于已洗涤的精液 采用移液管法 涂片前准备 1 用纱布或纸巾擦干净载玻片的两面2 用记号笔在载玻片的磨砂处标记上编号 日期 涂片的方法 充分混匀待涂片精液标本 根据精子浓度 用移液器去5 10uL的精液滴在载玻片的一端 立即用第二张载玻片的非磨砂端以45 角 角度越小 涂片越薄 沿第一张载玻片的表面移动并接触精液滴 然后沿载玻片的长轴缓慢拖回拉片 约一秒 速度越快 涂片越厚 制成一张涂片 对于高粘稠或低密度或充满碎屑精液 稀释精浆或离心去精浆 方法 取0 2 0 5mL精液 加10mL生理盐水 800g离心10分钟 除去大部分上清液 轻轻拍打试管 使精子团重新混悬于剩余的上清液中 必要时可加生理盐水重复洗涤一次 洗涤后的精子浓度在20 50X106 ml为好 洗涤的目的是减少背景杂质 并减少背景着色 如图 取5 10uL悬浮液于清洁载玻片上 用滴管使精液在载玻片上展开 然后在400倍光镜下扫视一下确保精液涂片均匀 400倍下每个视野20 50个精子 并且没有精子成团或重叠 注意 1 精液标本完全液化 充分混匀 2 快速取样 使精子没有时间从混悬液中沉降下来 3 重复取样前 再次混匀精液标本 4 精液滴在载玻片上 立即涂片 不要放置数秒后再涂片 染色步骤 1 精子悬液涂片制备完成后 水平放置 空气中自然干燥 2 加A液覆盖组织片室温反应15秒 将玻片直立吸水纸上除去多余染液 3 加B液覆盖组织片室温反应10秒 将玻片直立吸水纸上除去多余染液 4 加C液覆盖组织片室温反应15秒 将玻片直立吸水纸上除去多余染液 5 流水中浸洗10 15次以除去多余染液 6 将玻片垂直竖立以去除水分 待完全干燥 7 油镜下观察精子形态 结果观察 1 精子顶体区染淡紫色 顶体后区染深紫色 精子体尾区染成淡红色 2 世界卫生组织 WHO 精子缺陷类型分类如下 1 正常精子形态 2 小头梨形头顶体区 70 顶体后区空泡 2过多残留胞浆中段粗 弯曲插入双尾弯曲 3 圆形头锥形头不定形头大头针状顶体区 70 顶体区2中段粗不规则插入 4 扁平底不规则头顶体区 40 中段粗不规则插入弯曲 5 顶体区 70 顶体后区空泡中段弯曲粗