广东省汕头市高中生物 第一章 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序1课件 新人教版选修3.ppt

1 2基因工程的基本操作程序 第一步 目的基因的获取 目的基因 能够编码特定蛋白质的基因 1 2基因工程的基本操作程序 第一步 目的基因的获取 1 从基因文库中获取目的基因 1 基因文库的概念 将含有某种生物不同基因的dna片段 导入受体菌的群体中储存 各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因 2 基因组文库与部分基因文库 如 cdna 1 2基因工程的基本操作程序 第一步 目的基因的获取 2 利用pcr技术扩增目的基因 1 pcr的含义 多聚酶链式反应 2 前提条件 3 pcr的原理 已知部分目的基因核苷酸序列 可以合成引物 双链dna复制 体外 1 2基因工程的基本操作程序 第一步 目的基因的获取 2 利用pcr技术扩增目的基因 3 pcr的过程 变性 复性 延伸 循环 高温 中温 低温 92 55 75 taq聚合酶 引物1 引物2 原料 模板dna 目的基因 92 55 75 变性 92 55 75 退火 92 55 75 延伸 92 55 75 变性 92 55 75 退火 92 55 75 延伸 92 55 75 变性 92 55 75 退火 92 55 75 延伸 1 2基因工程的基本操作程序 第一步 目的基因的获取 2 利用pcr技术扩增目的基因 4 pcr的所需条件 酶 原料 模板 能量 引物 对 温度与ph taqdna聚合酶 四种dntp dttp datp dctp dgtp dna的两条链 热能 高能磷酸键中的能量 1 2基因工程的基本操作程序 第一步 目的基因的获取 3 人工合成法 1 化学合成法 蛋白质的氨基酸序列 mrna碱基序列 dna 基因 的核苷酸 碱基 序列 dna合成仪合成 2 反转录法 基因的mrna cdna 基因 反转录 需要逆转录酶和dna合成酶 1 2基因工程的基本操作程序 第二步 基因表达载体的构建 核心 1 目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在 并且可以遗传给下一代 同时使目的基因能够表达和发挥作用 1 2基因工程的基本操作程序 第二步 基因表达载体的构建 核心 2 表达载体的组成 启动子 目的基因 终止子 标记基因 复制原点 启动子 一段特殊的dna片段 位于目的进的首端 是rna聚合酶识别和结合的部位 驱动基因转录成mrna 终止子 一段特殊的dna片段 位于目的基因的尾端 使mrna的转录终止 1 2基因工程的基本操作程序 第二步 基因表达载体的构建 核心 2 表达载体的组成 启动子 目的基因 终止子 标记基因 复制原点 标记基因 一般为抗生素抗性基因或荧光蛋白基因 便于检测目的基因是否导入受体细胞 1 2基因工程的基本操作程序 第二步 基因表达载体的构建 核心 单酶切 a酶 用同种限制酶分别切割含目的基因的dna片段 两端分别切割 和质粒 切割一次 用dna连接酶连接 双酶切 a酶和b酶 用两种限制酶分别切割含目的基因的dna片段 两端分别切割 和质粒 用dna连接酶连接 a a b a b 标记基因 双酶切的优点 防止dn