注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠.doc

注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 1 页 共 36 页 目目 录录 缩略语表 3 1 前言 6 1 1 药物简介 6 1 2 试验目的 6 2 材料 对象与方法 6 2 1 药品 6 2 2 受试者的选择 6 2 2 1 医学伦理 6 2 2 2 入选及排除标准 7 2 3 方法 8 2 3 1 给药方法和剂量 8 2 3 2 试验分组 8 2 3 3 生物样本采集 8 2 3 3 临床观察 9 2 3 3 1 临床观察内容 9 2 3 3 2 试验用药的反应 9 2 3 3 3 不良事件记录及处理 9 2 4 生物样本的测定 9 2 4 1 血浆中哌拉西林钠的检测 9 2 4 1 1 仪器 9 2 4 1 2 内标 9 2 4 1 3 特异性 9 2 4 1 4 血浆中哌拉西林钠标准曲线制备及定量下限的确定 10 2 4 1 5 精密度试验 11 2 4 1 6 准确度试验 相对回收率 11 2 4 1 7 提取回收率 绝对回收率 12 2 4 1 8 样品稳定性 12 2 4 2 尿样中哌拉西林钠含量的检测 12 2 4 2 1 仪器 12 2 4 2 2 内标 12 2 4 2 3 特异性 12 2 4 2 4 尿样中哌拉西林钠标准曲线制备及定量下限的确定 13 2 4 2 5 精密度试验 14 2 4 2 6 准确度试验 相对回收率 14 2 4 2 7 提取回收率 绝对回收率 15 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 2 页 共 36 页 2 4 2 8 样品稳定性 15 2 4 3 血浆中他唑巴坦钠 15 2 4 3 1 仪器 15 2 4 3 2 内标 15 2 4 3 3 特异性 16 2 4 3 4 血浆中他唑巴坦钠标准曲线制备及定量下限的确定 17 2 4 3 5 精密度试验 17 2 4 3 6 准确度试验 相对回收率 17 2 4 3 7 提取回收率 绝对回收率 18 2 4 3 8 样品稳定性 18 2 4 4 尿样中他唑巴坦钠 18 2 4 4 1 仪器 18 2 4 4 2 内标 19 2 4 4 3 特异性 19 2 4 4 4 尿样中他唑巴坦钠标准曲线制备及定量下限的确定 20 2 4 4 5 精密度试验 20 2 4 4 6 准确度试验 相对回收率 21 2 4 4 7 提取回收率 绝对回收率 21 2 4 4 8 样品稳定性 21 3 药代动力学评价 22 3 1 哌拉西林钠的药代动力学评价 22 3 1 1 哌拉西林钠血药浓度 时间曲线 22 3 1 2 哌拉西林钠的药代动力学参数 23 3 1 3 哌拉西林钠药代动力学参数的性别分析 25 3 1 4 尿样中哌拉西林钠的排泄情况 25 3 2 他唑巴坦钠的药代动力学评价 27 3 2 1 他唑巴坦钠血药浓度 时间曲线 27 3 2 2 他唑巴坦钠的药代动力学参数 28 3 2 3 他唑巴坦钠药代动力学参数的性别分析 30 3 2 4 尿样中他唑巴坦钠的排泄情况 30 4 讨论 32 4 1 安全性 32 4 2 主要药代动力学参数 32 5 总结 33 6 参考文献 35 致 谢 36 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 3 页 共 36 页 缩略语表缩略语表 符号全称符号全称 CRF病例报告表Cmax峰浓度 EC伦理委员会Tmax达峰时间 GCP 药物临床试验质量管理规 范 ke消除速率常数 AE不良事件t1 2半衰期 SAE严重不良事件HBsAg乙肝表面抗原 SFDA国家食品药品监督管理局抗 HCV丙型肝炎抗体 ECG心电图抗 HIV 抗人类免疫缺陷 病毒抗体 AUC 血药浓度 时间曲线下面 积 AUC 0 至无穷时间血 药浓度 时间曲线 下面积 AUC0 tn 0 至 tn 最后一次可测浓度 的取样时间 时间的血药 浓度 时间曲线下面积 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 4 页 共 36 页 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠 人体药代动力学研究人体药代动力学研究 学生 郑宇轩 导师 曲恒燕 刘泽源 摘要摘要 目的目的 研究在不同剂量组的注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠 4 1 的药代动力学特征 方法方法 一项随机 开放 三方交叉研究进行了动力学在 12 健康受试者 受试者静脉滴注注 射用哌拉西林钠他唑巴坦钠 1 25g 2 5g 和 5 0g 之后用高效液相色谱法进行血液及尿样 的测定 结果结果 哌拉西林钠主要参数如下 三个剂量组 1 0g 2 0g 和 4 0g 中哌拉西林 钠的血药浓度的 Cmax分别为 48 19 9 40 116 72 16 28 和 245 94 52 29mg L t1 2分别为 0 50 0 10 0 66 0 09 和 0 74 0 12h AUC tn 分别为 38 29 8 59 105 35 19 14 和 267 65 58 35mg h L AUC0 分别为 39 86 8 86 107 33 19 52 and 271 36 58 72mg h L 哌拉西林钠尿液平均排泄浓 度为 63 15 