模块四逆境胁迫对植物生理生化指标的

逆境胁迫对植物生理生化指标的影响 李忠光 2011 5 25 模块四综合性实验 目的 掌握逆境胁迫下一些植物生理指标的测定方法 了解逆境胁迫下植物生理生化指标的变化以及逆境伤害和适应的原因 流程图 实验原理I 实验原理II 4260nm 实验原理III 实验原理IV 实验原理V 实验原理VI 实验原理VII 实验方法I 种子发芽率的测定 各取50粒吸胀的玉米种子或小麦种子 沿胚的中心线切成两半 严格区分两个半粒 进行下列实验 其中50个半粒进行TTC染色 30 水浴20min 另50个半粒进行曙红染色 室温染色10min 根据两种方法的染色情况 分别计算发芽率 品种为晴3或鲁玉13的玉米种子 购于西山种子公司 用0 1 HgCl2消毒10min后 用蒸馏水漂洗干净 用蒸馏水于26 下吸涨12h 播于垫有6层湿润滤纸的带盖白磁盘 24cm 16cm 中 于26 下暗萌发60h 计算发芽率 注意与前面结果比较 选取长势一致的玉米幼苗做干旱 高温 盐渍或低温下处理 去除较矮或较高的玉米幼苗 实验方法I 呼吸作用的测定 材料的准备 将预测量的材料称重后 0 5g 放入测量瓶 测定方法 打开电源预热5min 打开气泵开关 打开闭路开关 用碱石灰管分别连接面板上的 OUT 和 IN 主机的 OUT1 和 IN1 分别与测量瓶的 OUT1 和 IN1 相连 立即开始记时 测量1min的CO2增加量计算 每分钟每克材料的CO2释放量 mL g 1 min 1 实验方法II Pro的提取 分别取0 5g实验组和对照组的胚芽鞘 加入3mL3 磺基水杨酸 SSA 和少许石英砂 充分研磨 用2mL3 SSA洗研钵 5000rpm离心10min 上清液定容至5mL 测定 上清液各2mL 分别加入2mL冰乙酸和2mL茚三酮试剂 煮沸15min 冷却后 5000rpm离心10min 分别测定A520计算 实验方法III MDA提取 分别取0 5g实验组和对照组 加入3mL50mMPBS pH 7 8 和少许石英砂 充分研磨 用2mLPBS洗研钵 5000rpm离心10min 上清液定容至5mL 测定 分别取上清液各2mL 加入0 6 TBA 用0 6 TCA配制 2mL 煮沸12min 冷却后 5000rpm离心10min 分别测定OD450和OD532计算 实验方法IV H2O2提取 分别取0 5g实验组和对照组 加入3mL50mMPBS pH 6 8 内含1mMHA 和少许石英砂 充分研磨 用2mLPBS洗研钵 5000rpm离心10min 上清液定容至5mL 测定 分别取上清液各3mL 加入0 1 Ti SO4 2 用20 v v H2SO4配制 1mL 摇匀 5000rpm离心10min OD410计算 实验方法V 实验方法VI 1 抗氧化酶的提取 分别取0 5g实验材料 加入少许石英砂和3ml提取液 50mmol LPBS pH5 8 内含0 mmol LEDTA 1 PVP 充分研磨 转入离心管中 用2ml提取液洗研钵 5000rpm离心10min 上清液定容至5ml 用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至 20或 80 保存 2 POD测定 取POD反应混合液 10mmol L愈创木酚 5mmol LH2O2 用PBS溶解 3 00ml 加入酶液100ml 空白调零用PBS取代 立即记时 摇匀 读出反应3min时的A470 3 PPO测定 取PPO反应混合液 20mmol L邻苯二酚 用PBS溶解 2 8ml 加入酶液0 2ml 空白调零用PBS取代 立即记时 摇匀 读出反应2min时的A410 以每分钟A值变化0 01所需要的酶液的量为一个活力单位 U 则 实验方法VI 4 计算 实验方法VI 实验方法VII GSH的提取 分别取0 5g实验组和对照组的胚芽鞘 加入3mL5 三氯乙酸 TCA 和少许石英砂 充分研磨 用2mL5 TCA洗研钵 5000rpm离心10min 上清液定容至5mL 测定 上清液各1mL 分别加入1mL0 1MPBS pH 7 7 0 5mL4mMDTNB 用0 1MpH6 8PBS现配 空白用此PBS代