医院感染监测微生物实验室基本技能

1、整理课件 医院感染监测医院感染监测 微生物实验室基本技能微生物实验室基本技能 黑龙江省疾病控制中心消毒所黑龙江省疾病控制中心消毒所 黑龙江省医院感染预防与控制中心黑龙江省医院感染预防与控制中心 曹原曹原 整理课件 报告提纲报告提纲 F 微生物实验室无菌操作要求微生物实验室无菌操作要求 F 中和剂、培养基的配制中和剂、培养基的配制 F 物体表面、手和空气消毒效果监测物体表面、手和空气消毒效果监测 F 医院洁净手术部建筑技术规范医院洁净手术部建筑技术规范 整理课件 医院感染：指住院病人在医院内获得医院感染：指住院病人在医院内获得 的感染的感染, ,包括在住院期间发生的感染和在医包括在住院期间发生的

2、感染和在医 院内获得出院后发生的感染院内获得出院后发生的感染, ,但不包括入院但不包括入院 前已开始或者入院时已处于潜伏期的感染。前已开始或者入院时已处于潜伏期的感染。 医院工作人员在医院内获得的感染也属医医院工作人员在医院内获得的感染也属医 院感染。院感染。 整理课件 医院感染严重影响住院患者的康复，增加患医院感染严重影响住院患者的康复，增加患 者的痛苦，使死亡率上升，住院时间延长，加重者的痛苦，使死亡率上升，住院时间延长，加重 了社会和个人的医疗费用负担，给卫生资源带来了社会和个人的医疗费用负担，给卫生资源带来 巨大的损失。目前，感染性疾病是全球死亡的第巨大的损失。目前，感染性疾病是全球死

3、亡的第 二大原因，如果将医院感染考虑在内，全球范围二大原因，如果将医院感染考虑在内，全球范围 的感染性疾病就会成为死亡的第一位原因。的感染性疾病就会成为死亡的第一位原因。 整理课件 医院消毒工作是预防和控制医院感染，防止医院消毒工作是预防和控制医院感染，防止 各类传染性疾病传播、维护医疗质量和患者身心各类传染性疾病传播、维护医疗质量和患者身心 健康的重要手段。健康的重要手段。 医院感染监测的目的是减少医院感染和由此医院感染监测的目的是减少医院感染和由此 所造成的损失，提高医护质量。所造成的损失，提高医护质量。 整理课件 中华人民共和国传染病防治法中华人民共和国传染病防治法 （20042004年

4、年1212月月1 1日起施行日起施行 ） 第二十一条第二十一条 医疗机构必须严格执行国务院卫生行医疗机构必须严格执行国务院卫生行 政部门规定的管理制度、操作规范，防止传染病政部门规定的管理制度、操作规范，防止传染病 的医源性感染和医院感染。的医源性感染和医院感染。 医疗机构应当确定专门的部门或者人员，承医疗机构应当确定专门的部门或者人员，承 担传染病疫情报告、本单位的传染病预防、控制担传染病疫情报告、本单位的传染病预防、控制 以及责任区域内的传染病预防工作；以及责任区域内的传染病预防工作；承担医疗活承担医疗活 动中与医院感染有关的危险因素监测、安全防护、动中与医院感染有关的危险因素监测、安全防

5、护、 消毒、隔离和医疗废物处置工作。消毒、隔离和医疗废物处置工作。 整理课件 医院感染管理办法医院感染管理办法 （20062006年年9 9月月1 1日起施行日起施行） 第八条第八条 医院感染管理部门、分管部门及医院感染管理专医院感染管理部门、分管部门及医院感染管理专 （兼）职人员具体负责医院感染预防与控制方面的管理和（兼）职人员具体负责医院感染预防与控制方面的管理和 业务工作。主要职责是：业务工作。主要职责是： （二）（二）对医院感染及其相关危险因素进行监测对医院感染及其相关危险因素进行监测、分析和反、分析和反 馈，针对问题提出控制措施并指导实施；馈，针对问题提出控制措施并指导实施； （四）