他唑巴坦钠主要参数如下 三个剂量组 1 0g 2 0g 和 4 0g 中他唑巴坦 钠的血药浓度的 Cmax分别为 10 77 2 65 23 56 6 47 和 50 45 7 44mg L t1 2分别 为 0 57 0 16 0 75 0 37 和 0 90 0 27h AUC tn 分别为 9 70 3 93 23 58 8 43 和 58 64 10 80mg h L AUC0 分别为 10 55 4 01 24 99 8 64 和 61 22 12 39mg h L 他唑巴坦钠尿液平均排泄浓度为 46 68 结论结论 将不同剂量组的 哌拉西林钠的 Cmax AUC tn AUC 分别与剂量作图并进行线性回归 结果表明 Cmax AUC 随剂量的增大而增加 并且有很好的线性关系 对哌拉西林钠的主要药代动力学参数进行 单因素方差分析 结果表明哌拉西林钠的体内药代过程无性别差异 关键词 关键词 哌拉西林钠 他唑巴坦钠 药代动力学 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 5 页 共 36 页 Pharmacokinetics study of Sodium Piperacillin Tazobactam for Injection in healthy volunteers Student Zheng Yuxuan Advisor Qu Hengyan Liu Zeyuan Abstract Objective To investigate the pharmacokinetics of piperacillin and tazobactam in different dose of Piperacillin Sodium and Tazobactam Sodium for Injection 4 1 Methods A randomized open three way crossover study on the pharmacokinetics was conducted in 12 healthy volunteers The 12 healthy volunteers were received 1 25 2 5 and 5g dose of Piperacillin Sodium and Tazobactam Sodium for Injection in intravenous drip respectively The plasma and urinary samples were determined using HPLC method Results The main pharmaeokinetic parameters of Piperacillin Sodium were as follows Cmax of three different dosages 1 0g 2 0g and 4 0g are 48 19 9 40 116 72 16 28 and 245 94 52 29mg L t1 2 are 0 50 0 10 0 66 0 09 and 0 74 0 12h AUC tn are 38 29 8 59 105 35 19 14 and 267 65 58 35mg h L and AUC0 are 39 86 8 86 107 33 19 52 and 271 36 58 72mg h L Mean of excretory rate of Piperacillin Sodium is 63 15 The main pharmaeokinetic parameters of Tazobactam Sodium were as follows Cmax of three different dosages 0 25g 0 5g and 1 0g are 10 77 2 65 23 56 6 47 and 50 45 7 44mg L t1 2 are 0 57 0 16 0 75 0 37and0 90 0 27h AUC tnare9 70 3 93 23 58 8 43and58 64 10 80mg h L andAUC0 are10 55 4 24 99 8 64and 61 22 12 39mg h L Mean of excretory rate of Tazobactam Sodium is 46 68 Conclusion The pharmacokinetic characteristic of Piperacillin Sodium and Tazobactam Sodium in Chinese healthy volunteers were fitted with linear kinetic model It is showed that the sex related differences did not exist in the main pharmacokinetic parameters between males and females Key words Piperacillin sodium Tazobactam sodium Pharmacokinetics 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 6 页 共 36 页 1 前言前言 1 1 药物简介药物简介 哌拉西林钠他唑巴坦钠 4 1 是新一代的注射用碳青霉烯类抗生素 具有广谱的抗 菌 杀菌作用 哌拉西林为半合成青霉素类抗生素 他唑巴坦为 