洁净区沉降菌测定规程

XXXXXXX 有限公司 洁洁净净区区 室室 沉沉降降菌菌 测测定定 操操作作 规规程程 编号页 数共页 制定人制定日期 年 月 日修订日期 年 月 日 审核人审核日期 年 月 日颁发部门 批准人批准日期 年 月 日生效日期年 月 日 分发部门 1 目的 明确洁净区 室 沉降菌的质量控制标准 规范洁净区 室 沉降菌的检验操作 方法 2 适用范围 洁净区 室 沉降菌的控制和测试方法 及车间洁净室和洁净区无菌室或 无菌区域 包括洁净工作台 的沉降菌的测定和环境的验证 3 责任者 质量控制部洁净区 室 沉降菌检验操作人员车间 QC 检验操作人员 4 操作内容和方法 4 1 定义 4 1 1 菌落 4 1 1 1 细菌培养后 由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落 简称 CFU 通常用 个数表示 4 1 1 2 沉降菌 用规定的方法收集到的活微生物粒子 通过专用的培养基 在适宜的生长条件下繁 殖到可见的菌落数 4 2 应对微生物进行动态监测 评估无菌生产的微生物状况 4 2 1 监测方法有沉降菌法 定量空气浮游菌采样法和表面取样法 如棉签擦拭法和 接触碟法 等 4 2 2 动态取样应当避免对洁净区造成不良影响 成品批记录的审核应当包括环境监 测的结果 4 2 3 对表面和操作人员的监测 应当在关键操作完成后进行 在正常的生产操作监 测外 可在系统验证 清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测 4 2 4 洁净区微生物监测的动态标准 1 如下 表面微生物 洁净度 级别 浮游菌 cfu m3 沉降菌 90mm cfu 4 小时 2 接触 55mm cfu 碟 5 指手套 cfu 手套 A 级 1 1 1 1 B 级10555 C 级1005025 D 级20010050 4 2 4 1 表中各数值均为平均值 4 2 4 2 单个沉降碟的暴露时间可以少于 4 小时 同一位置可使用多个沉降碟连续进 行监测并累积计数 4 3 沉降菌测试操作方法 4 3 1 洁净区沉降菌控制限度 洁净度级别沉降菌 皿测定频次洁净度级别沉降菌 皿测定频次 A 级 1 1 次 日 C 级 50 1 次 周 D 级 100 1 次 月 4 3 2 测试操作方法 4 3 2 1 本测试方法采用沉降法 即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培 养平皿 经若干时间 在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数 以平板培 养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数 并以此来评定洁净区的洁净度 4 3 2 2 所用的仪器和设备 高压消毒锅 使用时应严格按照仪器说明书操作 恒温培养箱 必须定期对培养箱的温度计进行检定 培养皿 一般采用 90mm 15mm 的硼硅酸玻璃培养皿 培养基 普通肉汤琼脂培养基 微生物限度检查法 或其他药典认可的培养基 4 3 3 测试操作步骤 4 3 3 1 采样操作方法 将已制备好的培养皿按 4 2 4 2 的要求放置 打开培养皿盖 使培养基表面暴露 4h 再将培养皿盖盖上后倒置 4 3 3 2 培养 全部采样结束后 将培养皿倒置于恒温培养箱中培养 在 30 35 培养箱中培养 时间不少于 72h 每批培养基应有对照试验 检验培养基本身是否污染 可每批选定 3 只培养皿作 对照培养 4 3 3 3 菌落计数 用肉眼直接计数 标记或在菌落计数器上点计 然后用 5 10 倍放大镜检查 有否遗漏 若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠 可分辨时仍以 2 个或 2 个以上菌落 计数 4 3 3 4 操作注意事项 测试用具要作灭菌处理 以确保测试的可靠性 正确性 采取一切措施防止人为对样本的污染 对培养基 培养条件及其他参数作详细的记录 由于细菌种类繁多 差别甚大 计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细 观察 不要漏计培养皿边缘生长的菌落 并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的 区别 必要时用显微镜鉴别 采样前应仔细检查每个培养皿的质量 如发现变质 破损或污染的应剔除 4 3 4 测试操作规则 4 3 4 1 测试操作状态 沉降菌测试前 被测试洁净室的温湿度须达到规定的要求 静压差 换气次数 空气流速必须控制在规定值内 沉降菌测试前 被测试洁净室已经过消毒 测试状态有静态和动态两种 测试状态的选择必须符合生产的要求 并在报告 中注明测试状态 4 3 4 2 测试人员 测试人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服 静态测试时 室内测试人员不得多于二人 4 3 4 3 测试时间 对单向流 如 A 级净化房间及层流工作台 测试应在净化空调系统正常运行不少 于 10min 后开始 对非单向流 如 C 级 D 级以上的净化房间 测试应在净化空调系统正常运行不 少于 30min 后开始 4 3 4 4 沉降菌计数 采样点数目及其布置 最少采样点数目 沉降法的最少采样点数可按表 1 确定 表 1 最少采样点数目 洁净度级别面 积 M2 A 级C 级D 级 102 322 10 20 422 20 40 822 40 100 1642 100 200 40103 200 400 80206 400 1000 1604013 1000 2000 40010032 200080020063 注 表中的面积 对于单向流洁净室 是指送风面面积 对于非单向流洁净室是 指房间的面积 在满足最少测点数的同时 还应满足最少培养皿数 见表 2 表 2 最少培养皿数 洁净度级别所需 90mm 培养皿 以沉降 4 h 计 A 级 14 C 级 2 D 级 2 4 3 4 5 采样点的布置 采样点的位置可以同悬浮粒子测试点 采样点的布置图示如下 注 为采样点 图 A1 A1 洁净棚 层流罩 洁净工作台等局部空气净化设施的采样点布置 A1 1 水平单向流 A1 2 垂直单向流 图 A2 图 A3 工作区采样点的位置离地 0 8m 1 5m 左右 略高于工作面 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点 4 4 记录 4 4 1 测试报告中应记录房间温度 相对湿度 压差及测试状态 4 4 2 测试报告的编写见标准的附录 4 5 结果计算 4 5 1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数 4 5 2 平均菌落数的计算 见式 1 M1 M2 Mn 平均菌落数 M 1 n 式中 M 平均菌落数 M1 1 号培养皿菌落数 M2 2 号培养皿菌落数 Mn n 号