6、（四）对医院的清洁、消毒灭菌与隔离、无菌操作技术、对医院的清洁、消毒灭菌与隔离、无菌操作技术、 医疗废物管理等工作提供指导；医疗废物管理等工作提供指导； 整理课件 医院感染管理办法医院感染管理办法 （20062006年年9 9月月1 1日起施行日起施行） 第十三条第十三条 医疗机构应当制定具体措施，医疗机构应当制定具体措施，保证医务人员的手保证医务人员的手 卫生、诊疗环境条件、无菌操作技术卫生、诊疗环境条件、无菌操作技术和职业卫生防护工作和职业卫生防护工作 符合规定要求，对医院感染的危险因素进行控制。符合规定要求，对医院感染的危险因素进行控制。 第十七条第十七条 医疗机构应当按照医院感染诊断标

7、准及时诊断医医疗机构应当按照医院感染诊断标准及时诊断医 院感染病例，院感染病例，建立有效的医院感染监测制度建立有效的医院感染监测制度，分析医院感，分析医院感 染的危险因素，并针对导致医院感染的危险因素，实施预染的危险因素，并针对导致医院感染的危险因素，实施预 防与控制措施。防与控制措施。 整理课件 消毒管理办法消毒管理办法 第二章消毒的卫生要求第二章消毒的卫生要求 第四条医疗卫生机构应当建立消毒管理组织，制定消毒管第四条医疗卫生机构应当建立消毒管理组织，制定消毒管 理制度，执行国家有关规范、标准和规定，理制度，执行国家有关规范、标准和规定，定期开展消毒定期开展消毒 与灭菌效果检测工作与灭菌效果

8、检测工作。 第八条第八条医疗卫生机构的环境、物品应当符合国家有关规范、医疗卫生机构的环境、物品应当符合国家有关规范、 标准和规定标准和规定。排放废弃的污水、污物应当按照国家有关规。排放废弃的污水、污物应当按照国家有关规 定进行无害化处理。运送传染病病人及其污染物品的车辆、定进行无害化处理。运送传染病病人及其污染物品的车辆、 工具必须随时进行消毒处理。工具必须随时进行消毒处理。 整理课件 消毒技术规范消毒技术规范（20022002年版）年版） 医院消毒是预防医院内感染的重要措施之一，消毒效医院消毒是预防医院内感染的重要措施之一，消毒效 果的监测是评价其消毒设备运转是否正常、消毒药剂是否果的监测是

9、评价其消毒设备运转是否正常、消毒药剂是否 有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否达标的唯一手段，有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否达标的唯一手段， 因而在医院消毒、灭菌工作中必不可少。因而在医院消毒、灭菌工作中必不可少。医院消毒效果监医院消毒效果监 测时需遵循以下原则：监测人员需经过专业培训，掌握一测时需遵循以下原则：监测人员需经过专业培训，掌握一 定的消毒知识，熟悉消毒设备和药剂性能，具备熟练的检定的消毒知识，熟悉消毒设备和药剂性能，具备熟练的检 验技能；选择合理的采样时间（消毒后、使用前）；遵循验技能；选择合理的采样时间（消毒后、使用前）；遵循 严格的无菌操作。严格的无菌操作。 整理课件

10、医院消毒灭菌效果监测医院消毒灭菌效果监测 l压力蒸汽灭菌效果监测压力蒸汽灭菌效果监测 l紫外线消毒效果监测紫外线消毒效果监测 l医疗器械灭菌效果监测医疗器械灭菌效果监测 l手消毒效果监测手消毒效果监测 l物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测 l空气消毒效果监测空气消毒效果监测 l常用消毒剂有效成分测定常用消毒剂有效成分测定 l使用中消毒剂的监测使用中消毒剂的监测 l内镜消毒灭菌效果的监测内镜消毒灭菌效果的监测 l透析水的监测透析水的监测 l污水的监测污水的监测 整理课件 医院消毒的质量管理（医院消毒的质量管理（PDCAPDCA） v制定有一个好的消毒灭菌程序或方案（制定有一个好的消毒灭菌程