内酰胺酶抑制药 适用 于对哌拉西林耐药 但对哌拉西林他唑巴坦敏感的产 内酰胺酶的细菌引起的中 重度感 染 药物相互作用 本品与庆大霉素联合对粪肠球菌无协同作用 与氨基糖苷类药物合用 可以灭活氨基糖苷类药物 与丙磺舒合用 可以使哌拉西林半衰期延长 21 他唑巴坦半 衰期延长 71 和羧苄西林 阿洛西林 美洛西林 替卡西林一样 与能产生低凝血酶 原症 血小板减少症 胃肠道溃疡症或出血的药物合用时 将有可能增加凝血机制障碍和 出血的危险 治疗剂量范围内的主要不良反应有 1 皮肤反应 皮疹 瘙痒等 2 消化道反应 如腹泻 恶心 呕吐等 3 过敏反应 4 局部反应 如注射局部刺激反应 疼痛 静脉 炎 血栓性静脉炎和水肿等 5 其他反应 如血小板减少 胰腺炎 发热 发热伴嗜酸粒 细胞增多 血清氨基转移酶升高等 这些反应发生在本品与氨基糖苷类药物联合治疗时 此外 本品尚可见下列不良反应 1 腹泻 便秘 恶心 呕吐 腹痛 消化不良等 2 斑丘疹 疱疹 荨麻疹 湿疹等 3 烦躁 头晕 焦虑等 4 其他反应 如鼻炎 呼吸 困难等 1 2 试验目的试验目的 本试验的目的是研究江苏海宏制药有限公司及北京福瑞康正医药技术研究所研制的注 射用哌拉西林钠他唑巴坦钠在中国健康成人体内的药代动力学特征 为临床安全 合理用 药提供参考依据 2 材料 对象与方法材料 对象与方法 2 1 药品 药品 哌拉西林钠对照品 菏泽睿鹰制药集团 批号 20081101 2 2 受试者的选择受试者的选择 2 2 1 医学伦理医学伦理 本研究方案已通过军事医学科学附属医院药物临床试验伦理委员会审查批准 本临床 研究遵守赫尔辛基宣言的人体医学研究的伦理准则 并按照中国 GCP 的伦理要求进行 受 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 7 页 共 36 页 试者均在获知有关本研究的内容 性质 目的 以及参加和终止研究的条件 治疗风险与 获益 并由本人签署书面同意书后参加研究 2 2 2 入选及排除标准入选及排除标准 入选标准入选标准 健康成年受试者 男女各半 年龄 19 40 岁 年龄差在 10 岁以内 体重符合标准 体重指数在 19 24kg m 2范围内 体重一般不低于 50kg 病史 体格检查和临床检查 血常规 尿常规 血生化和心电图等 正常 HBsAg 抗 HCV 抗 HIV 梅毒抗体检查结果阴性 血压正常 收缩压 90 140mmHg 舒张压 60 90mmHg 脉搏 50 100 次 分 女性妊娠试验检查结果阴性 皮试检查结果阴性 具有与医护人员正常交流的能力并遵守医院有关管理规定 试验前受试者必须签署知情同意书并能配合完成规定的各项检查 排除标准排除标准 由于脑功能不全 精神发育障碍或言语问题不能与医护合作或交流者 过去两年中有药物依赖病史 烟除外 或癫痫 精神病史者 在服药前 24h 内饮酒者 试验期间不能中断吸烟 饮酒者 试验前 7 天内用过任何药物 试验前 3 个月内曾献血达 200mL 者 试验前 2 个月参加过其它药物临床试验者 对任何药物有严重不良反应或药物过敏史者 或皮肤过敏试验结果阳性者 个人或家族有支气管哮喘 皮疹 荨麻疹等过敏史者 妊娠 哺乳期妇女或近期计划怀孕者 肝 肾功能不全者 造血功能障碍 中枢神经损害者 有晕针史者 有出血史者 有溃疡性结肠炎 克罗恩病或假膜性肠炎者 有不明原因感染症者 研究者认为不适合参加本试验者 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 8 页 共 36 页 2 3 方法方法 2 3 1 给药方法和剂量给药方法和剂量 受试者给药当日进食统一标准早餐 30min 后 皮试结果呈阴性者 第一次给药皮试在 给药前一天下午进行 开始静脉滴注哌拉西林钠他唑巴坦钠 按试验设计剂量由护士人 员进行配制 1 25g 剂量的配置为将 1 支注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠 规格 2 5g 溶解于 20mL 生理盐水 充分混匀后吸取 10mL 稀释至终体积 100mL 2 5g 剂量的配置为将 1 支 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠 规格 2 5g 溶解于 20mL 生理盐水 充分混匀后 取出全部 稀释至终体积 100mL 5 0g 剂量的配置为将 2 支注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠 规格 2 5g 溶解于 20mL 生理盐水 充分混匀后 取出全部 稀释至终体积 100mL 然后进行静脉滴 注 滴注时间为 30min 并做记录 给药过程中及给药后 20 30min 观察有无过敏反应 试 验前后 24h 内不得饮酒及咖啡类饮品 2 3 2 试验分组试验分组 本试验采用三交叉拉丁方设计 受试者入选 12 例 根据随机数字表选取并分配随机数 字 将受试者随机分配至 6 个试验组 使其具有可比性 各组的用药顺序与给药剂量如表 1 所示 表表 1 用药顺序与给药剂量用药顺序与给药剂量 试验药物剂量 组别 第一周期第二周期第三周期 第 1 组低剂量 1 25g 中剂量 2 5g 高剂量 5 0g 第 2 组低剂量 1 25g 高剂量 5 0g 中剂量 2 5g 第 3 组中剂量 2 5g 高剂量 5 0g 低剂量 1 25g 第 4 组中剂量 2 5g 低剂量 1 25g 高剂量 5 0g 第 5 组高剂量 5 0g 中剂量 2 5g 低剂量 1 25g 