【毕业学位论文】（Word原稿）黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞IL-8和IL-10表达的影响

兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 1 第一章 前 言 糖尿病正严重威胁着人类健康 ，给个人、家庭和政府带来了沉重的经济负担。 据2012 年 计 结果 显示全球 糖尿病患者总人数 达 ， 在 医疗保健上的花费超过4710 亿美元 ，其中约有 4/5 的糖尿病患者主要集中在中低 等 收入 的 国家 ， 我国目前的糖尿病患者人数 约 达 9228 万人，除此以外， 在全球还未被确诊的糖尿病患者 人数 达 1。 最新 研究表明，预计至 2030 年，全球糖尿病患者的总人数将从 2011 年的 至 ，将增长 年增长率将为 其增长率与 各自 国家的收入呈负相关，其中在全球增长的 糖尿病患者中，中国和印度约占 48%2。 众所周知，糖尿病患者血糖升高引起的相关并发症对人类健康危害甚大， 其慢性并发症主要 包括糖尿病大血管病变、微血管病变以及糖尿病足等。其中，糖尿病肾病（ 最常见的糖尿病微血管并发症之一，也是糖尿病致死 、致残的主要原因。 世界范围内普遍发生，约有 1/3 的 2 型糖尿病患者发展为终末期肾病（ 且 者由于心血管疾病引发的死亡率日益增多 3。鉴于糖尿病并发症导致的严重后果， 因此，越来越多的研究倾向于 治，这个课题也成为目前代谢组疾病研究的 热 点。 常是指糖尿病性肾小球硬化， 其发病机制主要与遗传因素、氧化应激、肾小球血流动力学改变、肾小球滤过屏障的改变、蛋白非酶糖化作用以及各种炎症因子的作用有关 。 其基本病理 改变 主要是肾小球 系膜细胞增生、 毛细血管基底膜增厚、系膜区基质集聚及肾小球硬化。郭鹏等 4在电镜下发现糖尿病 鼠肾小球系膜明显增生，系膜基质增加，系膜内透明样物质沉积 。 高血糖作为 生发展的始动因素，可诱导各种细胞因子及炎症因子形成复杂的网络结构，进一步加速 展。有学者发现 胞在高糖状态下明显 增 生 ，其分泌的 转化生长因子 （ 结缔组织生长因子（ 显增多，而 干扰素 抑制 胞 增 生 ，降低其 泌 5。 目前学术界 认为 发生及发展是多因素综合作用的结果 ,炎症反应参与糖尿病肾病的发展已获得越来越多的支持 。 一种代谢紊乱引起的慢性炎症性疾病，趋化因子（如 单核细胞趋化蛋白 、粘附分子 (如 细胞间黏附分子 促炎因子(肿瘤坏死因子 )参与 发生发展 6。白细胞 介素（ 为最常见的细胞因子，不但介导白细胞间的相互作用 ,还参与其它细胞的调节 ,并相互影响、相互制约。 白介素 是一种重要的白细胞趋化因子，属于趋化因子家族 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 2 中 其 分子量为 8要来源于单核巨噬细胞、 皮细胞及上皮细胞，具有促进白细胞粘附及趋化运动的作用，加强炎症反应 。 临床研究发现 平 明显高于正常组，但上升程度与肾功能检测指标 (r)无明显相关 7；尿中 其在糖尿病肾病 2期升高显著，且与糖化血红蛋白正相关 8。 此外，大量白蛋白尿患者血清中 9。也有研究发现， 诱导肾小球系膜细胞分泌 0,这些研究结果均提示 白介素 称为细胞因子合成抑制因子 ,又被称为抗炎因子，具有免疫抑制作用。它能够 抑制中性粒细胞、单核 /巨噬细胞分泌炎症因子、趋化因子，抑制 究发现 少单核 /巨噬细胞及 11降低巨噬细胞 子的表达 13,从而发挥抗炎作用 。 其免疫调节作用也依赖细胞不同而表 现出双向性 13。 目前关于它与糖尿病、糖尿病肾病之间的关系仍在研究当中，尚无定论。 研究显示，在 2型糖尿 病患者 14、链脲佐菌素（ 导的糖尿病大鼠 15及 16中 也有研究报道，在1型及 2型糖尿病患者血清中 存在高水平的 7。有关 糖尿病患者比较，在 1型及 2型糖尿病肾病患者血清中 与微量白蛋白和尿蛋白 /肌酐比值呈正相关 18但这一实验结果与 20发现 、促炎细胞因子 (趋化因子 (节活化正常 )水平 明显升高，而 平 未见 明显升高。