11、序或方案（planplan，计划），计划） v按制定的消毒灭菌程序或方案进行操作（按制定的消毒灭菌程序或方案进行操作（dodo，执行），执行） v采取正确的方法进行消毒效果评价、监测（采取正确的方法进行消毒效果评价、监测（checkcheck，检查），检查） v根据评价结果改进工作（根据评价结果改进工作（advanceadvance，改进），改进） 整理课件 微生物实验室的作用微生物实验室的作用 微生物实验室在医院感染控制中的每个环节微生物实验室在医院感染控制中的每个环节 都起着不可忽视的重要作用，包括病原菌的鉴定都起着不可忽视的重要作用，包括病原菌的鉴定 及耐药谱分析、及耐药谱分析、医院感染

12、危险因素的监测医院感染危险因素的监测、易感、易感 人群与正常菌群监测等。人群与正常菌群监测等。 在某种意义来说，微生物实验室技术水平的在某种意义来说，微生物实验室技术水平的 高低，直接关系着医院感染控制的整体水平。高低，直接关系着医院感染控制的整体水平。 整理课件 20032003年以来国内外相继发生年以来国内外相继发生“非典非典” 病毒实验室泄露事件，表明实验室生物安病毒实验室泄露事件，表明实验室生物安 全管理不仅关系到实验室工作人员的健康，全管理不仅关系到实验室工作人员的健康， 更是关系经济发展、社会稳定、人民群众更是关系经济发展、社会稳定、人民群众 生命安全的大事。生命安全的大事。 整理

13、课件 医院感染监测的标本，有些可能具有医院感染监测的标本，有些可能具有 传染性。因此，在进行微生物学检验工作传染性。因此，在进行微生物学检验工作 的过程中，无论标本的采集或细菌培养等，的过程中，无论标本的采集或细菌培养等， 微生物学工作者均须严格执行无菌操作技微生物学工作者均须严格执行无菌操作技 术及个人防护，防止杂菌污染和病原菌的术及个人防护，防止杂菌污染和病原菌的 扩散，以保证医院感染监测的质量。扩散，以保证医院感染监测的质量。 整理课件 实验室无菌操作要求实验室无菌操作要求 （1 1）试验开始前，应以湿式方法清洁台面和打扫室内地面；）试验开始前，应以湿式方法清洁台面和打扫室内地面； （2

14、 2）实验人员应穿戴工作服、工作鞋、口罩、帽子，进行无）实验人员应穿戴工作服、工作鞋、口罩、帽子，进行无 菌检验时，需正确穿戴好无菌隔离衣。根据需要戴防护镜菌检验时，需正确穿戴好无菌隔离衣。根据需要戴防护镜 和橡胶手套；和橡胶手套； （3 3）每吸取一次不同样液应更换无菌吸管每吸取一次不同样液应更换无菌吸管，接种环（针）需，接种环（针）需 在火焰上烧灼灭菌后，才可再次使用，也可用一次性使用在火焰上烧灼灭菌后，才可再次使用，也可用一次性使用 的无菌吸管和接种环（针）；的无菌吸管和接种环（针）； （4 4）要求无菌的试剂，如蒸馏水、生理盐水、磷酸盐缓冲液、）要求无菌的试剂，如蒸馏水、生理盐水、磷酸

15、盐缓冲液、 培养基、中和剂等，均需灭菌后使用；培养基、中和剂等，均需灭菌后使用； （5 5）无菌器材和试剂，使用前须检查容器或包装是否完整，）无菌器材和试剂，使用前须检查容器或包装是否完整， 有破损者不得使用。有破损者不得使用。 整理课件 实验室无菌操作要求实验室无菌操作要求 （6 6）正在使用的无菌器材和试剂不得长时间暴露于生物安）正在使用的无菌器材和试剂不得长时间暴露于生物安 全柜或超净台中；全柜或超净台中； （7 7）移液或接种时，开塞后的试管口及瓶口应尽量靠近火）移液或接种时，开塞后的试管口及瓶口应尽量靠近火 焰，防止污染，试管及烧瓶应尽量平放，切忌口部向上或焰，防止污染，试管及烧瓶应