第 6 组高剂量 5 0g 低剂量 1 25g 中剂量 2 5g 2 3 3 生物样本采集生物样本采集 血液样品分别于给药前及静滴开始后 10min 20min 30min 45min 1h 1 25h 1 5h 1 75h 2h 3h 4h 6h 时间点采静脉 血 5mL 置肝素化离心管中 3000rpm 离心 10min 取血浆于 20 保存备用 尿液样品分别于给药前及开始给药后 0 2 2 4 4 6 6 8 8 12 12 24h 为一时段 将 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 9 页 共 36 页 各时段尿液收集于一容器中 记录其总量并留取 2ml 于 20 保存备用 2 3 3 临床观察临床观察 2 3 3 1 临床观察临床观察内容内容 在临床试验中 需连续记录的有关受试者临床评价的信息 包括药物服用记录 用法 和剂量 依从性 标本收集记录 各观测点的体温 血压和脉博记录 检查的报告单均应 注明受试者的姓名和编码 性别 年龄 方案编码 检查日期及检查医生的签字和日期 2 3 3 2 试验用药的反应试验用药的反应 原始资料中记录受试者对试验用药的反应 以及受试者在临床试验前 中 后期状况 改变的信息 如可能 应评价其反应的程度 记录受试者的任何不适和研究者的评论 2 3 3 3 不良事件记录及处理不良事件记录及处理 研究者应按照规定的程序对不良事件进行收集 随访及报告 从受试者签署知情同意 书之后开始收集一般不良事件和严重不良事件 对于一般不良事件 停止收集报告的时间 为受试者结束试验后的当天 对于严重不良事件 停止收集报告的时间至少为受试者结束 试验后的 30 天 不良事件主要通过受试者主诉获得 按试验方案要求由负责医生检查并记录 如发生 不良事件 由负责医生根据其程度做相应处理 并详细记录 2 4 生物样本的测定生物样本的测定 2 4 1 血浆中哌拉西林钠的检测血浆中哌拉西林钠的检测 2 4 1 1 仪器仪器 Waters2690 高效液相色谱仪 GL 88B 旋涡混合仪 SIGMA 2K 15 型高速低温离心机 2 4 1 2 内标内标 雷诺嗪 2 4 1 3 特异性特异性 分别取 6 个不同人的空白血浆 300 L 按 6 1 5 血浆样品分析方法 项下方法操作 进样 10 L 获得空白样品的色谱图 1 A 将一定浓度的哌拉西林钠标准溶液和内标雷诺嗪 标准溶液加入空白血浆中 依同法进行样品处理 获得相应的色谱图 1 B 最低定量限 1 C 标准曲线中间浓度 取受试者给药后收集的血浆样品 依同法进行样品处理 获得相 应的色谱图 1 D 结果表明 空白血浆中的内源性物质不干扰药物和内标的测定 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 10 页 共 36 页 AB DC 图图 1 1 血浆中哌拉西林钠和内标雷诺嗪的典型色谱图血浆中哌拉西林钠和内标雷诺嗪的典型色谱图 drug drug 哌拉西林钠 哌拉西林钠 ISIS 雷诺嗪 雷诺嗪 A 空白血浆色谱图 B 空白血浆中加入哌拉西林钠 1mg L 1 及内标雷诺嗪 50mg L 1的色谱图 C 空白血浆中加入哌拉西林钠 200mg L 1及内标雷诺嗪 50mg L 1的色谱图 D 1 号受试者第一周期第 2 个取血点的色谱图 2 4 1 4 血浆中哌拉西林钠标准曲线制备及定量下限的确定血浆中哌拉西林钠标准曲线制备及定量下限的确定 取人空白血浆 270 L 分别精密加入系列标准溶液的哌拉西林钠溶液 30 L 和内标溶液 50 L 按 6 1 5 血浆样品分析方法 项下操作 记录色谱图 以血浆中哌拉西林钠浓度 x 为 横坐标 哌拉西林钠峰面积 As 和内标峰面积 Ai 的比值 As Ai y 为纵坐标 用加权最 小二乘法进行回归运算 求得回归方程 y 0 0159x 0 0629 r 0 9997 权重系数 w 1 x2 按上述条件 以哌拉西林钠信噪比大于3计算 其在血浆中的定量下限 LLOQ 为1mg L 1 按 6 1 5 血浆样品分析方法 项下操作 配制最低定量限血浆样品6份 进行HPLC分析 按照当日随行标准曲线方程求得实测浓度及实测浓度准确度 并计算RSD 结果见表2 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 11 页 共 36 页 表表 2 HPLC 法测定血浆中哌拉西林钠的定量下限法测定血浆中哌拉西林钠的定量下限 LLOQ 加入浓度 mg L 1 实测浓度 mg L 1 RE 准确度 Mean1 077 24107 24 SD0 1312 8212 82 RSD 11 96177 0911 96 2 4 1 5 精密度试验精密度试验 取1 5mL EP试管 按 6 1 6 2 血浆中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备含哌拉西 林钠浓度分别为2 5 100 600mg L 1的标准含药血浆 每个浓度做6份样品 及一条随行标准 曲线 连续做3天 共三批 每批每个浓度做6份样品 记录色谱图 计算哌拉西林钠峰面 积As和内标峰面积Ai的比值 代入随行的标准曲线求得实测浓度 计算批内和批间精密度 结果见表3 表表 3 HPLC 法测定血浆中哌拉西林钠的批内和批间精密度法测定血浆中哌拉西林钠的批内和批间精密度 浓度 mg L 1 批次 2 5100600 Mean2 5197 96583 62 SD0 204 4628 86 RSD 7 994 564 95 批内 