可见分光光度法和紫外分光光度法PPT课件

.第1，13章可见分光光度法和紫外分光光度法，visiblespetrophometryandultravioetspectrophotometry，2，内容提要，介绍了物质吸收分光光度计的基本原理透光率和吸光度Lambert-beer定律可见分光光度计的测量方法提高测量灵敏度和准确度的方法，uv分光光度法。3，基本要求教育，了解光的基本特性和物质对光的选择性吸收。理解吸收光谱的意义。了解兰勃特-伯定律和透射比、吸光度、摩尔吸光系数、质量吸光系数等基本概念及其相互关系的分光光度计的基本原理。理解光的加法。了解分光光度计的基本结构，掌握可见分光光度计的测量方法标准曲线方法和标准比对方法，了解非吸光系数比较方法和差示分光光度计。了解如何提高测量灵敏度和准确度。理解紫外分光光度计的一般概念。4，1节物质的吸收光谱，1，物质的选择性吸收光照射物质，物质可以吸收光，将原来的基态转化为激发态，只有分子的能量(h)与正在辐照的物质粒子的基态和激发态能量的差值(e)相同时才能吸收。m(基态)hm *(激发态)物质对光的吸收是可选的，当溶液选择性地吸收特定颜色的光时，它是吸收光的互补光。5，第一种物质的吸收光谱，6，第一物质的吸收光谱，第二，物质的吸收光谱依次通过不同波长的单色光通过着色溶液，测定溶液的吸光度A(absorbance)。用横坐标绘制波长，用纵坐标绘制吸光度a，称为吸收曲线或吸收光谱。吸收光谱中吸光度最大的地方用最大吸收波长表示。一般来说，max是定性识别物质的基础。浓度不同的溶液，max不变，浓度与峰值成正比，是定量分析的依据。7，物质第一部分的吸收光谱，3(邻亚培南)合铁(II)离子的吸收光谱，max=510nm溶液的不同浓度，max保持不变，浓度与最高点成正比。8，第二节分光光度法基本原理，1，透射率和吸光度入射光强度I0，吸收光强度Ia，通过光强度It测量的高光强度IRI 0Ia It IR测量的溶液和基准溶液的吸收池等材料和厚度，高光强度影响相互抵消，常识I0Ia It，9，第二节分光光度法的基本原理，第一，透射率和吸光度透射光的强度It与入射光强度I0的比率称为吸光度，以t表示透射率的负对数称为吸光度，以符号a表示。a越大，溶液吸收的光线越多。10，第二节分光光度法基本原理，2，Lambert-beer定律Lambert-beer定律：a=BC溶液厚度b，单位cm；浓度c，单位mol-1；摩尔吸光系数，lmol-1cm-1单位caab质量吸光系数a的单位LG-1cm-1a，可通过以下相互转换使用。第11，3节可见分光光度法，第1，分光光度计的主要组成部分光源单色探测器吸收池信号处理和显示光源：钨灯，3203200nm连续光谱发射，单色光器：棱镜或光栅分光光度计提供单色光。吸收组：用于盛溶液的分光光度计容器。探测器：将吸收池的光转换为光电流，放大输入指示器，然后显示。在第12，3节中可见的分光光度法，(a)自准直单色器图(b)棱镜对光的色散作用，第13，3节所示的分光光度法，第二，用测量方法标准曲线法测定系列浓度标准溶液，吸光度a测量，作为溶液浓度c的吸光度a的示意图，坐标原点的直线。在相同条件下测量所测量溶液的吸光度，并在标准曲线上确认溶液浓度。，维生素B12的标准曲线，第14，3节可见分光光度法，第2，测量方法标准对照组预制接近被测量液体浓度的标准溶液(其浓度以cs表示)，以As测量吸光度，测量被测量液体的吸光度Ax，被测量液体浓度cs可从下面获得，提高15，4节测量灵敏度和准确度的方法，1，分光光度计的误差溶液偏离了贝尔定律，A-c曲线弯曲。主要原因：化学因素吸收物质解离、结合、溶剂等现象；光学因子复色光引起对贝尔定律的偏差。两种不同吸收系数的混合光对贝尔定律的偏差，提高16，4节测量灵敏度和准确度的方法，第一，通过分光光度计的误差测量仪，误差光电管的灵敏度差异，光源的不稳定性和读数不许可。透射率误差t引起的浓度误差c:透射率20%到65%，如果a为0.2到0.7，则浓度相对误差较小。测量误差和透射率之间的关系，17，4节提高测量灵敏度和准确度的方法，3，选择适当测量条件波长的显色剂使用溶液的酸度显色时间和温度共存离子的干扰和消除，第18，5节紫外线分光光度法简介，第1，751-G分光光度计的紫外线分光光度法，适合在近紫外线(200380nm)下测定特性吸收物质。751-G分光光度计配备了可见分光光度计的可转换钨光源和uv分光光度计的氢(氘)光源(200-400nm发射)。紫外线不能通过玻璃，因此uv分光光度计的棱镜、透镜、氢灯以及光电池和吸收源等必须用石英制造。19，5节uv分光光度法简介，751-G分光光度计光学系统间图1。钨灯2。氢灯3。凹面镜子4。平面镜5。狭缝6。准直器7。石英棱