中国北方汉族人群中MMPs基因多态性与非创伤性股骨头坏X遗传易感性的关联分析.doc

中国北方汉族人群中MMPs基因多态性与非创伤性股骨头坏X遗传易感性的关联分析 中华老年骨科与康复电子杂志2019年4,q第5卷第2期Chin JGeriatrOrthopRehabil(Electronic Edition)，April2019，V015，No2+68+基础研究中国北方汉族人群中MMPs基因多态性与非创伤性股骨头坏死遗传易感性的关联分析安非梦一，2曹玉举3王建忠2【摘要】目的筛查MMPs系统中可能与非创伤性骨坏死发病相关的单核苷酸多态性(SNP)位点，为骨坏死的早期诊断和预防提供遗传学依据。 方法在这项病例对照研究中，设计非创伤性骨坏死病例组585例，对照组507例，分别提取外周血基因组DNA，应用MassARRAY分型技术对所选MMPs系统中9个基因上的42个SNP位点进行分型，并用卡方检验和SNPStats软件对SNP分型结果进行统计分析，评估所选位点与骨坏死发病的关联性。 结果在中国北方汉族人群中，MMP8基因上的璐 11225394、MMP3基因上娼522616可能与增加骨坏死的发病风险相关，MMP3基因上的m 650108、MMP9基因上的娼2274755可能与降低骨坏死的发病风险相关。 另外，我们在单倍体分析中还发现MMP9基因中rs3918249，体2274755，rs3918254三个位点的“TGC”、“CTC”单体型较野生单体型携带者降低骨坏死发病风险更显著。 结论MMP 3、MMP 8、MMP9基因多态性与非创伤性骨坏死发病的遗传易感性相关。 【关键词】股骨头坏死；多态性，单核苷酸；金属蛋白酶；关联分析Association betweengeic polymorphisms of M_MPs and the risk of non-traumaticosteonecrosis ofthe femoral head in theHan populationof northernChina AnFeimenz,Cao YujuJ,Wang Jianzhon92Ilnner MongoliaMedical University,Hohhot010050,China；2Department ofTrauma Orthopedics,the Sec-ondAffiliatedHospital ofInnerMongoliaMedical University,Hohhot010030,China；JDepartment ofScien-tifw Research,Zhengzhou TCMTraumatology Hospital,Zhengzhou450000,ChinaCorresponding authorWangJianzhong,Emailwjzwan126AbstractObjectiveThe aimofthis studywas toidentify theassociations betweengenes selectedfromMMPsTIMPs systemand therisk ofNONFH，which Canprovide thegeic basisfor theearly diagno-Sis andpreventionMethods Inthecase-control study,we recruited585patients whowere diagnosedwithNONFH and507controlsPeripheral bloodDNA Wasextracted，respectivelyWe genotyped42SNPs chosenfrom9genes of MMPs bySequenom MassARRAYThe chi-square testand SNPStatsanalysis softwarewereused tomake statisticalanalysis andevaluate theassociation betweenSNPs andNONFHResults111e肋脚rsl1225394SNP,the MMP3rs522616SNP wereassociated withan increasedrisk ofNONFHThe MMP3rs650108SNP,the MMP9rs2274755SNP wereassociated witha decreasedrisk ofNONFHInaddition,the haplotype”TGC”and thehaplotype”CTC”ofMMP9were foundto bemore likelyto decreasetherisk ofthe NONFHthan thewiId haplotypeConclusionn增geic polymorphismsofMMP3MMP8MMP9are related to therisk ofnon-traumatieosteoneerosis offemoral head in theHan populationofnorthern ChinaKey wordsFemur headnecrosis；Polymorphismsingle-nucleotide；Matrix metalloproteinases；Association study非创伤性股骨头坏死(nontraumatic osteonecrosis offemoralhead，NONFH)是一种顽固性骨代谢疾病，如果不治疗，骨坏死通常会发展为股骨头塌陷和随后的髋关节退行性关节炎，最终整个髋关节DOI103877cmajissn2096-0263201902002基金项目国家自然科学基金支持(81160228，81260284，81660378)工作单位010050呼和浩特，内蒙古医科大学。 ；010030呼和浩特，内蒙古医科大学第二附属医院创伤一科2450000郑州，郑州中医骨伤病医院科研科通信作者王建忠，Emailwjizwan126tom万方数据69中华老年骨科与康复电子杂志2019年4)9第5卷第2期Chin JGeriatrOrthopRehabil(ElectronicEdition)，April2019，V015，No2功能丧失。 在临床工作中发现，同等条件暴露于激素和酒精等危险因素下，只有部分患者发生骨坏死，说明qg,J伤性骨坏死是遗传因素和环境因素共同作用而导致的复杂性疾病，具有遗传易感性。 因此，从遗传学角度探索骨坏死的发病机制，早期发现易感人群，及时干预，积极预防，将目前非创伤性骨坏死的治疗模式从病后手术转移到病前预防，具有重要社会意义。 基质金属蛋白酶家族(matrix metalloproteinases，狲织，)是一组能够参与降解包括骨在内的全身各种组织细胞外基质的蛋白酶家族，被认为是组织降解和重塑的关键调节因子”一1。 基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitorsof metalloproteinases，撇)是一组通过与MMPs形成TIMP-MMP复合物晶体结构来抑制MMPs和MMPs前体激活的基质金属蛋白酶天然抑制剂HI。 在我们前期研究已经证实彻编彻织，系统与骨坏死发病相关的基础上，本次研究重点检测中国北方汉族人群非创伤性骨坏死患者与健康对照组该系统基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNPs)的差异，选取该系统中9个基因上的42个SNPs进行基因测序，研究中国北方汉族人群中，zz风仍徊，系统基因位点突变与非创伤性骨坏死发病风险之间的关系。 材料与方法 一、纳入及排除标准非创伤性骨坏死患者的纳入标准临床诊断基于其临床症状与体征，如髋关节疼痛及活动受限、患肢短缩等，进一步诊断根据影像学检查在X线下显示股骨头高密度影、关节间隙变窄及髋关节面受损不平，如果x线检查未能发现股骨头坏死影像学表现，将通过磁共振成像(MRI)JJ1以诊断。 MRJ可诊断但在平片上无异常的患者也被选为本研究的对象。 非创伤性骨坏死患者的排除标准 (1)患者为创伤性股骨头坏死或其他类型髋关节疾病； (2)有家族遗传病史的患者； (3)涉及心脏、肝部、肺部、肾脏、脑部及其他慢性疾病，同时也排除肿瘤、严重代谢疾病及内分泌失调。 对照组纳入原则为无髋关节疼痛，骨盆平片未见任何病变且应除外长期饮酒及使用类固醇史人群。 二、研究对象招募585例xx年9月到xx年1月期间就诊于郑州中医骨伤病医院的非创伤性骨坏死患者作为病例组，并在同样时间段内连续选入507例于该医院体检中心体检的健康人作为对照组。 所有参与者均为随机选择的遗传学角度没有关联性的北方汉族人群。 采集每位病例及对照组5mL的静脉外周血，盛放于乙二胺四乙酸抗凝管中，置于一800C低温冰箱保存，以备DNA提取用。 本研究采用标准流行病学问卷收集个人资料，且己获得所有研究对象的知情同意，符合伦理学的各项规定，并通过经郑州中医骨伤病医院伦理委员会审核、批准。 三、实验方法 (一)位点选择本次研究共计选择了42个SNP位点，分布干MMP 7、MMP 8、MMPl、MMP 3、MMP 2、TIMP 2、MMP 9、SYN 3、TIMP3等9个基因上，所选的SNP位点在Hapmap数据库(hapmapncbihimnihgovindexhtmlen)中进行查询，只有其最小等位基因频率在公布的中国北京汉族人群中大于005才会选作候选位点。 (二)DNA提取采用西安金磁纳米生物技术有限公司全血DNA纯化试剂盒，按说明书进行DNA提取操作。 (三)DNA浓度及纯度测定采用NanoDrop2000分光光度计测定DNA浓度及纯度。 (四)引物设计本研究采用SequenomMassARRAYAssay Design30Software软件对研究挑选出的SNP位点进行单碱基延伸引物设计。 后将其送到上海生物工程技术服务公司进行合成。 (五)SNP分型本研究中采用SequenomMassARRAY SNP基因分型技术对所选择的SNP位点进行分型。 使用SequenomTyper40软件读出分型结果。 四、统计学分析数据采用SPSSl80软件(SPSS、Chicago、IL)进行统计分析。 在本研究中，所有的P值均是双向的，P 病例组与对照组中所有SNP位点的基因型频率均使用双侧矿检验计算。 病例组和对照组等位基因和基因型频率之间的差异用卡方Fisher精确检验来计算。 采用Fisher精确检验评价对照组各SNP频率与哈迪温伯格平衡(HWE)的偏离，评估对照组的可靠性，若PO05，则说明满足哈迪温伯格平衡。 