16、尽量平放，切忌口部向上或 长时间暴露于空气中。长时间暴露于空气中。 （8 8）重复使用的器材，使用后应立即放入盛有消毒液的容）重复使用的器材，使用后应立即放入盛有消毒液的容 器中，一次性使用的器材使用后应立即放入感染性废物收器中，一次性使用的器材使用后应立即放入感染性废物收 集袋中。集袋中。 （9 9）若不慎发生微生物培养物打碎或试验微生物其他泄漏）若不慎发生微生物培养物打碎或试验微生物其他泄漏 事故时，不论是否具有致病性，均应立即停止手中工作，事故时，不论是否具有致病性，均应立即停止手中工作， 对污染及可能波及的区域进行消毒处理。对污染及可能波及的区域进行消毒处理。 （1010）全部试验结束

17、后，应对室内环境进行消毒处理。）全部试验结束后，应对室内环境进行消毒处理。 整理课件 加强生物安全管理加强生物安全管理 国内实验室感染国内实验室感染SARSSARS案例的主要原因包括：案例的主要原因包括： （1 1）实验人员违规操作；）实验人员违规操作； （2 2）管理制度内容不全面，执行力度不够，监督检）管理制度内容不全面，执行力度不够，监督检 查不够及时；查不够及时； （3 3）缺少严格、系统的生物安全培训制度，安全防）缺少严格、系统的生物安全培训制度，安全防 范意识普遍不强；范意识普遍不强； （4 4）生物安全柜未定期进行检修和评价；）生物安全柜未定期进行检修和评价； （5 5）实验室硬

18、件环境条件长期未得到明显的改善）实验室硬件环境条件长期未得到明显的改善。 整理课件 加强生物安全管理加强生物安全管理 （1 1）建立完备而又详尽的致病微生物危害文件，并组织实）建立完备而又详尽的致病微生物危害文件，并组织实 验人员认真学习；验人员认真学习； （2 2）建立具体可行的实验室活动操作规范，并要求实验人）建立具体可行的实验室活动操作规范，并要求实验人 员严格执行，最大程度的减少意外发生；员严格执行，最大程度的减少意外发生； （3 3）提供相应的生物安全防护。在没有符合要求的硬件设）提供相应的生物安全防护。在没有符合要求的硬件设 施和设备的情况下，决不允许开展相关的实验活动；施和设备的

19、情况下，决不允许开展相关的实验活动； （4 4）建立和健全事故报告制度。要求实验人员一旦发生病）建立和健全事故报告制度。要求实验人员一旦发生病 毒泄露，应该立即报告负责人，及早采取措施，防止致病毒泄露，应该立即报告负责人，及早采取措施，防止致病 微生物进一步在实验室内外扩散。微生物进一步在实验室内外扩散。 整理课件 中和剂、培养基的配制中和剂、培养基的配制 整理课件 为什么使用中和剂？为什么使用中和剂？ 中和剂：中和剂：在微生物杀灭试验中，用以消除试验微生物在微生物杀灭试验中，用以消除试验微生物 与消毒剂的混悬液中和微生物表面上残留的消毒剂，使其与消毒剂的混悬液中和微生物表面上残留的消毒剂，使

20、其 失去对微生物抑制和杀灭作用的试剂。失去对微生物抑制和杀灭作用的试剂。 对消毒效果进行监测时，在抽样的同时会将连同残余对消毒效果进行监测时，在抽样的同时会将连同残余 消毒剂一起被采集到样品中并可能被携带到培养基或检验消毒剂一起被采集到样品中并可能被携带到培养基或检验 体系内，会对未被杀死的残存细菌生长产生影响，使得存体系内，会对未被杀死的残存细菌生长产生影响，使得存 活细菌检不出，导致消毒效果高于实际效果或灭菌效果出活细菌检不出，导致消毒效果高于实际效果或灭菌效果出 现假阴性。所以，在对消毒剂杀菌效果进行监测时，必须现假阴性。所以，在对消毒剂杀菌效果进行监测时，必须 首先设法去除残余消毒剂，