考虑其差异与研究的样本量的大小有关。由此可见， 在祖国医学中，糖尿病被称为消渴病， 消渴病的后期阶段，属于“尿浊、“水肿”、“关格”等范畴，其病机特点是本虚标实，表现为发病之初气阴两虚，后阴损及阳，最后 肾阳衰败，浊毒内停 21。 中医药因其来源广泛、价格低及副作用少被广泛用于治疗糖尿病及其并发症。 研究者发现多种中药，如黄芪、地黄、天花粉、人参 、 五味子、麦冬、知母及 黄连等可能通过部分抗炎作用调节高血糖反应，在糖尿病治疗中起到降低血糖的作用 22。其中，近年来，关于黄芪对 脏保护作用的研究成为热点。黄芪为豆科植物蒙古黄芪和膜荚黄芪的干燥根，具有利水消肿、补气固表、托毒生肌、健脾利湿等功效。近年药理学研究显示黄芪中含有多糖、皂苷、黄酮、氨 基酸、及一些微量元素，如叶酸、亚油酸、亚麻酸及胆碱等多种成分，具有抗氧化、抗癌、抗衰老、抗病毒、调节蛋白及核酸代谢、降血糖、降血压、降尿蛋白、利尿，保肝及提高免疫力等作用 23。 目前，黄芪的 多种成分也被广泛应用于药理研究。研究显示黄 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 3 芪甲苷 (， ) 可明显升高高糖（ 25l）培养的大鼠肾小球系膜细胞过氧化氢酶活性、谷胱甘肽（ 超氧化物歧化酶（ 平，降低 一氧化氮（ 、诱生型一氧化氮合酶（ 总一氧化氮合酶（ 平，发挥抗氧化作用 24； 抑制 鼠肾脏 表达 ，减轻氧化应激及肾脏肥大 25；通过抗氧化作用及抑制 径抑制高糖诱导的足细胞凋亡 26。 为黄芪有效成分之一，可抑制 导的单核巨噬细胞系 胞 及 达 27；降低血糖，增加胰岛素敏感性，并能改变 2 型糖尿病 轻肾小球硬化及肥大 4。 鉴于对上述基础研究的认识，我们设想在 生发展中，抗炎因子 趋化因子 表达水平之间是否存在拮抗或 是协同作用 ? 目前尚无研究报道。因此，本实验拟 从细胞分 子水平模拟糖尿病肾病状态，以观察黄芪多糖在高糖状态下对 达的影响，探讨炎症 反应因子在糖尿病肾病的作用，为黄芪多糖治疗糖尿病肾病提供实验数据以及理论基础。 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 4 第二章 材料与方法 实验材料 实验药品 黄芪多糖（纯度 99%） ： 自 西安博昌生物科技有限公司 。 实验对象 人肾小球系膜细胞 ( 兰州军区陆军总医院实验 科惠赠 。 主要试 剂 试剂名称 批号及 厂家 糖型） 北京索来宝生物公司，北京 糖型） 京索来宝生物 公司，北京 胎牛血清 季青公司，杭州 胰蛋白酶 20111010226, 国 0188, 国 793， 国 二甲基亚砜（ 0231,国 合成的引物 大连宝生物 公司 连 反转录试剂盒 大连宝生物 公司 连 大连宝生物 公司 连 1000 526S， 大连宝生物 公司 连 兔抗人 克隆抗体 上海生工生物 公司 ，上海 兔抗人 克隆抗体 上海生工生物 公司 ，上海 山羊抗兔 抗） 北京中杉金桥生物公司，北京 主要实验仪器和设备 超 声波清洗器 冠特超生仪器 公司 ，上海 磁力搅拌器 坛市佳美仪器公司 ， 上海 电子天平 德国 酸度计 海精密科学仪器 公司，上海 高速离心机 8R， 澳大利亚 水浴摇床 海智诚分析仪器 公司 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 5 超净工作台 津市泰斯特仪器 公司，天津 显微镜 81 日本 移液器 5000德国 二氧化碳培养箱 德国 国 紫外可见分光光度计 京瑞 利分析仪器 公司，北京 电泳仪 国 凝胶成像分析系统 美国 酶标仪 美国 高压灭菌锅 本 电热恒温鼓风干燥箱 海新苗医疗器械 主要实验用液体的配置 (1) 青霉素溶液：于 80万 入 4 荡充分溶解后， m 滤膜过滤除菌后分装， 保存。 (2) 链霉素溶液 ：于 100 万 U 医用 瓶装 硫酸链霉素中加入 5分 生理盐水中，振荡充分 溶解 后 ， 保存。 (3) 低糖型 养基 : 取低糖型 末一瓶，溶于 800离子水中，加入5% 霉素溶液 450链霉素溶液 450用磁力搅拌机充分搅拌 溶解后，调整 之间， 去离子水 定容至 1L， 用 过滤除菌 分装后 4保存。 (4) 含 30葡萄糖的 高糖型 于 800入 5%青 霉素溶液 450链霉素溶液 450磁力搅拌机充分搅拌溶解后， 去离子水定容至 1L， 加入 g, 磁力搅拌机充分搅拌 溶解后，调整 之间 ,用 保存。 (5) 酸盐缓冲液 ):秤取 磷酸二氢钠（ 化钾 (氯化钠（ 磷酸二氢钾（ 入烧杯中，加 800离子水 充分溶解后，调整 之间， 用去离子水定容至 1000压 灭菌 后 ，备用。 (6) 酶溶液 ： 电子天平 称取 胰蛋白酶粉末 入至 100 ， 磁力搅拌机 低速搅拌，使其 充分溶解 后， 于超净台中 膜过滤除菌， 分装后 4 保存 备用 。 (7) 5%四甲基偶氮唑蓝（ 液 :到 50， 磁力搅拌机 搅拌 充分后 ， 径 滤膜 过滤除菌， 4 避光 保存。 (8)1000蒸水中加入 1液（剧毒，注意口鼻防护），置于 1000州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 6 容量瓶中静止 4小时后备用。 (9)黄芪多糖储存液： 称取黄芪多糖 于 20 30l 葡萄糖的 养基中，配制成浓度为 8mg/母液， 充分搅拌溶液后， 保存 备用。临用时分别稀释成 1600ug/800ug/400ug/200ug/100ug/50ug/ (10)l 甘露醇储存液：取 1用甘露醇（ 250），加入到 44糖型径滤膜过滤除菌， 4 保存。 主要实验步骤及过程 细胞培养 细胞复苏 从液氮 灌 中取 出 胞 冻存管，快速放入 37水 浴箱中，持续摇动 至冻存液完全融化 ,将 存细胞加入到 含 3鲜 养液 的 5心管 中，轻轻混匀 ,1000心 3上清 ,加入 10%胎牛血清的 全培养基 5散后将其移入 无菌 培养瓶 ,置于 37 、 5%养箱中孵育。 细胞 培养及 传代 观察 置于 37 、 5% 胞 培养液颜色变化及细胞生长变化，约隔天换液， 2代时 取出培养瓶 , 在倒置相差显微 镜下观察细胞 形态及 生长 密度。若细胞生长达 对数生长期， 在超净工作台内进行细胞传代， 弃培养液 ， 用吸管吸取 3 入培养瓶内，来回晃动约 30 次后倒 掉 复此操作一次后弃 加入 蛋白酶进行细胞消 化 ,在倒置显微镜镜下观察，待细胞变圆脱壁后，弃胰蛋白 酶，立即加入 完全培养基 , 吹散 、吹匀后，分装于新的培养瓶，分别置于 37 、5% 细胞冻存 吸 弃对 数 生长 期 养瓶中 旧 培养液 ， 加入 3次， 蛋白酶消化 ,在倒置相差 显微镜下观察细胞变化，待细胞变圆脱 壁后 ，收集至离心管中， 1000 心 3 上清，加入细胞冻存液，轻轻吹打混匀后，分装入冻存管中， 置于 4保存 30 存 4h 后 ,放入 冰箱过夜，次日 转入 液氮罐 中长期 保存 。 实验分组 将处于对数生长期细胞进行消化后加入 10% 胎牛血清的 37、 5%兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 7 的饱和湿度 孵箱。 当 0%融合后 用无血清培养基 同步化 24h，然后 吸弃无血清培养液，加入含不同浓度培养液， 按实验目的进行分组。 实验 分组（一 ） 宜 药物浓度 ： 1对照组（ 2甘露醇 高渗 组（ 甘露醇 ） ,3高糖组 (30 ，4 50ug/ 5 100ug/ ,6 200ug/ 7400ug/ 8800ug/ 91600ug/ 实验分组（二）： 蛋白的表达 ： 1 对照组（ 2 甘露醇 高渗 组（ 甘露醇 ） ,3高糖组 (30 ， 4 低浓度 G+低浓度 ， 5 中浓度 浓度 ， 6 高浓度 G+高浓度 。 M: 50ug/100ug/200ug/400ug/800ug/1600ug/30l H M C s l 分 培养 12 h、 24h、 48h 测细胞活力，筛选 适宜药物浓度 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 8 测细胞活力 /增殖，筛选药物浓度。 