为了使结果更加具万方数据中华老年骨科与康复电子杂志2019年4月第5卷第2期Chin JGeriatrOrthopRehabil(Electronic Edition)，April2019，V015，No2有可信度，使用年龄性别校正后的无条件Logistics回归模型，计算等位基因基因型的相对优势比odds ratios(锨s)及其95的置信区间confidence intervals(CIs)，衡量各位点风险等位基因对患骨坏死作用的效应大小；并利用SNPStats在线软件在4个基因模型(共显性、显性、隐性、加性模型)下分别分析SNP位点与疾病的关系。 此外，还使用Haploview42软件对SNP位点之间的连锁不平衡进行分析。 结果 一、样本的基本信息此次研究收集了585例(男472例；女113例)非创伤性股骨头坏死患者作为病例组，507例(男396例；女111例)健康对照组。 卡方检验的结果显示性别的分布在病例组和对照组之间不存在统计学差异(P=0293)。 而独立样本t检验的结果显示年龄在实验组和对照组中存在统计学差异(P001)，在后续的统计分析过程中需要对年龄和性别进行矫正。 病例组和对照组基本信息见表l。 表1病例组与对照组样本基本信息 二、SNP位点在等位基因模型下与骨坏死的相关性表2中列出了所选42个SNP位点的基本信息，包括哈迪一温伯格平衡检验及其P值(PHWE)，其中rs2071230位点在对照人群中偏离哈迪温伯格平衡(PHWE005)。 结果显示在等位基因模型下，有4个SNP位点与骨坏死患病风险有关。 MMP8基因上的rsll225394，MMP3上的rs522616可增加患骨坏死的风险；MMP3基因上的rs650108，MMP9上的rs2274755可降低患骨坏死的风险。 三、遗传模型分析结果用无条件Logistics回归及遗传模型评估风险等位基因在共显性、显性、隐性、加性模型下的效益大小，并按照性别、年龄修正结果。 在表3中发现位于MMP8上的rsll225394位点在显性模型和加性模型下都与增加骨坏死患者发病风险显著相关。 位于MMP3上的rsrs650108位点在显性模型和加性模型下都与降低ONFH患者发病风险显著相关；rs522616位点在隐性模型和加性模型下与增加ONFH患者发病风险显著相关。 位于MMP9上的rs2274755位点在共显性、显性和加性模型下都与降低ONFH患者发病风险显著相关。 四、连锁不平衡与单体型结果分析在复杂疾病的发生过程中，某些遗传位点之间可能存在着非常紧密的联系，因而我们用软件评估了健康对照组各位点之间的连锁不平衡程度，并构建单倍体模型。 发现MMP9上的3个位点(rs3918249，rs2274755，rs3918254)连锁紧密，构成一个单体域(图1)；MMP3上的8个位点(rs 639752、rs 650108、rs 520540、rs 646910、rs 602128、rs 679620、rs 678815、rs522616)紧密连锁，构成一个单体域(图2)。 接着对以上2个单体域进行无条件Logistic回归分析，在经过年龄和性别校正后，发现MMP9基因中rs3918249，rs2274755，rs3918254三个位点的单体型“TGC”携带者、单体型“CTC”携带者相对于野生单体型“CGC”显著降低了患骨坏死的风险。 结果见表4。 讨论本次研究最有价值的结果是在中国北方汉族人群中，MMP8基因上的rsll 225394、MMP3上的rs522616可能与增加骨坏死的发病风险相关，MMP3基因上的rs 650108、MMP9上的rs2274755可能与降低骨坏死的发病风险相关。 MMP9中rs3918249，rs2274755，rs3918254三个位点的“TGC”、“CTC”单体型较野生单体型携带者降低骨坏死发病风险更显著。 一、MMP8与骨坏死的相关关系MMP8基因位于11号染色体长臂(11q22)，编码基质金属蛋白酶一8，MMP8又称中性粒细胞胶原酶或者胶原酶一2，主要在骨髓中产生并在中性粒细胞和巨噬细胞中表达陋，。 骨髓间充质干细胞(bonemesenchymal stemcells，BMSCs)具有向成骨细胞和破骨细胞分化的潜能。 一般来说，破骨细胞吸收的骨量和成骨细胞形成的骨量，在新陈代谢过程中保万方数据7l+中华老年骨科与康复电子杂志2019年4月第5卷第2期Chin JGeriatrOrthopRehabil(ElectronicEdition)，April2019，V015，No2表2候选基因位点的基本信息SNP基因位置等位基因(AB)MAF病例组对照组HWEP值oR值95Cy下限上限P值rsl4983rsl7352054rSl050xxrsl1568818rsl7098318rs3740938rsxx390rSl940475rsll225394rsI1225395rs5854rS2071230fs2239008鸭470215rs2071232rS639752rs650108rs520540rs646910rs602128rs679620rS678815rs522616rsl053605rs243849rs243847rs243832rS720lrS2277698rsxx196fs7342880rsll654470rsxx24lrs4789936rs3918249rs2274755rs3918254rs96193llrs715572rs8136803rSll547635MMP711(222AG0261026408200980811190848MMP71lc222CA0121012206790990771280948MMP711_c222TC026202640820099082I200939MMP711_(222CT0096009005841070801440631MMP711(222AG0094008705691090811470557MMP811c222AG0243023506211040861270680MMP811(222GA0276027609121000831200981MMP811c222TC038703690775108091I290378MMP81lc222TC011200860563134I001790047MMP811q222AG0379036007731080911290367MMPl11q222AG0095009001651060801420680MMPI11q222GA018601900042。 