酰胺药相关的耐药性革兰阳性球.ppt

2020/5/28,1,与B内酰胺药相关的耐药性,革兰阳性球菌影响MRSA，MRSCoNPBP所有B-内酰胺MREPBPPRSPPBP流感嗜血杆菌青霉素酶卡它莫拉菌青霉素酶(PRO-1,2)肠杆菌科的耐药性肺炎克雷伯菌,大肠杆菌ESBLs3,4代头孢肠杆菌，枸橼酸杆菌BushI型酶3代头孢.非发酵糖的革兰阴性杆菌嗜麦芽窄食单孢菌通透性，酶绿脓杆菌通透性，酶不动杆菌酶，通透性,2020/5/28,2,肠杆菌科的耐药性,主要菌主要酶类次主要酶肺炎克雷伯菌,大肠杆菌ESBLsBushI型酶肠杆菌，枸橼酸杆菌BushI型酶ESBLs,2020/5/28,3,ESBLs现状/studies/webt.htm,TEM3-90(IRT16种)71种SHV2-31(IRS1种)28种OXA10-3121种,CTX-M1-17PER:2IEB:2GES:1BES:1SPO:1OXY:2,2020/5/28,4,B-内酰胺酶的演变特征,TEM1,TEM2,TEM3,Gly39,Ser238,Lys39,Gly238,Gly104,lys104,2020/5/28,5,每一点变化可能改变底物的亲和力,噻肟他啶安曲南TEM-10.1250.250.125TEM-3326416TEM-70.5642CTX-M1164232,2020/5/28,6,ESBLTREE,SHV-2TEM-3PSESMENMEKOXYCTX-M-1TOHO-1CITD-1YENTBLIPCAKCCROB-1PC-1PER-1PER-2CBPACBLAVEB-1CPXA,中国，台湾,日本,泰,2020/5/28,7,ESBLs现状/studies/webt.htm,TEM3-90(IRT16种)71种SHV2-31(IRS1种)28种OXA10-3121种,CTX-M1-17PER:2IEB:2GES:1BES:1SPO:1OXY:2,2020/5/28,8,SHV-8,SHV-1,SHV-10,SHV-11,SHV-2a,SHV-12,SHV-2,SHV-5,SHV-?,SHV-9,SHV-7,SHV-?,SHV-4,SHV-3,SHV-6,179,179,35,130,54or140,35,35,240,240,205,205,240,54or140,8or43,8or43,238,238,SHV突变相关图,JHeritageJAC，1999，44，309318,2020/5/28,9,SHV酶族的地理分布JAC，1999，44，309318,B-酶首例年有报告的国家pISHV-1瑞士19747.6SHV-2德国1983中国,丹麦,法国,西班牙,南非7.6瑞士,英国SHV-2a德国1986朝鲜,瑞士7.6SHV3法国1986英国,美国7.0SHV4法国1987比利时,葡萄牙,英国,美国7.8SHV5智利1987澳洲,奥地利,丹麦,埃及,法国,希腊8.2意大利,波兰,南非,台湾,英国,美国SHV6法国19917.6SHV7美国19937.6SHV8美国19907.6SHV9,10希腊1996,978.2SHV11瑞士19977.6SHV12瑞士1997阿尔几利亚，朝鲜8.2SHV28中国浙江2000,2020/5/28,10,ESBLs现状/studies/webt.htm,TEM3-90(IRT16种)71种SHV2-31(IRS1种)28种OXA10-3121种,CTX-M1-17PER:2IEB:2GES:1BES:1SPO:1OXY:2,2020/5/28,11,CTXM族,亚组1亚组2亚组3亚组4CTX-M-1CTX-M-2CTX-M-9CTX-M-8MEN-1TOHO-1CTX-M-13CTX-M-3CTX-M-4CTX-M-14CTX-M-10CTX-M-5CTX-M-15CTX-M-11CTX-M-6CTX-M-7,2020/5/28,12,CTX-M系列的发现历史(美国基因库资料),发现年,地址,发现菌pI参考文献CTX-M-11990,德国,E.coli8.911Men-11992,意大利,K.oxytoca8.99CTX-M-21992,阿根廷,S.typhimurium7.910Toho-11995,日本E.coli7.813CTX-M-31998,波兰华沙C