3-(4， 52)5一种黄颜色染料，商品名为噻唑蓝，简称为 检测原理为：活细胞线 粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 蓝紫色结晶甲瓒（ 沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 酶联免疫检测仪在 49070间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内， 方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。 首先 设 置 0ug/100ug/200ug/400ug/800ug/600ug/ 别于细胞培养 12h、 248 察不同 浓度 高糖状态下 殖的影响，然后筛选 适宜 为浓度 梯度。 步骤： 将进入对数生长期的细胞 制成单细胞悬液后，将 按 1 104个 /孔接种于 96 孔板，每孔 200分给药组与对照组，置 37、 5%4吸弃培养液 , 用无血清 养液同步 24h,然后按 实验分组给予相应条件培养液， 共分 9组 , 每组重复 6孔 。分组后的 细胞继续培养 12h、 248别 加入 20mg/37 、 5%续培养 4h， 吸弃 培养液 , 每孔加入 150将培养板置于微孔板振荡器上震荡 10分钟，使结晶物溶解，最后， 在酶标仪上H M C s 分别于培养 12、 24及48h 后 ， 提 取 细 胞0l 行细胞爬片，分别 干预培养 12h、 248疫组织化学法检测 G+低浓度 G+高浓度 G+中浓度 : l 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 9 检测波长为 570值 （ 。 同时计算细胞 增殖 的抑制率，抑制率 =(实验组对照组 100%。 检测 胞 达 样品制备 取培养至对数生长期的 成 6 105个 /单细胞悬液， 接种于培养瓶中。 细胞贴壁后换用无血清培养基培养 24h。 吸弃培养液后按实验分组加入含不同浓度药物的培养液。 实验分为 6组： 正常组（ 甘露醇 高渗组 (M)、高糖组（ 高糖 +不同浓度黄芪多糖组 (，浓度分别为 50ug/ 100ug/200ug/ 分别 于培养 12h、 248组 培养液中及贴壁的细胞 总 验重复三次 。 总 取 （ 1） 相关器材准备： 冰盒、蓝、黄、白 三种 无 头， 200无齿 小 镊。除冰盒外，其余所有器材应浸泡在（ 中在通风柜中室温处理过夜，将 至废液瓶 ，用铝箔封住含已 用 120高温灭菌 维持 30以除去残留的 然后 49 烘拷至干燥（璃玻和金属物品需 250 烘烤 3小时以上）， 置于干净处备用 。 相关试剂准备 ： 氯仿、 异丙醇、 75乙醇（ （ 2）总 分别在各时间点 将 贴壁 的 细胞 培养 瓶置 于无菌超净台，弃去培养液，用 遍， 弃 加入 1分钟进行消化、裂解（ 0），然后吹打混匀，将裂解液吸入到 上下颠倒混匀，充分乳化呈乳白色后，室温静置 5分钟 。 4 12005取出 浆液分为三层， 小心 吸取清亮 无色上清液置于另一 加入等体积的异丙醇，上下颠倒混匀 4静置 20分钟。 4 12000心吸弃 上清，向沉淀物中加入 75乙醇清洗沉淀。 4 1200上清，保留沉淀物，室温干燥沉淀物 5加入 20箱 保存备用。 度测定 取 入高温处理过的 80倍稀释后备用。紫色分光光度仪测定 品在 26080，纯度较好的 (280)值在 提示 甘露醇不能明显促进 而 而 结果显 示 组 （表 3图 3。 其中， 在 12、 24及 4850、 100及 200ug/ 高糖状态下 胞 增殖的抑制率分别为 （ 、（ 及（ （图 3。 