097079I210811MMPl11q222GA0491048009291050881240602MMPl11q222CT O095O0900165106O801420680MMP，11q222TC0483047005941050891240560MMP311q222CA0318034501160880741060177MMP311q222GA0391043501470840710990040MMP311q222AG031803450116088074I060177MMP311q222A厂r0072008610000820601130224MMP311q222AG0320034402350900751070234MMP311q222TC0318034702020880741050156MMP311q222GC0319034701410880741050165MMP311q222CT0396035409231201011420044MMP216q122TC0112012908430850661100217MMP216q122TC0191016710001180951470146MMP216q122Cr0415040501171040881240634MMP216q122CG0362038203470920771100353MMP216q122CA0245025503490950781150603TIMP217q253TC0202020310000990811220942TIMP217q253CG039403840452104088I240646TIMP217q253AC0166014807251140911440253TIMP217q253CT0228023810000950781160601TIMP217q253CT0161016304140990781240897TIMP217q253TC0250028109130850711040111MMP920q1312TC0297032206130890741060191MMP920q1312TG0116015107290740580950017。 MMP920q1312TC0203018706641100891360372SYN322q123CT0083006807201240901710188TIMP322q123AG0342033909211010851210897TIMP322q123TG0041004910000820551240351TIMP322q123AG0138013106961060831350660TIMP322q123TC034403491000098082I170819注；SNP表示单核苷酸多态性；HWE表示哈迪温伯格平衡；MAF表示最小等位基因频率；”表示P 非创伤性ONFH发生的机制之一是骨吸收增加和或骨形成减少。 而MMP8的表达增加可以促进破骨细胞的分化和活性盯。 此外，成骨细胞参与骨基质的降解和I型胶原的合成，I型胶原在BMSCs艄细胞分化过程中起着重要的作用【8401，且I型胶原是骨细胞外基质的主要成分，与骨吸收有关?21。 研究表明MMP8对间质I型胶原断裂具有底物特异性”31。 综上，我们推测MMP8可能通过以上机制增加骨坏死发病风险。 Rsll225394位于MMP8基因内含子区域。 Morgan等”41证明rsll225394与增加溃疡性结肠炎的风险有关。 然而，另有研究表明该位点与中国北方人群酒精性ONFH相关但与激素性ONFH无关“5。 61。 这与我们的结果不一致，这种不一致的原因可能是激素引起的ONFH和其他原因引起的ONFH存在遗传学差异。 这些数据说明了SNPs所涉及机制的复杂性和多重的相互作用网络，这可能会促进ONFH的发生。 二、MMP9与骨坏死的相关关系MMP9是一种细胞外基质代谢酶，在骨重塑过程中起着重要的作用。 研究发现在软骨组织中，破骨细胞过量的表达MMP9对消化I型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖有重要作用n71。 还有研究发现由RANKL激活的MMP9的表达在破骨细胞生成中起着重要作用m20】。 Fuiisaki等3在细胞实验中发现MMP9能被RANKL诱导表达并在白介素一1存在的情况下促进骨吸收。 通过以上结论，我们推测破骨细胞表达的MMP9在骨科疾病中有着不可忽视的作用。 另外有研究发现MMP9在气道过敏性炎症及慢性阻塞性肺疾病中能促进炎症细胞的表达口2231。 而不管是炎症反应还是成骨细胞、破骨细胞平衡的打破都可能进一步导致ONFH的发生。 Rs2274755位于MMP9基因内含子区域。 