C V 8 493 323 94 批间 C V 1 499 689 56 2 4 1 6 准确度试验 相对回收率 准确度试验 相对回收率 取 1 5mL EP 试管 按 6 1 6 2 血浆中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备含哌拉 西林钠浓度分别为 2 5 100 600mg L 1的标准含药血浆 每个浓度做 5 份样品 及一条随行 标准曲线 记录色谱图 以哌拉西林钠峰面积 As 和内标峰面积 Ai 的比值 代入随行标 准曲线求得实测浓度 计算实测浓度与加入浓度的比值即为准确度 结果见表 4 表表 4 HPLC 法测定血浆中哌拉西林钠的准确度法测定血浆中哌拉西林钠的准确度 相对回收率相对回收率 加入浓度 mg L 1 项目 2 5100600 Mean97 67 96 61 95 91 SD1 99 1 69 0 71 RSD 2 04 1 75 0 74 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 12 页 共 36 页 2 4 1 7 提取回收率 绝对回收率 提取回收率 绝对回收率 取 1 5mL EP 试管 按 6 1 6 2 血浆中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备含哌拉 西林钠浓度分别为 2 5 100 600mg L 1的标准含药血浆 每个浓度做 5 份样品 另取 1 5mL EP 试管 加入去离子水 270 L 内标及沉淀剂各 50 L 15000r min 1低温 4 离心 10min 取上清液加入哌拉西林钠溶液 使其浓度分别为 2 5 100 600mg L 1 每个浓度做 5 份样品 取上述样品 10 L 进行 HPLC 分析 记录色谱图 以第一种处理方法的药物峰 面积与第二种处理方法的峰面积相比较 即为绝对回收率 结果见表 5 表表 5 HPLC 法测定血浆中哌拉西林钠的提取回收率法测定血浆中哌拉西林钠的提取回收率 加入浓度 mg L 1 项目 2 5100600 Mean96 3499 60101 58 SD4 208 236 35 RSD 4 368 266 25 2 4 1 8 样品稳定性样品稳定性 哌拉西林钠尿液样品在室温放置 4h 及处理后在检测样品进样器中放置 8h 及在冰冻 24h 条件下稳定性良好 2 4 2 尿样中哌拉西林钠含量的检测尿样中哌拉西林钠含量的检测 2 4 2 1 仪器仪器 Waters2690 高效液相色谱仪 GL 88B 旋涡混合仪 SIGMA 2K 15 型高速低温离心机 2 4 2 2 内标内标 雷诺嗪 2 4 2 3 特异性特异性 分别取 6 个不同人的空白尿样 300 L 按 6 2 5 尿样分析方法 项下方法操作 进样 10 L 获得空白样品的色谱图 2 A 将一定浓度的哌拉西林钠标准溶液和内标雷诺嗪标准 溶液加入空白尿样中 依同法进行样品处理 获得相应的色谱图 2 B 最低定量限 2 C 标 准曲线中间浓度 取受试者给药后收集的尿样 依同法进行样品处理 获得相应的色谱 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 13 页 共 36 页 图 2 D 结果表明 空白尿样中的内源性物质不干扰药物和内标的测定 A B DC 图图 2 尿样中哌拉西林钠和内标雷诺嗪的典型色谱图尿样中哌拉西林钠和内标雷诺嗪的典型色谱图 drug 哌拉西林钠 哌拉西林钠 IS 雷诺嗪 雷诺嗪 A 空白尿样色谱图 B 空白尿样中加入哌拉西林钠 2 5 mg L 1 及内标雷诺嗪 50mg L 1 的色谱图 C 空白尿样中加入哌拉西林钠 500 mg L 1及内标雷诺嗪 50mg L 1 的色谱图 D 1 号受试者第一周期 2 4h 取样时间段的色谱图 2 4 2 4 尿样中哌拉西林钠标准曲线制备及定量下限的确定尿样中哌拉西林钠标准曲线制备及定量下限的确定 取人空白尿样 270 L 分别精密加入系列标准溶液的哌拉西林钠溶液 30 L 和内标溶液 50 L 按 6 2 5 尿样分析方法 项下操作 记录色谱图 以尿样中哌拉西林钠浓度 x 为横 坐标 哌拉西林钠峰面积 As 和内标峰面积 Ai 的比值 As Ai y 为纵坐标 用加权最小 二乘法进行回归运算 求得回归方程 y 0 0034x 0 0006 r 0 9999 权重系数 w 1 x2 按上述条件 以哌拉西林钠信噪比大于 3 计算 其在尿样中的定量下限 LLOQ 为 2 5mg L 1 按 6 2 5 尿样分析方法 项下操作 配制最低定量限尿样 6 份 进行 HPLC 分 析 按照当日随行标准曲线方程求得实测浓度及实测浓度准确度 并计算 RSD 结果见表 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 14 页 共 36 页 6 表表 6 HPLC 法测定尿样中哌拉西林钠的定量下限法测定尿样中哌拉西林钠的定量下限 LLOQ 加入浓度 mg L 1 实测浓度 mg L 1 RE 准确度 Mean2 583 12103 12 SD0 083 073 07 RSD 2 9898 392 98 2 4 2 5 精密度试验精密度试验 取 1 5mL EP 试管 按 6 2 6 2 尿样中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备含哌拉 西林钠浓度分别为 5 250 1600mg L 1的标准含药尿样 每个浓度做 6 份样品 