高糖状态下 胞 达的影响 表 3 高糖状态下 X士 S） ） ,(n=6) 组别 12h 24h 48h 组 # # # 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 16 # #* #* #* #* #* #* #* * 注：与 # 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 26 第四章 讨 论 糖尿病肾病 （ 糖尿病患者 最常 见最严重的微血管并发症 ， 主要病理改变为肾小球系膜细胞增生、 基底膜增厚、细胞外基质（ 积及肾小球弥漫性或结节性纤维化，最终导致 小球系膜细胞 作 为 肾脏中较活跃的固有细胞，可分泌多种细胞因子及趋化因子，如 胶原（ V,V） 28参与炎症反应及免疫调节。在正常状态下 ，系膜细胞无 明显 增殖，其增殖及凋亡保持相对平衡，但受到外界 因素 刺激时肾小球系膜细胞明显增殖， 促进肾小球纤维化及硬化。由于系膜细胞的增殖，肾小球血管内皮细胞受到挤压，可导致肾血流量下降；增殖的系膜细胞分泌过多的 ,导致系膜区 积及肾小球基底膜增厚； 其分泌的大量细胞因子及趋化因子参与炎症反应，进一步损伤肾脏。 近年来发现，细胞因子与 关系密切 6，尤其是促炎因子和抗炎因子的平衡失调在其发生发展过程中发挥了重要作用。在正常情况下，促炎因子和抗炎因子处于动态平衡状态，从而保持内环境稳定，但是在各种病理因素的作用下，二者的动态平衡遭到破坏，从而启动或促进炎性反应而造成疾病的发生发展。 研究显示 趋化因子 的水平明显发生变化 ， 血清中促炎因子（ 、 ( 趋化因子 (尿液中 、 平 明显升高 20。 此外，在微量白蛋白尿伴早期肾功能下降的 1 型糖尿病患者 尿液中， 巨噬细胞炎性蛋白 ， 均明显升高 32。 学者认为在糖尿病相关心血管疾病的发生发展中 属于“有害”白介素，它能促进炎症反应的发生发展，造成细胞损伤，使得器官功能障碍；而 益”白介素，它能 促进炎症的消散和组织的修复，参与组织及器官的自身防御 。 黄芪首见于 神农本草经 ，其 味 甘 ， 性 微温 ，归 脾、肺 经 ，是 重要的益气药之一。 主要的作用在于其 补气升阳，利水消肿 ，托毒排脓、行滞痛痹，被广泛用于治疗中气下陷、便血崩漏、气虚水肿 ，内热消渴 。 一 ， 对机体免疫系统具有较广泛的调节作用，它参与和调节细胞免 疫、体液免疫及非特异性免疫，具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、抗缺氧、抗氧化延缓衰老、降血糖、保肝等作用 34。 高糖状态下 胞增殖 的 影响 随着 病率大幅度上升， 控制 血糖是预防 生发展的首要治疗目标 ， 迄今 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 27 为止尚无有效的西药能阻止 功能损害的自然进程 ,大量关于细胞因子与糖尿病之间相互关系的研究为 早期诊断 和治疗提供 了 一定的参考价值 20, 35，也为中医药辅助治疗糖尿病及糖尿病肾病奠定理论基础 22。 鉴于这样的理论支持，并且中医药在我国的渊源，因此目前大量的中医药被广泛用于糖尿病肾病治疗 的 临床研究之中 。近年来， 关于 治疗作用备受关注。 大量 动物实验显示 ， 通过多种途径 对 糖尿病 大鼠肾脏 起到 保护作用 ，它 上调肾组织胰岛 素受体 ()、 胰岛素受体底物 )、磷脂酰肌醇 3 激酶( 白表达，通过增加胰岛素敏感性 及 改善胰岛素信号传导降低血糖 36； 降低肾脏髓质 达 ， 改善肾脏远端小管和集合管主细胞超微结构的退行性改变 37；抑制 肾组织 核因子 B, 达， 减少尿微量白蛋白， 减轻肾脏超微结构病理改变、 积和肾小球肥大 ， 延缓 肾小球硬化 4, 38 此外， 明显 稳定早期糖尿病大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子（ 达，减少尿蛋白排泄 40，延缓 我们知道，多种肾脏疾病与肾小球系膜细胞 增殖 有关，如 系膜 增殖 性肾小球肾炎、 血糖是 展的始动因素， 其可 诱导 肾小球系膜细胞明显增殖 5, 41， 并呈剂量和时间依赖性，表现为葡萄糖浓度在 20l 下反应时间达 48肾小球系膜细胞的 增殖 作用最 强 42。 