1D-Gel分析

1分析 分析条带的分子量与质量 1重要的功能。 通过测量条带位置，并与 通过测量条带亮度，即累积光密度 (比较各条带之间质量的相对比例。 1修饰照片 使用 得凝胶在图片上横平竖直。而且必须将加样孔置于图片上方，否则将影响到条带的分析结果。 将凝胶边上多余的部分裁切掉，既可美化图片画面，也可减少电脑处理数据时的工作量。 用鼠标拖此箭头旋转图片 后在图上画出选定的方框 - 成一张整齐的新图片进行分析测量 旋转并裁切后的照片 设置泳道 1. 点 加未选上的泳道。 泳道不规则时可以调整泳道为不规则形状的。各泳道宽度也可不一致。 设置完成后点 置窗口 泳道上的光密度分布曲线 当前泳道的图象 可以用鼠标拖边界，也可以移动泳道位置 这是显示泳道上光密度分布曲线的窗口。 曲线下方显示了当前选中泳道的图象。 菜单用来调整曲线的坐标，一般不必用它，点一下 第四道的 置条带选择 点 序会自动找到一些明显的条带 先删除掉不感兴趣的条带，再把那些未被自动选择的条带加上。 点 能加上或删去一个条带。还可以在 调整条带的宽度。 把这个值设大点，能使自动找到的无用条带少一些。 对荧光的电泳照片，选上 点一下 保证条带曲线不反向。 照片上看不出的弱峰在 条带宽度的选取原则 每个条带的边界应该是 在对不同泳道上的同一分子量各条带进行对比分析时，应保持这些条带的宽度一致。以最宽的那个条带为准。 这两个原则经常不能同时满足，只能根据情况满足其中一条。 条带边界在山脚处 相同分子量的条带边界一致 各种泳道与条带的选择方式 泳道跑歪了也可以处理 扣除背景 扣除背景是必须的操作，在凝胶电泳条带的分析中，背景值经常远大于条带的值，如果不扣除，将会导致条带的分析数据大大偏离其真实数值。切记切记！ 扣除背景的必要性 在照片背景较亮时，背景强度对光密度测量值的影响非常大，导致的实验误差也会非常大，所以必须扣除背景。 景 未扣背景 相差 50%，有显著性差异 相差 10%，无显著性差异 扣与不扣背景相差甚大 只用 在 置 如果要测量各条带的分子量，就必须与 在 就是说，如果 在 如果 必须在以后的设置中把跑丢的那个值给删除。 当 定要重新手动指定 点 点照片上条带就被定为 可以选多个 指定了 要输入各条带的分子量数据。一张照片上只能输入一种果使用了两种 只能用一个来定标。 设置 M. W. 1.点 指定 新建一个 2.点 输入各条带的分子量数值 3.点 K 定位 如果各泳道的速度不一致，此功能可以进行有限的校正。前提是要在两边各作一个同样的 后在分别在分子量相同的 们之间就能拉出一根校正线。这样在分析测量时能够对跑歪的条带分子量进行较正。 可以看结果了。点 点 测量分析结果 光密度分析结果该选哪一项 ? % 选这个最保险！ D 光密度与样品量之间的关系 正相关，但不是正比。也就是说，光密度相差一倍并不意味着样品的量也相差一倍。 项是直接反映了样品量之间的对比。但要注意的是， 此用 其他的定量方法误差更大。 此读数时要注意别搞错位数。 把数据送到 送入 粗红的数值就是各条带的分子量与光密度值 H:1 2 3 4 ( ( ( (000 93186000 11400050 21300000 106000 490 91070 500 298000 490 20500050 5805600 11300096000 91070 298000 20500096000