及一条随行 标准曲线 连续做 3 天 共三批 每批每个浓度做 6 份样品 记录色谱图 计算哌拉西林 钠峰面积 As 和内标峰面积 Ai 的比值 代入随行的标准曲线求得实测浓度 计算批内和 批间精密度 结果见表 7 表表 7 HPLC 法测定尿样中哌拉西林钠的批内和批间精密度法测定尿样中哌拉西林钠的批内和批间精密度 浓度 mg L 1 批次 52501600 Mean5 04250 391552 31 SD0 402 7228 77 RSD 7 911 091 85 批内 C V 5 530 751 50 批间 C V 17 402 413 51 2 4 2 6 准确度试验 相对回收率 准确度试验 相对回收率 取 1 5mL EP 试管 按 6 2 6 2 尿样中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备含哌拉 西林钠浓度分别为 5 250 1600mg L 1的标准含药尿样 每个浓度做 5 份样品 及一条随行 标准曲线 记录色谱图 以哌拉西林钠峰面积 As 和内标峰面积 Ai 的比值 代入随行标 准曲线求得实测浓度 计算实测浓度与加入浓度的比值即为准确度 结果见表 8 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 15 页 共 36 页 表表 8 HPLC 法测定尿样中哌拉西林钠的准确度法测定尿样中哌拉西林钠的准确度 相对回收率相对回收率 加入浓度 mg L 1 项目 52501600 Mean105 45 99 00 98 64 SD8 48 0 93 2 24 RSD 8 05 0 94 2 27 2 4 2 7 提取回收率 绝对回收率 提取回收率 绝对回收率 取 1 5mL EP 试管 按 6 2 6 2 尿样中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备含哌拉 西林钠浓度分别为 5 250 1600mg L 1 的标准含药尿样 每个浓度做 5 份样品 另取 1 5mL EP 试管 加入去离子水 270 L 内标及沉淀剂各 50 L 15000r min 1 低温 4 离心 10min 取上清液加入哌拉西林钠溶液 使其浓度分别为 5 250 1600mg L 1 每个浓度做 5 份样品 取上述样品 10 L 进行 HPLC 分析 记录色谱图 以第一种处理方法的药物峰 面积与第二种处理方法的峰面积相比较 即为提取回收率 结果见表 9 表表 9 HPLC 法测定尿样中哌拉西林钠的提取回收率法测定尿样中哌拉西林钠的提取回收率 加入浓度 mg L 1 项目 52501600 Mean98 13100 7098 88 SD6 350 731 18 RSD 6 470 731 19 2 4 2 8 样品稳定性样品稳定性 哌拉西林钠尿样在室温放置 4h 及处理后在检测样品进样器中放置 8h 及在冰冻 24h 条件下稳定性良好 2 4 3 血浆中他唑巴坦钠血浆中他唑巴坦钠 2 4 3 1 仪器 仪器 Agilient 1100 高效液相色谱仪 GL 88B 旋涡混合仪 SIGMA 2K 15 型高速低温离心机 2 4 3 2 内标内标 茶碱 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 16 页 共 36 页 2 4 3 3 特异性特异性 分别取 6 个不同人的空白血浆 270 L 除不加内标溶液并另外补加 30 L 去离子水外 其余按 6 3 5 血浆样品分析方法 项下方法操作 进样 50 L 获得空白样品的色谱图 3 A 将一定浓度的他唑巴坦钠标准溶液和内标茶碱标准溶液加入空白血浆中 依同法进行 样品处理 获得相应的色谱图 3 B 最低定量限 3 C 标准曲线中间浓度 取受试者给药 后收集的血浆样品 依同法进行样品处理 获得相应的色谱图 3 D 结果表明 空白血 浆中的内源性物质不干扰药物和内标的测定 1 A1 B 1 C1 D A C D B drug IS IS drug IS drug 图图 3 血浆中他唑巴坦钠和内标茶碱的色谱图血浆中他唑巴坦钠和内标茶碱的色谱图 drug 他唑巴坦钠 他唑巴坦钠 IS 内标茶碱内标茶碱 A 空白血浆色谱图 B 空白血浆中含他唑巴坦钠 5mg L 1 和内标茶碱 50mg L 1 的色谱图 C 空白血浆中含他唑巴坦钠 50mg L 1 和内标茶碱 50mg L 1的色谱图 D 1 号受试者第二周期 10min 的血浆样品色谱图 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 17 页 共 36 页 2 4 3 4 血浆中他唑巴坦钠标准曲线制备及定量下限的确定血浆中他唑巴坦钠标准曲线制备及定量下限的确定 取人空白血浆 270 L 分别精密加入系列标准溶液的他唑巴坦钠溶液 30 L 和内标 溶液 50 L 按 6 3 5 血浆样品分析方法 项下操作 记录色谱图 计算他唑巴坦钠峰 面积 As 和内标峰面积 Ai 的比值 As Ai 以血浆中待测物浓度 x 为横坐标 待测物与 内标的峰面积比值 y 为纵坐标 用加权最小二乘法进行回归运算 求得回归方程 y 0 0198x 0 0009 r 0 9999 权重系数 w 1 x2 按上述条件测得的他唑巴坦钠在血浆中的定量下限 LLOQ 为 0 5mg L 1 配制他唑巴 坦钠浓度为定量下限的标准含药血浆 6 份 进行 HPLC 分析 记录色谱图 计算他唑巴坦 钠峰面积 As 和内标峰面积 Ai 的比值 