Jim6nezMorales等旺41在一项墨西哥人群的研究中发现rs2274755基因多态性与小儿哮喘的发病风险相关，这与Nakashima等口51在日本人群中的研究结果一致。 此外Nakashima等口51还做了相关功能研究，他们发现MMP9基因功能位点突变可能会增加哮喘的发病风险。 在本研究中，我们发现rs2274755位点突变与减少ONFH的发病风险相关。 但rs2274755位点突变如何发挥作用尚不明确，需要进一步设计功能试验。 三、MMP3与骨坏死的相关关系MMP3基因编码的蛋白酶是内源性蛋白水解酶家族中的一员，由软骨细胞产生，可以降解除葡萄糖以外的多种细胞外基质成分，包括参与骨吸收过程中骨基质的降解过程口61。 Williams等雎71研究发现MMP36A6A多态性与胶原蛋白的降解相关，因此影响细胞外基质的降解，最终导致骨与软骨骨质流失，这一途径正是股骨头坏死的重要病理机制之一。 MMP3基因的表达及多态性在成骨细胞、破骨细胞、类骨质及破骨前体细胞的形成起重要作用口81。 结合本实验结果rs650108位点与降低骨坏死发病风险相关，rs522616与增加骨坏死的发病风险相关，我们推测，MMP3基因多态性一方面通过参与调控骨细胞外基质的降解，另一方面通过调节成骨细胞、破骨细胞的形成及两者之间的动态平衡，在骨坏死发病过程中综合调节骨代谢。 而对于以上两个位点相反的结果，我们认为同一基因上的不同位点、不同基因型的变异会对同一疾病的病理进程产生不同的影响。 此外，多个研究证实rs650108位点与包括原发性硬化性胆管炎胆卅、乳腺癌p 01、冷冻肩口1，在内的多种疾病相关。 在这些疾病的发生中，该位点的变异是影响炎症反应与组织纤维化反应的重要因素，而骨坏死的病理进程恰恰与骨吸收与骨重建过程中的纤维化反应密切相关。 因此我们推测rs650108位点变异还可能通过影响骨组织纤维化，进而影响骨吸收与骨重建，在骨坏死的发生发展中起作用。 本研究也存在一定局限性，由于非创伤性骨坏死是一种多基因、多因素参与、多阶段进行的复杂性疾病，其发病受到先天遗传因素和后天环境因素的共同作用，本研究仅选择了MMPTIMP系统中9个基因上41个SNPs进行研究，并不是很全面，因而在后续的研究中，需进一步扩大样本量、选择更多更全面的位点并设计相关功能试验来验证本实验结果。 万方数据中华老年骨科与康复电子杂志2019年4月第5卷第2期chin JGeriatrOnhopRehabil(E1ectronicEdition)，A叫12019，v015，No274参考文献1Nagase HVMurphy GStmLlre andction ofmatrix metalloproteinases andTIMPsJcardiovasc Res，xx，69 (3)562-5732Xue MT，Jackson CJTargeting matrixmetallopmteases toimpmVecutaneous woundhealingJExpert OpinTher1a唱ets，xx，10 (1)143155，3Ortega N，Behonick D，Stickens D，et aIHow proteasesreguiatebone morphogenesisJxx，9951091164FemandezCatalan C，Bode W，Huber R，et a1_Crystal stnlctIlreofthe plexfomed bythe membmype1一matrix metalloproteinase withthe tissueitlllibitor ofmetalloproteinases-2，the s01uble pro-gelatinase AreceptorJEMBO J，l998，17 (17)5238-52485GomisRnth FX，Maskos K，Betz M，et al-Mechanism ofinhibitionof thehuman matrix metalloproteinase stromelysinl byTIMP-lJNatIlre，1997，389 (6646)77_8l6Van LintP，Libert CMa倒xmetalloproteinase一8cleaVage canbe decisiVeJCytokine Gro州h FactorRev，xx，l7 (4)2l7-2237Pandmvada SN，Gonzalez OA，Kirakodu S，et a1Bone biologyrelated gingivaltranscriptome inageing andperiodontitis innon-humanprimatesJJClinPeriodontol，xx，43 (5)408-4178Mittag F，Falkenbe唱EM，JancZyk A，et a1Laminin-5and typeI collagen promoteadhesion and osteogenic di何brentiation ofanimal semmfree expandedhuman mesenchyma】stromal cellsJOnhopRev(Pavia)，xx，4 (4)e36，9Salasznyk RM，Klees RFBoskey A，et al_ActiVation ofFAKis necessary forthe