荞麦蛋白质提取方法比较

1、荞麦蛋白质提取方法比较 荞麦蛋白质提取方法比较 荞麦中富含人体中必须的赖氨酸、精氨酸等必须氨基酸，营养价值很高。可以用于食品加工业，制成富含蛋白质的食品及植物类蛋白质饲料。 通过碱法和盐法提取荞麦蛋白质，对蛋白质提取方法进行优选。以蛋白质提取率为标准，碱法以提取液ph，料液比，温度，及时间做单因素试验；盐法以盐浓度，料液比，温度，及时间进行单因素实验；通过正交试验对其蛋白提取工艺进行比较，选择最佳的提取方法。为荞麦蛋白质的综合利用和工业化生产提供参考和实验依据。 碱法提蛋白的原理:荞麦蛋白质多为碱性蛋白质，大量的二硫键和疏水基团使蛋白质的溶解度下降，而naoh可以破环蛋白质分子的次级键和氢键，

2、使某些极性基团发生解离，使蛋白质分子表面有相同电荷，增加蛋白质的溶解度。 盐法提蛋白的原理：利用盐溶原理（蛋白质在水溶液中，加入中性盐，如硫酸钠，硫酸铵，氯化钠等，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大）。 提取液蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝法。 （荞麦蛋白质提取率=提取液中蛋白质含量/荞麦总蛋白含量x100%） 第一步：以牛血清蛋白为标准溶液绘制蛋白质标准曲线，作为定量的依据，用于以后的测定荞麦蛋白质的含量。（以吸光光度值为横坐标，蛋白质含量为纵坐标，计算出其函数表达式） 第二步：分别以提取液ph、料液比、温度、时间为单因素，在其他条件

3、一定的前提下，进行单因素实验，用来确定每个单因素实验最佳提取条件。（摸索性实验） 实验方法：荞麦粉加碱液浸提（1-5h）3000r/min低速离心10min取0.1ml上清液，稀释30倍加考马斯亮蓝，测od值，计算蛋白质含量。 分别测定每个单因素实验的最佳提取条件，如ph单因素实验，确定料液比为1:15，温度40度，时间两小时，ph梯度为8、9、10、11、12进行试验。然后以ph为横坐标，提取率为纵坐标绘制曲线图。确定最佳的提取条件。如果绘制的曲线是先上升后下降或者是先上升后保持不变，那么那个转折点就是最高的提取条件。 第三步，确定每个单因素的最佳提取条件，上下取三个水平，进行四因素上水平正

4、交试验，进行九次实验，计算其提取率，计算方差和极差，用来确定哪个单因素对提取工艺的影响因素最大，并选择最佳的提取条件进行试验，计算最优提取率。 盐法提蛋白的过程和碱法提蛋白相似，分别以物料比，盐浓度，温度和时间做单因素实验，并进行正交试验，选择最优的提取率。 最后比较碱法和盐法的提取率，进行选择。 注： 1. （1）考马斯亮蓝原理：考马斯亮蓝中性染料，在酸性溶液中与蛋白质中的碱性氨 基酸和芳香族氨基酸结合，使染料的吸收峰位置变为595nm，同时溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。在595nm下测定吸光度值，与蛋白质的浓度成正比。 （2）考马斯亮蓝注意事项：不可用石英比色皿，因染色不易洗去，可用塑料或

5、者玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑料比色皿绝不可用乙醇或者丙酮长时间浸泡。 2. 各因素对蛋白提取率的影响： (1) 料液比：料液比对蛋白提取率影响不大，随料液比增加提取率增加，达到一定 程度后提取率保持不变。开始保持不变的点即为单因素下的最佳提取率。 (2) 温度:随温度升高，溶液的粘度开始增大，分子运动的速度减慢，阻止蛋白质继 续溶解，从而造成提取率下降。 另外，温度过高，导致蛋白质变性，蛋白质沉淀使蛋白质溶解度降低，从而降低提取率。 （3）时间:时间过短，荞麦蛋白质不能与碱性溶度充分接触，使蛋白质不能与纤维素成分分离；时间长，会增加非非蛋白成分与蛋白质共沉机会

6、，降低产品质量。 （4）ph：ph过高，导致蛋白质变性沉淀，降低其溶解度。并且使蛋白质色泽成深褐色，降低产品质量。 （5）盐浓度：盐浓度增加到一定程度，会产生盐析现象，蛋白质溶解度降低，导致蛋白质提取率下降。并且过高的盐浓度会破坏蛋白质的结构。 3.碱法提蛋白优缺点：提取率高，生产工艺简单，成本始终。但提取蛋白的色泽较差，过强的碱提取液会造成环境污染。是当前工业应用的主要方法。 盐法提蛋白优缺点：提取率较低但是提取蛋白的色泽较好，不破坏蛋白的结构，营养价值较高。 酶法提蛋白:成本较高且条件苛刻，不利用工业生产。 4.常用蛋白质的含量测定方法 考马斯亮蓝比色法，紫外分光光度法，双缩脲试剂比色法，