代入当天的随行标准曲线方程求得实测浓度及实 测浓度准确度 并计算 RSD 结果见表 10 表表 10 HPLC 法测定血浆中他唑巴坦钠的定量下限法测定血浆中他唑巴坦钠的定量下限 LLOQ 加入浓度 mg L 1 实测浓度 mg L 1 准确度 Mean 0 51101 03 SD 0 012 09 RSD 2 072 07 2 4 3 5 精密度试验精密度试验 取1 5mL EP试管数支 按 6 3 6 2 血浆中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备含 他唑巴坦钠浓度分别为1 10 80mg L 1的标准含药血浆 每个浓度做6份样品 及一条随行标 准曲线 每天做一批及一条随行标准曲线 连续做3天 共三批 每批每个浓度做6份样品 记录色谱图 计算他唑巴坦钠面积As和内标峰面积Ai的比值 代入随行标准曲线求得实测 浓度 计算实测浓度与加入浓度的比值即为准确度 结果见表11 表表 11 HPLC 法测定血浆中他唑巴坦钠的批内和批间精密度法测定血浆中他唑巴坦钠的批内和批间精密度 浓度 mg L 1 批次 11080 Mean1 059 5275 49 SD0 050 372 21 批内 C V 11 51 9 50 6 96 批间 C V 3 49 2 26 1 80 2 4 3 6 准确度试验 相对回收率 准确度试验 相对回收率 取 1 5mL EP 试管数支 按 6 3 6 2 血浆中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 18 页 共 36 页 含他唑巴坦钠浓度为 1 10 80mg L 1的标准含药血浆 每个浓度做 3 份样品 及一条随行标 准曲线 记录色谱图 计算他唑巴坦钠面积 As 和内标峰面积 Ai 的比值 代入随行标准 曲线求得实测浓度 计算实测浓度与加入浓度的比值即为准确度 结果见表 12 表表 12 HPLC 法测定血浆中他唑巴坦钠的准确度法测定血浆中他唑巴坦钠的准确度 相对回收率相对回收率 加入浓度 mg L 1 项目 110 80 Mean90 84 97 85 101 34 SD1 21 1 55 1 07 RSD 1 33 1 58 1 06 2 4 3 7 提取回收率 绝对回收率 提取回收率 绝对回收率 取 1 5mL EP 试管 按 6 3 6 2 血浆中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备含他唑 巴坦钠浓度分别为 1 10 80mg L 1的标准含药血浆 按 6 3 5 血浆样品分析方法 项下操 作 另取 1 5mL EP 试管 加入去离子水 270 L 内标及沉淀剂各 50 L 15000r min 1低温 4 离心 10min 取上清液加入他唑巴坦钠溶液 使其浓度分别为 1 10 80mg L 1 每个浓 度做 3 份样品 取上述样品 50 L 进行 HPLC 分析 记录色谱图 以第一种处理方法的药 物峰面积与第二种处理方法的峰面积相比较 即为提取回收率 结果见表 13 表表 13 HPLC 法测定血浆中他唑巴坦钠的提取回收率法测定血浆中他唑巴坦钠的提取回收率 加入浓度 mg L 1 项目 110 80 Mean52 6974 9794 46 SD11 310 762 98 RSD 21 471 013 16 2 4 3 8 样品稳定性样品稳定性 唑巴坦钠血浆样品在室温放置 4h 及检测样品进样器中放置 24h 40 反复冻融 3 次及 40 冻存 30 天条件下稳定性良好 2 4 4 尿样中他唑巴坦钠尿样中他唑巴坦钠 2 4 4 1 仪器仪器 Agilient 1100 高效液相色谱仪 GL 88B 旋涡混合仪 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 19 页 共 36 页 SIGMA 2K 15 型高速低温离心机 2 4 4 2 内标内标 茶碱 2 4 4 3 特异性特异性 分别取 6 个不同人的空白尿样 270 L 除不加内标溶液并另外补加 30 L 去离子水外 其余按 6 4 5 尿样分析方法 项下方法操作 进样 50 L 获得空白样品的色谱图 4 A 将一定浓度的他唑巴坦钠标准溶液加入空白尿样中 依同法进行样品处理 获得相应的色 谱图 4 B 最低定量限 4 C 标准曲线中间浓度 取受试者给药后收集的尿样 依同法进 行样品处理 获得相应的色谱图 4 D 结果表明 空白尿样中的内源性物质不干扰药物 的测定 图图 4 尿样中他唑巴坦钠的典型色谱图尿样中他唑巴坦钠的典型色谱图 A 空白尿样色谱图 B 空白尿样中含他唑巴坦钠 5mg L 1的色谱图 AB CD 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 20 页 共 36 页 C 空白尿样中含他唑巴坦钠 100mg L 1的色谱图 D 4 号受试者第三周期 0 2h 时间段的尿样色谱图 2 4 4 4 尿样中他唑巴坦钠标准曲线制备及定量下限的确定尿样中他唑巴坦钠标准曲线制备及定量下限的确定 取人空白尿样 30 L 精密加入 270 L 流动相 取稀释后的尿样 270 L 加入系列标准 溶液的他唑巴坦钠溶液 30 L 按 6 4 5 尿样分析方法 项下操作 记录色谱图 以尿样中 待测物浓度 x 为横坐标 待测物的峰面积 y 为纵坐标 用加权最小二乘法进行回归运算 求得回归方程 y 11 018x 40 049 r 1 权重系数 w 1 x2 按上述条件测得的他唑巴坦钠在尿样中的定量下限 LLOQ 