8第四章 动物细胞工程制药 二 ppt课件

第四章动物细胞工程制药 二 第四章动物细胞工程制药 二 2 五 动物细胞培养方式和操作方式 动物细胞的培养方法 根据培养细胞 原代细胞培养和传代细胞培养 根据培养容器和方式 静止培养 旋转培养 搅拌培养 微载体培养 中空纤维培养 固定床和流化床培养 实际生产 悬浮培养 贴壁培养和贴壁 悬浮培养 第四章动物细胞工程制药 二 3 第四章动物细胞工程制药 二 4 第四章动物细胞工程制药 二 5 第四章动物细胞工程制药 二 6 第四章动物细胞工程制药 二 7 第四章动物细胞工程制药 二 8 第四章动物细胞工程制药 二 9 细胞分离 离心分离 从含有细胞的体液 血液 羊水 胸腹水等 中分离细胞 要求 离心机转速800 100r min 离心时间5 10min 注意 速度的时间不能过高和过长 以免挤压损伤细胞 第四章动物细胞工程制药 二 10 细胞分离 消化分离 从生物体取来组织块 剪碎 用消化液将其消化 使组织松散成细胞悬液 然后用缓冲液洗涤 离心 去除残留的细胞液获得细胞 常用的消化液 胰蛋白酶液 EDTA溶液 胰酶 柠檬酸盐溶液 胰酶 EDTA溶液等 第四章动物细胞工程制药 二 11 细胞计数 自动细胞计数器计数血球计数板计数结晶紫染色细胞核计数MTT染色计数 第四章动物细胞工程制药 二 12 细胞传代 接触抑制 营养因素 代谢废物 pH 氧供应等 一般来说 二倍体只能传40 50代 异倍体可无限进行传代 第四章动物细胞工程制药 二 13 细胞传代 悬浮细胞 分种于多个培养瓶 加生长液 贴壁细胞 先消化 再分种培养 第四章动物细胞工程制药 二 14 细胞的冻存和复苏 冻存 液态氮 196 可保存几年甚至几十年 先冰箱预冻 复苏 快融 第四章动物细胞工程制药 二 15 动物细胞大规模培养方法 第四章动物细胞工程制药 二 16 第四章动物细胞工程制药 二 17 细胞悬浮培养法的特点 第四章动物细胞工程制药 二 18 第四章动物细胞工程制药 二 19 贴壁培养 让培养细胞贴附在某种基质上生长繁殖的方法 优点 适用的细胞种类多 较容易采用灌流培养 达到高密度细胞 缺点 操作比较复杂 需要合适的贴附材料和足够的面积 培养条件不易均一 传质和传氧较差 第四章动物细胞工程制药 二 20 第四章动物细胞工程制药 二 21 第四章动物细胞工程制药 二 22 第四章动物细胞工程制药 二 23 第四章动物细胞工程制药 二 24 第四章动物细胞工程制药 二 25 第四章动物细胞工程制药 二 26 已商品化的微载体 第四章动物细胞工程制药 二 27 已商品化的多孔微载体 第四章动物细胞工程制药 二 28 结团培养 利用细胞本身形成结团的特点 相互结团后再用悬浮的方法培养 操作简便 节省了用于微载体的成本 第四章动物细胞工程制药 二 29 动物细胞培养的操作方式 分批式操作半连续式操作灌流式操作 第四章动物细胞工程制药 二 30 分批式操作 一种是将细胞和培养基一次性加入反应器内进行培养 此后细胞不断增长 产物不断形成和积累 最后将条件培养基 conditionedmedium 即经培养已含有细胞产物的培养基 或连同细胞一并取出 培养结束 另一种是先将细胞和培养基加入反应器 待细胞生长至一定密度后 向反应器内加入诱导剂或病毒等 经一段时间作用后 将反应物取出 如产生Namalwa干扰素和疫苗等 第四章动物细胞工程制药 二 31 半连续式操作 细胞和培养基一起加入反应器后 在细胞增长和产物形成过程中 每间隔一段时间 取出部分培养物 或单纯是条件培养基 或连同细胞 载体一起 然后补充同样数量的新鲜培养基 或另加新鲜载体 继续培养 该操作方式在动物细胞培养和药品生产中被广泛采用 优点 操作简便 生产效率高 可长期进行生产 反复收获产品 而且可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平 第四章动物细胞工程制药 二 32 灌流式操作 当细胞和培养基一起加入反应器后 在细胞增长和产物形成过程中 不断地将部分条件培养基取出 同时不断地补充新鲜培养基 与连续式操作不同之处在于取出部分条件培养基时 绝大部分细胞仍保留在反应器内 而连续式培养则同时也取出了部分细胞 该操作方式是近代用动物细胞培养生产各种药品最被推崇的方式 第四章动物细胞工程制药 二 33 灌流式操作的优点 细胞可处在较稳定的良好的环境中 有害代谢物浓度低 可极大地提高细胞密度 从而极大地提高了产品产量 产品在罐内停留时间缩短 可及时收留在低温下保存 有利于产品质量的提高 培养基的比消耗率较短 加之产量质量的提高 生产成本明显降低 第四章动物细胞工程制药 二 34 灌流式操作的应用 灌流式操作在某些生物反应器中是唯一可行的操作方式 中空纤维生物反应器 固定床或流化床式反应器 膜式生物反应器等 这些反应器中 细胞已被固定 在取出部分条件培养基和补充新鲜培养基和补充新鲜培养基时 细胞基本上都被保留反应器中 故采用该操作不存在困难 第四章动物细胞工程制药 二 35 六 动物细胞生物反应器及其检测控制系统 第四章动物细胞工程制药 二 36 什么是理想的动物生物反应器 体系中的其它材料 对细胞必须无毒性 生物反应器结构的传质 传热和混合性能好 密封性能良好 可避免一切外来微生物的污染 培养环境多种物化参数可自动检测和调节控制 控制的精确度高 且能保持环境质量的均一 可长期连续运转 尤其对于动物细胞而言 容器加工制造时要求内面光滑 无死角 拆装 连接和清洁方便 耐高压蒸汽消毒便于操作消毒 设备成本尽可能低 反应器可分为实验室规模 中试规模和生产规模 第四章动物细胞工程制药 二 37 第四章动物细胞工程制药 二 38 第四章动物细胞工程制药 二 39 第四章动物细胞工程制药 二 40 第四章动物细胞工程