.reundii8.48CTX-M-41998,俄罗斯S.typhimurium8.412CTX-M-51998,拉特维亚S.typhimurium8.816CTX-M-61998,西腊S.typhimurium8.417CTX-M-71998,西腊S.typhimurium8.417Toho-21998,日本E.coli7.714CTX-M-82000,布鲁塞尔E.Cloacae7.618CTX-M-92000,西班牙E.coli8.03CTX-M-112000,北京协和K.pneumoniae8.019CTX-M-13-152001,广州人民K.pneumoniae8.020,2020/5/28,13,ESBL在东南亚,1999TEM-52，SHV-2a,12ECOKL-南韩1997TEM-26CTX-M5ECOKL-日本SHV-2,12,241999SHV-2a,5,12VEB-1,ECO,KL-泰国2000T-10CTX-M-3ECO,KL-台湾SHV-2,5,12,25,261992SHV-2，5，12，EN,KL-,中国2000CTX-M-11，13,14,15KL-,ECO中国2000SHV-28中国,2020/5/28,14,不同细菌中的ESBL出现特点P.Hawkey,大肠杆菌肺克肠杆菌属枸橼酸杆菌111CTX-M-132CTX-M-13,TEM1B2CTX-M-14,TEM1B111CTX-M-14,SHV122CTX-M-15,SHV11,TEM1B11SHV12,TEM1B,2020/5/28,15,如何测出ESBLs,头孢噻肟克拉维酸头孢他啶克拉维酸,头孢噻肟,阿莫西林克拉维酸,头孢噻肟,不同程度水解ESB体外可被棒酸抑制但IRT可抑制棒酸作用出现非TEM非SHV酶,MIC8,MIC1,2020/5/28,16,抗生素MIC（g/ml）敏感性MIC50MIC90平均MICR%I%S%头孢他啶6900100头孢噻肟0200100头孢曲松9800100头孢吡肟6300100氨曲南7800100头孢哌酮/舒巴坦0.2510.33800100哌拉西林/他唑巴坦242.36094亚胺培南5300100头孢美唑0.520.87100100环丙沙星0.06220.1418092庆大霉素1112098,52株ESBL阴性肺炎克雷伯菌的耐药情况,2020/5/28,17,抗生素MIC（g/ml）敏感性MIC50MIC90平均MICR%I%S%头孢他啶42564.914086头孢噻肟3212834.8393625头孢曲松12825662.268725头孢吡肟141.10793氨曲南166413.5363232头孢哌酮/舒巴坦8327.87786哌拉西林/他唑巴坦242.20496亚胺培南7900100头孢美唑11282.111089环丙沙星0.06640.41413186庆大霉素15123.78092,28株ESBL阳性肺炎克雷伯菌的耐药情况,2020/5/28,18,28株ESBL阳性Kpn中两种抗生素的MIC比较,25612864321684210.50.3,1221111221422111111.3.51248163264128256,头孢噻肟,mg/L,头孢吡肟mg/L,R,R,2020/5/28,19,28株ESBL阳性Kpn中两种抗生素的MIC比较,25612864321684210.50.3,11142233321121.3.51248163264128256,头孢噻肟,mg/L,头孢他啶mg/L,R,R,2020/5/28,20,大肠杆菌肺炎克雷伯菌,头孢他啶mm,头孢噻肟,2020/5/28,21,大肠杆菌肺炎克雷伯菌,头孢曲松,头孢他啶mm,2020/5/28,22,头孢他啶头孢噻肟等电点pI值棒酸抑制结合子CK64648.8+结合子CK72645.4、7.6、8.8+结合子CK81168.8+结合子CK101327.6、8.8+结合子CK122647.8、8.8+结合子CK152327.6、8.8+结合子CK160.5167.6、8.8+结合子CK181647.8、8.8+结合子CK212645.4、7.6、8.8+结合子CK232645.4、7.6、8.8+,接合子的MIC值和等电点的结果(1),2020/5/28,23,头孢他啶头孢噻肟等电点