为5mg L 1 配制他唑巴坦钠 浓度为定量下限的标准含药尿样6份 进行HPLC分析 记录色谱图 将他唑巴坦钠峰面积 As 代入当天的随行标准曲线方程求得实测浓度及准确度 并计算RSD 结果见表14 表表 14 HPLC 法测定尿样中他唑巴坦钠的定量下限法测定尿样中他唑巴坦钠的定量下限 LLOQ 加入浓度 mg L 1 实测浓度 mg L 1 准确度 Mean5 122 45 SD0 295 79 RSD 0 062 37 2 4 4 5 精密度试验精密度试验 取 1 5mLEP 试管数支 按 6 4 6 2 尿样中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备含 他唑巴坦钠浓度分别为 10 100 640mg L 1 的标准含药尿样 每个浓度做 6 份样品 及一 条随行标准曲线 每天做一批及一条随行标准曲线 连续做 3 天 共三批 每批每个浓度 做 6 份样品 记录色谱图 计算他唑巴坦钠面积 As 和内标峰面积 Ai 的比值 代入当天 的标准曲线求得实测浓度 计算批内和批间精密度 结果见表 15 表表 15 HPLC 法测定尿样中他唑巴坦钠的批内和批间精密度法测定尿样中他唑巴坦钠的批内和批间精密度 浓度 mg L 1 批次 10100640 Mean9 6698 34622 18 SD1 074 7619 13 批内 C V 26 4513 938 70 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 21 页 共 36 页 批间 C V 7 210 810 79 2 4 4 6 准确度试验 相对回收率 准确度试验 相对回收率 取 1 5mL EP 试管数支 按 6 4 6 2 尿样中标准曲线制备及定量下线的确定 项制备 含他唑巴坦钠浓度为 10 100 640mg L 1的标准含药尿样 每个浓度做 5 份样品 及一条随 行标准曲线 按 6 4 5 尿样分析方法 项下操作 记录色谱图 将他唑巴坦钠面积 As 代 入当天的标准曲线求得实测浓度 计算批内和批间精密度 结果见表 16 表表 16 HPLC 法测定尿样中他唑巴坦钠的准确度法测定尿样中他唑巴坦钠的准确度 相对回收率相对回收率 加入浓度 mg L 1 项目 10100640 Mean96 32 98 23 100 83 SD2 63 1 37 1 19 RSD 2 73 1 40 1 18 2 4 4 7 提取回收率 绝对回收率 提取回收率 绝对回收率 取洁净 1 5mL EP 试管数支 按 6 4 6 2 标准曲线制备及定量下限的确定 项制备低 中 高 10 100 640mg L 1 三个浓度的质控样品各 5 份及一条随行标准曲线 按 6 4 5 尿样分析方法 项下操作 另制备低 中 高 10 100 640mg L 1 三个浓度的质控样品各 5 份 除尿样由水替代 其余按 6 4 6 2 标准曲线制备及定量下限的确定 项下操作 记 录色谱图 计算二者他唑巴坦钠峰面积之比 结果见表 17 表表 17 HPLC 法测定尿样中他唑巴坦钠的提取回收率法测定尿样中他唑巴坦钠的提取回收率 加入浓度 mg L 1 项目 10100640 Mean101 16 98 85 100 93 SD6 69 3 53 1 85 RSD 6 62 3 58 1 83 2 4 4 8 样品稳定性样品稳定性 他唑巴坦钠尿样在室温放置 4h 及检测样品进样器中放置 24h 40 反复冻融 3 次及 40 冻存 30 天条件下稳定性良好 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 22 页 共 36 页 3 药代动力学评价药代动力学评价 3 1 哌拉西林钠的药代动力学评价哌拉西林钠的药代动力学评价 3 1 1 哌拉西林钠血药浓度哌拉西林钠血药浓度 时间曲线时间曲线 受试者静脉滴注注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠 1 25g 2 5g 和 5 0g 后哌拉西林钠平均 血药浓度 时间曲线见图 5 0 50 100 150 200 250 300 350 01234567 时间 h 血药浓度 mg L 1 1 25g 1g PIPC 2 5g 2g PIPC 5 0g 4g PIPC 图图 5 受试者静脉滴注试验药物后哌拉西林钠平均血药浓度受试者静脉滴注试验药物后哌拉西林钠平均血药浓度 时间曲线时间曲线 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠人体药代动力学研究 本科生毕业论文 第 23 页 共 36 页 3 1 2 哌拉西林钠的药代动力学参数哌拉西林钠的药代动力学参数 药代动力学参数的计算 Cmax为试验的实测值 以梯形面积法计算 AUC0 tn AUC AUC tn Ctn ke tn 为最后一次可检测血药浓度的采样时间 Ctn为末次可测定样品的药 物浓度 以 LnC 对 t 进行回归 根据血药浓度 时间曲线末端血药浓度点 求得消除速率 常数 ke t1 2 0 693 ke CL F D AUC D 为哌拉西林钠的给药剂量 Vd F CL F ke 受 试者单次静脉滴注注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠1 25g 2 5g 和 5 0g剂量后哌拉西林钠的 平均药代动力学参数见表 18 将不同剂量组哌拉西林钠的 Cmax AUC0 tn AUC0 分别与剂量作图并进行线性