从口腔脱落细胞中提取人类基因组DNA.doc_第1页
从口腔脱落细胞中提取人类基因组DNA.doc_第2页
从口腔脱落细胞中提取人类基因组DNA.doc_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

从口腔脱落细胞中提取人类基因组DNA一实验目的 1、了解从细胞中提取DNA的基本原理2、学习从口腔脱落细胞中提取高分子量DNA的基本操作步骤和会影响提取效果的注意事项。二实验原理1.用蛋白酶K（使膜上蛋白变性分解）和去污剂SDS（破坏细胞膜的脂质结构）共同消化细胞。2.然后酚、氯仿等有机溶剂进行抽提，进行DNA的纯化，去掉蛋白质、RNA、多糖等生物大分子。3.最后用无水乙醇沉淀DNA，干燥后用TE溶解，在4下可保存一年。三实验步骤1、先用清水漱口。然后用舌头舔颊粘膜上颚、用牙刮颊部，嘬咀，用分泌出的唾液反复漱口；将唾液吐到杯中。用1ml生理盐水洗涤，后将1.5ml液体转入1个干净的EP管中，2000rpm离心5分钟，倒掉上清。2、重复用1.0ml生理盐水洗涤沉淀1次，离心，去上清。3、沉淀中加500l 1x细胞裂解液（STE），打散细胞团、混匀，再加15l 20mg/ml蛋白酶K，充分混匀。 55水浴30min。4、加500l饱和酚，轻摇混匀，室温12000rpm离心10min。5、上清（注意不要吸到中间层白色絮状物质以及下层有机相）移至另一加入装有500l氯仿的EP管，轻摇混匀，室温12000rpm离心10min。6、吸取400l上清（注意不要吸到中间层白色絮状物质以及下层有机相）至已装有900 l预冷无水乙醇的离心管，混合均匀，可见白色絮状沉淀，10000rpm离心5min，DNA沉淀在管底。7、去上清，加入70%乙醇1ml清洗沉淀，10000rpm离心5min，去上清（尽量用小枪头将液体去干净，但注意不要将沉淀也吸走），室温干燥5min，再用50l TE buffer溶解沉淀，4储藏备用。四实验结果五结果分析编号：100如图所示，100号几乎没有提取出DNA，只有很弱的一条带，如果量再多一些的话，应该也看得到会有几条带。经过分析后认为主要以下几点原因：【1】.唾液稀释过度，导致取到的细胞很少。【2】.在破碎细胞的时候进行的不彻底，没有混匀，导致DNA抽提不完全。【3】.加入活性去污剂到加热30min的间隔有些长导致部分DNA被DNA水解酶降解。【4】.加入饱和酚的时候没有摇匀，蛋白质的去除不彻底，部分DNA与蛋白质结合，在分离DNA去除蛋白质的时候损失了不少DNA。此外，不同的条带代表提取出的DNA的大小不同，在实验过程中，可能由于剧烈震荡，或DNA水解酶的缘故使得DNA链被打断。因此出现了不同的几个条带。六注意事项1.取唾液时既不能过分稀释，也不能太粘稠，发现细胞不足时要及时补充。2.裂解细胞的时候，要充分混匀活性去污剂，但震荡也不能太剧烈。最好及时放入水域锅中加热。3.加苯酚后要充分混匀，之后离心，尽可能多的将上清吸出，但注意不要取到
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论