pI值棒酸抑制结合子CK241328.8+结合子CK251327.6、8.8+结合子CK262647.6、8.8+结合子CK44325.4、6.3+结合子CK141645.4、7.6、7.8+结合子CK221327.6、7.8+结合子CK272645.4+结合子CK1340.255.4+结合子CK17320.255.4+结合子CK2010.255.4（条带很淡）+,接合子的MIC值和等电点的结果(2),2020/5/28,24,ESBLs及AmpC的等电点差别,等电点,TEMSHVOXACTX-MAmpC,ESBLs,2020/5/28,25,A胶,B胶,等电聚焦鉴别质粒介导的ESBL和持续高产AmpC酶,AmpC对照,2020/5/28,26,一种新的对头孢噻肟高活性pI偏碱性的ESBL,到当时为止，CTX-M系列的ESBL有10个根据基因序列，分为3组组内同源性很高，97%以上组间有80%的同源性,2020/5/28,27,为克隆ESBL耐药基因所设计的引物,引物名引物序列位置TEM55-GTATCCGCTCATGAGACAATAACCC-3(-60至-36)TEM35-GGCACCTATCTCAGCGATCTGTC-3(818至840）SHV55-GGGTTATTCTTATTTGTCGC-3(-67至-48）SHV35-TTAGCGTTGCCAGTGCTC-3(844至861）CTX515-ATGGTTAAAAAATCACTGCGCC-3(1至22）CTX525-ATGATGACTCAGAGCATTCG-3(1至20）CTX535-CGGCCTGTATTTCGCTGTTG-3(61至80）CTX35-TGGGTTACGATTTTCGCCGC-3(853至872）,2020/5/28,28,氨基酸的位点3980117122143278289CTX-M-1EVDLSDNCTX-M-3EANLADDCTX-M-NGANPAHND*,CTX-M-N与CTX-M-1、CTX-M-3突变点的比较,2020/5/28,29,产ESBL的临床株的流行情况(王辉工作),细菌菌数ESBL(+)株发生率(%)E.coli44511.4K.pneumoniae431739.5E.cloacae5036.0C.freundii2528.0总计1622716.7,2020/5/28,30,结合子PCR和序列分析(王辉工作),结合子供体bpICTX-M3-PCRTEM-PCR序列分析a序列分析a2Teco5.4,8.8CTX-M3ND15Tkpn5.4,8.6CTX-M3ND25Tecl5.4,7.0,7.2,8.2,8.8CTX-M3ND26Tcfr5.4,8.8CTX-M3ND1Teco5.4,7.6,8.3NDTEM-1b:eco=E.coli,kpn=K.pneumoniae,ecl=Enterobactercloacae,cfr=Citrobacterfreundiia:ND=Notdone,2020/5/28,31,大肠杆菌为什么高度耐环丙沙星30株基因分析（王辉工作）,旋转酶突变：gyrA30/30至少2个突变点，parC30/30有一个突变点gyrB6/6无突变点逆泵marAsoxS无过量表达AcrAB18/30(60%)有过量表达膜蛋白OmpF30/30缺无，减少吸收,2020/5/28,32,肠杆菌科的耐药性,主要菌主要酶类次主要酶肺炎克雷伯菌,大肠杆菌ESBLsBushI型肠杆菌，枸橼酸杆菌BushI型ESBLs,2020/5/28,33,产气肠杆菌中的ESBLs(1)AAC，1998，42(3):596-600,在抗生素选择性压力下，易产生稳定高产染色体1型酶近来证实本菌也可产生质粒型ESBLs从美国Virginia州某教学医院分离出31株产气肠杆菌，29株为SHV4，1株SHV3，1株SHV5，这些质粒可转移至大肠杆菌这31株菌对头孢吡肟，亚胺培南均敏感细菌室也要查肠杆菌属中的ESBL，并报告药敏结果,2020/5/28,34,许多阴沟、产气肠杆菌也产ESBLJClinMicrobiol.2000;38(2):542,希腊,阴沟肠杆菌中18/56(25%)产气肠杆菌中7/12(58%)包含cazR,ctxR,croR,ptzR,4代头孢R不同株耐药谱不同,2020/5/