osteogenicdifrerentiation of human mesenchymalstemcells onlaminin-5JJ CellBiochem，xx，1OO (2)49951410Grzjbovskis M，Urtane I，Pilmane M，et a1Speci6c signalingm01e-cule exprcssionsin theinterradjcular s印tllm jndjfferent age伊oupsJ】stomatolo到a，201l，13 (3)8l_8611Syggelos SA，Ale仃as AJ，Smirlaki I，et a1Extracellular matrixdegra-dation andtissue remode“ng inperiprosthetic looseningandoste01ysisfocus onmatrix metalloproteinases，their endogenoustissue inhibitors，and lhepmteasomeJxx23080512Hsu SM，Fanger HThe useof antiavidinantibody andavidin_biotinperoxidase plexin immunopemxidasetechnicsJ】Am JclinPathol，1981，75 (6)816-82113Hasty KA，Je衢ey JJ，Hibbs MS，et a1The collagensubstrate specifjc时ofhumanneutrophil collagenaseJJ Biolchem，1987，262 (21)10048-1005214Morgan AR，Han DY，Lam wJ，et a1Geic Variationsin matrixmetaIlopmteinasesMay beassOciatedwith increasedrisk ofulcer_atiVe c01itisJHum Immunol，2叭1，72 (11)1117一112715Du JL，Jin TB，CaO YJ，et a1Association betweengeic pOlymor-phismsofMMP8andtheriskofsteroidinduced osteonecrosisof thefemoralheadinche populationof northemChinaJMedicine(Baltimore)，xx，95 (37)e479416Chen丁Y，Liu WL，Cao YJ，et a1MMP一3and MMP-8sin91enucleotidep01ymorphisms arerelatedtoalcoh01induced osteonecrosisofthefemoralheadinChinese malesJOncota唱et，xx，8 (15)251772518817Itoh T，Matsuda H，ranioka M，et a1The mle ofma仃ix metallopr0一teinase-2and matrixmetalloprot e】nase-9in antlbodymduced artllri-tisJJImmun01，xx，169 (5)26432647I8Kusano K，Miyaura C，Inada M，et aIReguIation ofmatrix metaIIoproteinases(MMP一2，-3，一9，and13)by interleukin1and interleu-kin6in mousecalvariaAssociation ofMMPinduction withbone resorptionJEndocrinology1998，139 (3)1338一134519Lorenzo JA，Pilbe锄CC，Kalinowskj JF，et al_ProductiOn ofboth92-and72kDa gelatinasesby bonecellsJMatrjx，1992，12 (4)28229020Wit仃ant YTheoIeyre S，Couillaud S，et al_Regulation ofosteoclastprotease expressionby RANKLJBiochemBiophys ResCommun，xx，310f3)77477821Fujisaki K，TanabeN，Suzuki N，et a1Receptor actiVatorofNFk印一pa B岵and inducesthe expressionof carbonicanhydrase II，cathep-sin K，and matrixmetalloproteinase一9in osteoclastprecursOrRAW2647ceIlsJLife Sci，xx，80 (14)1311131822Am五1inei C，C趸nIntuID，Giuca SE，et a1Mamx metalloproteinasesinvolVementinpathologic condjtionsJRomJMorpholEInbry01，2叭O，51 (2)215-22823Beeh KM，Beier J，Kommann O，et a1Sput啪matrix metalIoproteinase-9，tissue inhibit