21、使残存细菌脱离其影响，获得首先设法去除残余消毒剂，使残存细菌脱离其影响，获得 正常的复苏生长条件，以便有效的检验。正常的复苏生长条件，以便有效的检验。 整理课件 常用去除残余消毒剂的方法常用去除残余消毒剂的方法 R化学中和法：最常用的方法化学中和法：最常用的方法 R稀释法：适合于浓度系数高的消毒剂稀释法：适合于浓度系数高的消毒剂 R过滤清洗法：适合于选不出有效的中和剂或一些中过滤清洗法：适合于选不出有效的中和剂或一些中 草药消毒剂消毒效果的检测草药消毒剂消毒效果的检测 R离心清洗法：反复多次离心，逐渐去除残余消毒剂离心清洗法：反复多次离心，逐渐去除残余消毒剂 整理课件 去除残余消毒剂方法的有效

22、标准去除残余消毒剂方法的有效标准 n可有效去除残余消毒剂；可有效去除残余消毒剂； n对微生物无害，不影响损伤微生物的复苏；对微生物无害，不影响损伤微生物的复苏； n不影响载体上微生物洗脱，不减少细菌回收量；不影响载体上微生物洗脱，不减少细菌回收量； n对培养基营养成分不产生拮抗作用，不影响液体培对培养基营养成分不产生拮抗作用，不影响液体培 养基的透明度；养基的透明度； n对培养病毒的细胞无害，不破坏细胞营养液的成分；对培养病毒的细胞无害，不破坏细胞营养液的成分； n不干扰细菌和病毒检测方法的灵敏度。不干扰细菌和病毒检测方法的灵敏度。 整理课件 注：所有中和剂均须在注：所有中和剂均须在0.03m

23、ol/L0.03mol/L磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBSPBS）基础上配制。）基础上配制。 整理课件 中和剂的配制原则及注意事项中和剂的配制原则及注意事项 F先配制磷酸盐缓冲液先配制磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L， pH7.2） 无水磷酸氢二钠无水磷酸氢二钠 2.83g 磷酸二氢钾磷酸二氢钾 1.36g 蒸馏水加至蒸馏水加至 1000ml 将各成分加入到将各成分加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调蒸馏水中，待完全溶解后，调 pH至至7.27.4； 注意：去结晶水注意：去结晶水 整理课件 去结晶水问题去结晶水问题 磷酸二氢钠（磷酸二氢钠（Na2HPO412H2O） X=7.

24、13g（每（每1000mL） 142 142+1218 = 2.83 X 整理课件 去结晶水问题去结晶水问题 硫代硫酸钠（硫代硫酸钠（Na2S2O35H2O） X=7.85g（每（每1000mL） 158 158+518 = 5 X 整理课件 中和剂的配制原则及注意事项中和剂的配制原则及注意事项 F硫代硫酸钠需去结晶水；硫代硫酸钠需去结晶水； F吐温吐温-80-80易挂壁，反复冲洗干净；易挂壁，反复冲洗干净； F灭菌温度和时间：灭菌温度和时间：一般一般121、20min；不不 耐高温耐高温115115、30min； F保存条件和时间：保存条件和时间：44冰箱半年，常温一个冰箱半年，常温一个 月

25、（出现混浊、结晶、长菌等应放弃）。月（出现混浊、结晶、长菌等应放弃）。 整理课件 微生物培养基的配制微生物培养基的配制 n培养基的分类培养基的分类 n配制培养基的一般程序配制培养基的一般程序 n配制培养基的注意事项配制培养基的注意事项 整理课件 微生物培养基的配制微生物培养基的配制 培养基：培养基：是指用人工方法，将细菌等微是指用人工方法，将细菌等微 生物生长繁殖所需要的营养物质按比例混合，生物生长繁殖所需要的营养物质按比例混合， 调节调节PH，高压灭菌而成的营养混合物。，高压灭菌而成的营养混合物。 整理课件 培养基的分类培养基的分类 1.1.按照营养组成和用途分类按照营养组成和用途分类 l基

