饲料中霉菌毒素检测技术

饲料中霉菌毒素检测技术,交流提纲,一、饲料中霉菌毒素的危害,二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法,三、ELISA法的操作要点及注意事项,质量第一 公正科学 及时准确,四、 HPLC法在饲料霉菌检测中的应用,一、饲料中霉菌毒素的危害,1、什么是霉菌毒素？,霉菌毒素是霉菌产生的次级代谢产物,次级代谢产物,一、饲料中霉菌毒素的危害,2、霉菌毒素产生的原因,霉菌无处不在，它们可在农作物生长、收获、运输和储存期间生长并产生毒素农作物作为饲料原料在生产、销售、储存、运输过程中如果受到霉菌污染也会发生霉变、遭受霉菌毒素污染,一、饲料中霉菌毒素的危害,3、霉菌毒素的种类,现已报道的霉菌毒素大约有300种在饲料中常见的、对人和动物健康造成潜在危害的毒素主要有：黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、伏马毒素和脱氧雪腐镰刀菌稀醇（呕吐毒素）等6种毒素,一、饲料中霉菌毒素的危害,4、霉菌毒素的主要危害,一是可以引起饲料的变质，产生异味，降低其饲用价值，甚至完全让其失去商品价值二是饲料被霉菌污染后，导致畜禽的急、慢性中毒，免疫机能和生产性能下降，造成养殖业效益的下降三是残留于畜禽肌肉、内脏或乳中的霉菌毒素通过食物链传递给消费者，给食品安全带来更大的风险,二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法,1、饲料中主要霉菌毒素的检测标准一览表,二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法,2、霉菌毒素的主要检测方法,胶体金免疫层析法 酶联免疫吸附法 荧光光度法 薄层色谱法 高效液相色谱（荧光/紫外）法 高效液相色谱串联质谱法,二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法,3、主要检测方法的特点比较,二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法,4、检测方案,阳性样确证,初筛,批量样本,可疑样品,二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法,5、检测流程,三、ELISA法的操作要点及注意事项,1、酶联免疫吸附（ ELISA ）试验的定义及分类,定义：用酶标记抗原或抗体检测液体中未知抗体或抗原的方法。,间接法 将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗检测液相中未知抗体双抗体夹心法 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗检测液相中的可溶性抗原竞争法 将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体检测液相中的可溶性抗原或抗体,分类：,三、ELISA法的操作要点及注意事项,2、竞争 ELISA 的原理,三、ELISA法的操作要点及注意事项,2、检测步骤及注意事项,（1）准备阶段 详细阅读说明书 确认试剂盒试剂组成、数量及其用途 试剂配制 试样的制备、提取及稀释 试剂盒试用前要充分回温 实验室室温最好控制在20-25 准备好实验器具（移液枪机及枪头） 确认仪器设备运行正常,三、ELISA法的操作要点及注意事项,2、检测步骤及注意事项（续）,（2）加样 标准曲线孔- 酶标抗原 + 标准曲线溶液 样品测试孔- 酶标抗原 + 样品提取物溶液 注意事项： 加样体积准确 前后加样时间不宜过长 不可漏孔、跳孔 防止交叉污染,三、ELISA法的操作要点及注意事项,2、操作要点及注意事项（续）,三、ELISA法的操作要点及注意事项,2、操作要点及注意事项(续),（3）孵育 孵育前应混匀反应物 严格按照说明书控制温度、时间及避光要求 防止微孔内液体挥发，加以密封（4）洗板 甩除液体要干净利落，不要投鼠忌器 加洗液不要溢出微孔，防止交叉污染 拍板用力适当，看不到明显液体为宜,三、ELISA法的操作要点及注意事项,2、操作要点及注意事项(续),（5）显色 加显色液要快速准确 回形振荡混匀，消除气泡 严格按照说明书控制温度、时间及避光要求 防止微孔内液体挥发，加以密封（6）显色终止 按照加显色液的顺序及速度加终止夜 回形振荡混匀液体,三、ELISA法的操作要点及注意事项,2、操作要点及注意事项(续),（6）读数（检测吸光度） 终止反应后应尽快检测吸光度 按照说明书要求设置酶标仪参数,三、ELISA法的操作要点及注意事项,3、其他应注意的问题 劳动安全保护及环境保护 不同批次的试剂盒微孔板不要混用 试剂盒质量差异（重复性、准确性）明显,四、HPLC法在饲料霉菌检测中的应用,1、HPLC法检测霉菌毒素的关键点比较,四、HPLC法在饲料霉菌检测中的应用,2、免疫亲和柱净化原理,四、HPLC法在饲料霉菌检测中的应用,3、免疫亲和柱使用注意事项,免疫亲和柱应在28保存，不要冷冻，关注有效期 免疫亲和净化柱使用前要恢复其温度至室温（20-25 ） 整个纯化过程尽量不要让柱子干涸 免疫亲和净化柱不能混用 具体使用方法按照说明