28,35,JournalofClinicalMicrobiologyJuly,1999Volume37,(7):2165-2169,法国23家医院：123株产气肠杆菌21家有流行的克隆株：ESBLTEM-24,2020/5/28,36,台湾JCM2000，38:4320-51999年19月菌株,1999年19月，1210株大肠杆菌查18株产ESBLs、耐CAZ、CTX、FOX菌数目酶种类10CTX-M-3、TEM-12SHV-12、TEM-11SHV-5、TEM-14未知、TEM-11TEM-10,2020/5/28,37,吴伟元在协和收集的阴沟肠杆菌中3株质粒上载有CTX-M-3,2020/5/28,38,讨论,产ESBL的耐药是目前抗生素面临的挑战之一监测产ESBL菌株对临床治疗的重要性一种新的CTX-M型ESBL,2020/5/28,39,AmpC的发展现状,当调节基因发生突变，其作用受到抑制，对3代头孢产生高水平、持续的去遏制的耐药80年代前，都报道为染色体型80年代后，有质粒型的，增加了传播力AmpC种类也在不断增加。,2020/5/28,40,协和医院查24株临床株阴沟肠杆菌中的SSBLs,高产AmpC+-+54ESBL-141,8株E.cloacae(阴性对照)均为阴性,2020/5/28,41,吴伟元的工作,6株阴沟肠杆菌持续高产染色体AmpC酶的原因是基因组中AmpD基因发生了突变有一株形成无意义密码子终止了蛋白质的形成,2020/5/28,42,AmpC树1998年总结,FOX-1,BIL-1,LAT-1,阴沟肠杆菌,MIR-1,粘质沙雷菌,AmpC,CMY-1,MOX-1,绿脓杆菌,AmpC,AmpC,大肠杆菌,AmpC,枸橼酸杆菌,AmpC,CMY-2,IIIIIICMY-1(朝)LAT1-4MIR-1(美)CMY8-11(台,中国)CMY2,4-,7ACT-1(美)MOX-1(日本)BIL1,ACT-1,2020/5/28,43,质粒AmpC的最新分类及流行,IIIIIICMY-1(朝)LAT1-4MIR-1(美)CMY8-11(台,中国)CMY2,4-7ACT-1(美,中国)MOX-1(日本)BIL1,2020/5/28,44,台湾JCM2000，38:4320-51999年19月菌株,1999年19月，1210株大肠杆菌查18株产AmpC、耐CAZ、CTX、FOX菌数目酶种类9未知、TEM-14CMY-2、TEM-13未知、TEM-11未知、CMY-2、TEM-11CMY-2、CTX-M-3、TEM-1,2020/5/28,45,美国：SHV-5ESBL、BIL-1AMPC在同一质粒上,ESBL质粒AmpC=SSBLSuperSpectrumBetaLactamases,2020/5/28,46,SSBL鉴定有一定困难，常规难以进行分子水平的方法CDCTenoverJCM1999,37:4063-70,3ESBL+1AmpC一株菌美国某城市、38个实验室产加测试假阴性8个(21)假阳性7个(18),2020/5/28,47,陈轶兰的工作:在大肠杆菌中的12号株,发现可转移的大质粒中含有ACT-1ESBL其意义是BushI型AMP-C基因也可存在与其他肠杆菌科菌中,2020/5/28,48,AmpC树1998年总结,FOX-1,BIL-1,LAT-1,阴沟肠杆菌,MIR-1,粘质沙雷菌,AmpC,CMY-1,MOX-1,绿脓杆菌,AmpC,AmpC,大肠杆菌,AmpC,枸橼酸杆菌,AmpC,CMY-2,IIIIIICMY-1(朝)LAT1-4MIR-1(美)CMY8-11(台,中国)CMY2,4-,7ACT-1(美)MOX-1(日本)BIL1,ACT-1,2020/5/28,49,产AmpC酶菌的等电点和药敏JCM2000,38:1793,10株产AmpC酶菌等电点9.0-9.1对头孢吡肟MIC90：0.5mg/L对亚胺培南MIC90：0.13mg/L,2020/5/28,50,头孢吡肟对Bush1组B-内酰胺酶稳定,.Km,对头孢菌素的亲和力uM细菌头孢吡肟头孢他啶头孢噻肟阴沟肠杆菌58-1803-170.05-0.2弗劳地枸橼酸杆菌属1590.9-1.2-绿脓杆菌879413160.03Fung-Tomc,clinicalMicroiolo