26、础培养基基础培养基 l营养培养基营养培养基 l选择培养基选择培养基 l鉴别培养基鉴别培养基 l增菌培养基增菌培养基 l厌氧培养基厌氧培养基 2 .2 .按照培养基的物理状态分：液体、固体和半固体按照培养基的物理状态分：液体、固体和半固体 整理课件 1.1.按照营养组成和用途分类按照营养组成和用途分类 1 1）基础培养基：）基础培养基：含有一般细菌生长繁殖所需要的基含有一般细菌生长繁殖所需要的基 本营养成分，营养肉汤、营养琼脂等；本营养成分，营养肉汤、营养琼脂等； 2 2）营养培养基：）营养培养基：在基础培养基中加入血液、血清、在基础培养基中加入血液、血清、 生长因子等特殊成分，供营养要求较高和

27、需要特生长因子等特殊成分，供营养要求较高和需要特 殊生长因子的细菌生长繁殖的培养基，如血液琼殊生长因子的细菌生长繁殖的培养基，如血液琼 脂培养基；脂培养基； 整理课件 1.1.按照营养组成和用途分类按照营养组成和用途分类 3)3)选择性培养基：选择性培养基：在基础培养基中加入抑菌在基础培养基中加入抑菌 剂，抑制非目的菌生长，选择性的促进目剂，抑制非目的菌生长，选择性的促进目 的菌生长，从而将其从混杂的标本中分离的菌生长，从而将其从混杂的标本中分离 出来。如：出来。如：SS SS 琼脂培养基；琼脂培养基； 整理课件 1.1.按照营养组成和用途分类按照营养组成和用途分类 4)4)鉴别培养基：鉴别培

28、养基：在基础培养基中加入某些特定底物在基础培养基中加入某些特定底物, , 如糖、苷、醇类、氨基酸、蛋白质等和指示剂，如糖、苷、醇类、氨基酸、蛋白质等和指示剂， 用以测定细菌的生化反应，区分不同细菌种类的用以测定细菌的生化反应，区分不同细菌种类的 培养基；培养基； 5)5)增菌培养基：增菌培养基：多为液体培养基，如葡萄糖肉汤、多为液体培养基，如葡萄糖肉汤、 GN肉汤等肉汤等，特别适用于病原菌含量少的标本，因，特别适用于病原菌含量少的标本，因 增菌培养基一般含有抑菌剂，具有选择抑制作用，增菌培养基一般含有抑菌剂，具有选择抑制作用， 提高标本中含量较少的目的菌的检出率；提高标本中含量较少的目的菌的检

29、出率； 6)6)厌氧培养基：厌氧培养基：专供厌氧菌的分离、培养和鉴别用专供厌氧菌的分离、培养和鉴别用 的培养基。的培养基。 整理课件 2 2、按照物理状态分类、按照物理状态分类 1 1）液体培养基：可用于大量细菌的生长繁殖，但必）液体培养基：可用于大量细菌的生长繁殖，但必 须种入纯种细菌，如肉汤培养基；须种入纯种细菌，如肉汤培养基； 2 2）固体培养基：加入）固体培养基：加入1.52.0%琼脂，用于细菌的琼脂，用于细菌的 分离和纯化、鉴定及药敏试验等，在试管中可制分离和纯化、鉴定及药敏试验等，在试管中可制 成斜面用于菌种的短期保存；成斜面用于菌种的短期保存； 3 3）半固体培养基：加入）半固体

30、培养基：加入0.30.5%琼脂，用于观察琼脂，用于观察 细菌的动力，保存菌种等。细菌的动力，保存菌种等。 整理课件 配制培养基的一般程序配制培养基的一般程序 u 调配调配 u 熔化熔化 u 矫正矫正pH u 过滤过滤 u 分装分装 u 灭菌灭菌 u 保存保存 整理课件 配制培养基的一般程序配制培养基的一般程序 1. 1. 调配：在三角烧瓶中加入少量的蒸馏水，准确称取培养调配：在三角烧瓶中加入少量的蒸馏水，准确称取培养 基，混悬于其中，再以剩余的水冲洗瓶壁；基，混悬于其中，再以剩余的水冲洗瓶壁； 2. 2. 溶化：在电炉上溶解，应随时搅拌，注意防止外溢；溶化：在电炉上溶解，应随时搅拌，注意防止外