大量研究显示 ， 高糖状态下 除了 肾小球系膜明显增殖 外，其 分泌 V、 显升高 43 我 们的实验也发现 ， 随着 培养 时间的延长，正常组 殖 ，而高糖 可明显 促进其增殖，呈时间依赖性，与 王谦 等 42报道一致， 而 l 甘露醇培养的见明显 增殖 。提示高浓度葡萄糖促进 殖 并非依赖于其高渗作用，而是高糖本身。 研究发现 抑制系膜 增生 性肾小球肾炎大鼠系膜细胞的 增生 和系膜区基质的增多，减少免疫复合物沉积，降低血和尿中 对肾脏起到保护作用 47。 毛蕊异黄酮 、 毛蕊异黄酮 是 黄芪提 取物 之一，属于 黄酮类化合物，可抑制高糖 环境下 大鼠早期肾小球系膜细胞增殖 48。 我们的实验 发 现， 用 不同浓度的 预治疗高糖培养的 胞 12、 24 及48 增殖明显受到抑制，且呈时间及剂量依赖性。 但是 高浓度 00、800 及 1600ug/度抑制高糖状态下 胞 增殖 。故我们选择 高、中、低 0、 100 及 200ug/ 高糖状态下 胞 达的影响 是中性粒细胞趋化因子 ,可活化中性粒细胞和单核细胞产生炎性介质 , 增强 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 28 其吞噬功能及杀伤能力 ,从而促进炎症反应 。 在正常情况下，系膜细胞可分泌 在外界因素 （ 刺 激下，肾小球系膜细胞分泌 多 49。 50 研究显示高糖可促进人奇静脉内皮细胞产生 38.5 l 甘露醇 葡萄糖 共同作用于该细胞时 无此作用，提示高渗不能刺激内皮细胞产生 51 研究报道 l 和 l 葡萄糖 均 能显著增强人主动脉内皮细胞 达，但 平滑肌细胞未见明显变化。 此外， 高糖及 糖化 蛋白也能刺激人主动脉内皮细胞 、肾小管上皮细胞及肾小管内皮细胞 表达 50 54研究显示 在 亚洲印度， 因多态性，尤其是 与 2型糖尿病肾病高风险相 关 。 有 学者发现 能通过抑制蛋白激酶 C 的活化及改善细胞骨架结构来保护高糖引起的内皮细胞功能障碍 55； 导的肠上皮细胞表达 56。 在我们的试验中，我们发现 ，高糖可明显促进 胞 蛋白 表达，且随着时间的延长，其表达量逐渐升高，呈时间依赖性。而 预治疗高糖环境 下 可 显著 抑制 呈时间及剂量依赖性， 表现为 200ug/8h 时抑制作用最强 。 高糖状态下 胞 达的影响 要由 胞、 活化的 单核 /巨噬细胞 及淋巴细胞 分泌 ，具有免疫调控及免疫 抑制作用 。 它能够抑制促炎因子的释放，使炎性介质生成减少，从而达到控制炎症、维持机体稳态的目的。 研究 显示， 慢性炎症反应中具有保护作用， 它可减轻炎症反应中超氧化应激反应及内皮 细胞功能 损伤 57。 11研究发现 ， 导的小鼠肾小球系膜细胞 90%）、 0%) 产生，而 达升高。 此外， 国内相关研究也发现 ， 外源性及内源性的 可 下调 导的肾小球系膜 细 胞 趋化因子、炎症因子和促纤维化细胞因子的表达， 如 挥抗炎、抗纤维化作用 58。 在 基础状态下， 肾小球系膜细胞无 达 ，当受到病理因素 刺激时 ，如 小球系膜细胞开始 分泌 1, 58。 目前，关于 肾小球系膜细胞的作用 研究报道 尚不一致。有学者认为 系膜细胞生长因子 59， 能通过 自分泌的 血小板衍生因子 (导的 机制 促进肾小球系膜细胞 增殖 60。 但 也有研究报道， 抑制 导的 系膜细胞增殖 ， 对 肾小球系膜细胞产生的 炎症效应具有拮抗作用 61。 吴元俊 等 58研究显示 一定的剂量依赖性 ,可 能是 通过上调系膜细胞内细胞周期负调控蛋白 少 1期细胞向 S 期及 期转化而实现的。 62研究发 兰州大学研究生学位论文 黄芪多糖对高糖状态下人肾小球系膜细胞 29 现黄芪多糖可 通过 径 诱导 棕榈酸酯 刺激 的巨噬细 胞株 白及基因的表达，抑制 白和 而发挥抗炎作用。但目前尚无研究报道高糖状态下肾小球系膜细胞分泌 变化及 故在本实验中，将人肾小球系膜下胞培养于高糖环境中，从 基因 及蛋白水平观察高浓度葡萄糖对 胞 研究结果发现， 在