7、凯氏定氮法 5.其他：southerrn blot 检测dna northern blot 检测rna western blot 检测蛋白质 .实验前景及目的：荞麦中的蛋白质含量比较丰富，并且富含赖氨酸，用于食品工业，制作成富含氨基酸的食品或者蛋白质饲料，可用于防治婴幼儿的“赖氨酸缺乏症”。并且荞麦中的蛋白质含有人体中必需的八种必需氨基酸，与鸡蛋的蛋白质含量相似。荞麦蛋白具有抗衰老，抗癌；防治高血压，冠心病；促进排泄，缓解便秘等重要的作用。以往荞麦蛋白多直接食用，或者制作成荞麦发酵产品，如：荞麦发酵酸奶，荞麦啤酒，酱油等。深加工利用较少，通过此实验，找到荞麦蛋白的最佳工艺参数，提升荞麦蛋白的提

8、取率，提高荞麦的综合利用。为荞麦蛋白的深加工，综合利用和工业化生产提供参考和实验依据。 摘要：通过碱法和盐法提取荞麦蛋白质，对荞麦蛋白的提取方法进行优选。以荞麦蛋白的提取率为标准，碱法以提取液的ph，料液比，温度、时间为单因素进行实验；盐法以盐质量分数、料液比，温度，时间为单因素进行实验。通关单因素摸索性实验的基础上，进行四因素三水平正交实验，优化提取工艺，并对提取方法进行比较，找到最佳的工艺参数。 实验是导师给出课题，自己通过查阅相关文献，设计实验，对以往的实验方法进行优化。在老师的指导下单独完成。 荞麦蛋白质含量较高，高于大米，小麦，玉米和高粱，主要成分为水溶性清蛋白，谷蛋白次之，醇溶蛋白

9、含量最低。 荞麦所含蛋白质品质较好，组成蛋白质的氨基酸种类齐全，尤其是人体必需的八种必须氨基酸接近鸡蛋蛋白的组成比例。所含赖氨酸含量高达0.69%，是大米的2.7倍。因此荞麦食品可以改善我国膳食结构导致的“赖氨酸缺乏症”对幼儿和儿童的生长比例有力。同时与其他谷物混合，能够充分发挥食物的互补作用，弥补营养的不足，提高食物的营养价值。另外荞麦粉蛋白质具有良好的消化性。 实验创新点：（1）用考马斯亮蓝法代替之前所用的凯氏定氮法，紫外分光光度法，考马斯亮 蓝法相对于凯氏定氮法和菲林酚试剂法具有灵敏度高；测定快速，方便；干扰物质少等特点。 （2）之前提取荞麦蛋白多用酶法和碱法，而酶法所用的条件要求较高，

10、并且酶制剂保存困难，制备较难，这次所用的盐法提取的荞麦蛋白色泽好，对荞麦的破坏少，很好的保存了荞麦的营养价值） （3）之前对于苦荞麦的研究较多，而对于甜荞麦的研究较少。甜荞麦相对于苦荞麦蛋白质含量较高，且分布更广。东北地区种植以甜荞麦为主，上更容易获得。 荞麦良好的保健和药用价值 1. 防治高血压，冠心病。（丰富的矿物质元素，如：镁，钙，硒，锌 2. 防治糖尿病和便秘（抗性淀粉，对降低饭后血糖的升高具有明显作用；大量的膳食 纤维可刺激肠胃蠕动，加速粪便排除，降低肠道内致癌物质的浓度） 3. 可抗癌，防衰老（荞麦蛋白复合物能提高体内抗氧化酶的活性，对脂质过氧化物有 一定的清除作用。提高机体抗自由

11、基能力，具有延缓衰老作用） 微生物学主要内容：1.微生物的分类 2.微生物的形态，结构（原核，真核，病毒） 3.微生物的营养及培养基（碳源，氮源，无机盐，水，生长因子，能源） 4.微生物的遗传，变异，育种 5微生物的生态 6. 微生物的分类，鉴定 生物化学主要内容：生物化学是关于生命的科学，运用化学的原理和方法来研究生命现象。可分为静态生物化学（如糖类，脂质，蛋白质，核酸的组成，结构，功能）；动态生物化学（他们之间的能量代谢，信息传递，物质代谢，分子基础）；功能生物化学（蛋白质、酶和核酸等生物大分子研究上）。 植物组织培养主要内容：一种将植物体的部分细胞或组织与母体分离，在适当的条件下加以培养

12、，使它们能够生长，发育，分化与增值的技术。原理：植物组织的全能性。 分子生物学主要内容：在分子水平上研究生命现象的科学。（通过研究生物大分子（核酸、蛋白质）的结构，功能，和生物合成等方面来阐述各种生命现象的本质。如：光合作用，发育的分子机制，神经活性机理，癌症的发生等）。相关的分子生物学实验：技术核酸的快速克隆、琼脂糖凝胶电泳、蛋白质的分离纯化。质粒的提取及鉴定等。 生物科学：研究生物的结构，功能，发生，发展规律。解决一些疾病、粮食、环境、生态、等方面的问题。譬如当下的禽流感病毒的研究，杂交水稻，基因突变食品等。研究领域包括动植物等宏观的，微生物微观的及生态环境等方面 相关的问题： 1.毕业设计的内容 2.本科做过的主要实验,做这些实验的主要目的。上过什么课程 3.专业方面的著名杂志（如science、nature、微生物学通报） 4.蛋白质分离提取的具体步骤 （一） 蛋白质的提取：盐析法或等电点法。 （二） 蛋白质的分离纯化 蛋白质溶液中如含有无机盐离子，用葡聚糖凝胶过滤法可使蛋白质与无机盐分离，效果理想。 （三）蛋白质的定量-考马斯亮蓝法（bradford法）测