第7章2-HPLC仪器装置ppt课件

Chapter7第三节仪器装置,高效液相色谱仪组成,流动相及贮液罐高压输液泵及梯度洗脱装置进样装置色谱柱检测器,馏分收集器数据处理及色谱工作站,流动相,泵,色谱柱,检测器,泵液,分离,检测,记录,进样阀,进样,一、流动相及贮液罐,1.贮液罐,材料应耐腐蚀，常用材料为玻璃、不锈钢或特种塑料（PEEK）。,吸滤头：多孔不锈钢过滤器，孔径0.45um。,流动相需经过0.45um滤膜过滤，以除去微小颗粒，尤其是使用缓冲液。,2.流动相脱气,流动相中有溶解的气体，在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡，从而影响检测器的工作。,1）低压脱气法使用水泵连接抽滤瓶和微孔玻璃漏斗，可完成脱气和过滤的双重任务。,3）超声波脱气法将流动相瓶置于超声波清洗器中，以水为介质超声脱气。,2）吹氦脱气法将氦气通入流动相以驱除其中的空气，适用于所有的溶剂。,4）真空脱气法-在线脱气打开真空脱气机的电源开关后，控制电路即开启真空泵，真空泵运行使真空箱内产生部分真空。真空度由压力传感器测定。根据传感器信号，真空脱气机通过运行或关闭真空泵来维持真空度,流动相,泵,色谱柱,检测器,泵液,分离,检测,记录,进样阀,进样,仪器装置,二、高压输液泵及梯度洗脱装置,1.要求,1）耐化学（酸、碱）腐蚀；,2）输出流量稳定，重复性高；,3）能在高压下连续工作；,5）易清洗、维修，具有梯度洗脱功能力。,4）输出流量范围宽分析柱：0.110ml/min,2.分类,恒流泵,恒压泵,3.往复型泵,1）原理,2）优点：体积小，流量调节方便，更换溶剂容易,3）缺点：对加工制造有特殊要求：耐磨损输出压力有明显的起伏脉动。,4）减小脉动措施,采用多头泵交替联动,A双柱塞并联泵,B双柱塞串连泵,4.梯度洗脱,问题：样品组成复杂，第一个组分的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至上百倍。,解决：,程序升温？,流量程序？,在一个分析周期中，不断改变流动相的组成，先用洗脱能力弱的溶剂，然后不断增加洗脱能力强的溶剂的组成，使各个组分能在最佳条件下得到洗脱。,1）定义(gradientelution)：,2）梯度洗脱装置,A、低压梯度（泵前混合),B、高压梯度（泵后混合),三、进样装置,柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。分柱前和柱后展宽。进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样系统要求较严。,1、自动进样器进样,2.六通阀进样,美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。,进样阀,样品,装样,废液,淋洗液,至分离柱,（）,（）,样品环,1,1,2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,*手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。*在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。,1)部分装液法:进样量最多为定量环体积的75，并且要求每次进样体积准确、相同2)完全装液法:进样量最少为定量环体积的3至5倍，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。,六通阀进样器的进样方式,四、色谱柱,色谱柱长：100mm-250mm色谱柱内径：4.6mm，2.1mm色谱柱填装：匀浆装柱,馏分收集器,用微处理机控制，按预先规定好的程序，或按时间，或按色谱峰的起落信号逐一收集和重复多次收集。,数据处理及色谱工作站,通用型和专用型通用型工作站包括软件、数据采集装置和接口，可用于不同型号的仪器，具有数据采集、校正、计算、绘图、贮存、管理等功能，能完成一般仪器系统测试，计算工作曲线和样品含量、绘制色谱图等。专用型是指为一定型号仪器配套的工作站，大都包括了仪器参数的自动控制功能，一般功能较强，如能贮存