31、溢； 3. 3. 矫正矫正pHpH值：一般培养基矫正值：一般培养基矫正pHpH至至7.27.6，亦有需酸性或，亦有需酸性或 碱性的培养基，碱性的培养基，矫正时应比实际需要的矫正时应比实际需要的pHpH高高0.10.2； 4. 4. 过滤澄清：液体培养基，常用滤纸过滤；固体培养基，过滤澄清：液体培养基，常用滤纸过滤；固体培养基， 加热溶化后趁热以两层纱布中间夹脱脂棉过滤；加热溶化后趁热以两层纱布中间夹脱脂棉过滤； 整理课件 配制培养基的一般程序配制培养基的一般程序 5. 5. 分装：分装： t基础培养基：一般常分装于三角烧瓶内，灭菌后待用；基础培养基：一般常分装于三角烧瓶内，灭菌后待用； t琼脂

32、斜面：分装量约为试管的琼脂斜面：分装量约为试管的1/41/4，灭菌后趁热放置斜面，长度，灭菌后趁热放置斜面，长度2/32/3； t半固体培养基、液体培养基：分装量约为试管长度的半固体培养基、液体培养基：分装量约为试管长度的1/31/3； t琼脂平板：将灭菌或加热融化琼脂平板：将灭菌或加热融化后的固体培养基，冷至后的固体培养基，冷至50左右，以无左右，以无 菌操作倾注无菌平皿内，平皿内径为菌操作倾注无菌平皿内，平皿内径为9cm，倾注培养基，倾注培养基1315mL， 轻摇平皿，使培养基平铺于平皿底部，凝固后备用。轻摇平皿，使培养基平铺于平皿底部，凝固后备用。 注意：倾注培养基时，切勿将平皿盖全部打

33、开，以免空气中的尘埃及注意：倾注培养基时，切勿将平皿盖全部打开，以免空气中的尘埃及 细菌落入。细菌落入。 6. 6. 灭菌：压力蒸汽灭菌法和过滤除菌法（含因加热易破坏的物质）；灭菌：压力蒸汽灭菌法和过滤除菌法（含因加热易破坏的物质）； 7. 7. 保存：保存：44冰箱或冷暗处。冰箱或冷暗处。 整理课件 配制培养基的注意事项配制培养基的注意事项 J最好用中性硬质玻璃器皿；最好用中性硬质玻璃器皿； J加热时间不宜过长，温度不宜过高，培养基加热加热时间不宜过长，温度不宜过高，培养基加热 煮沸后，应补足失水；煮沸后，应补足失水； J保持澄清，分装不宜超过容器的保持澄清，分装不宜超过容器的2/32/3；

34、 J试管口和三角烧瓶口应用普通棉花制成的棉塞，试管口和三角烧瓶口应用普通棉花制成的棉塞， 再用牛皮纸包好；再用牛皮纸包好； JSSSS、SFSF、BSBS等不需高压。等不需高压。 整理课件 整理课件 中和剂、培养基的配制注意事项中和剂、培养基的配制注意事项 n配制记录：配制编号、浓度、名称、配制时间、配制记录：配制编号、浓度、名称、配制时间、 有效期、保存条件、配制者；有效期、保存条件、配制者； n质量控制：每瓶（包装）粘贴化学指示胶带，灭质量控制：每瓶（包装）粘贴化学指示胶带，灭 菌器内放置化学指示卡，并记录；菌器内放置化学指示卡，并记录； n压力蒸汽灭菌时间压力蒸汽灭菌时间: :指的是灭菌

35、平台时间，不包括指的是灭菌平台时间，不包括 升温和降温时间。升温和降温时间。 整理课件 物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测 医院内物体表面包括病房和医护办公室内的桌、椅、凳、医院内物体表面包括病房和医护办公室内的桌、椅、凳、 床具、橱柜、门及门把手、窗户及窗台、水池和厕具等，同床具、橱柜、门及门把手、窗户及窗台、水池和厕具等，同 时也包括辅助科室的工作台面、仪器表面等物体表面。时也包括辅助科室的工作台面、仪器表面等物体表面。 1. 1. 采样时间：采样时间：在消毒处理后进行采样。在消毒处理后进行采样。 2. 2. 采样方法：用采样方法：用 5cm5cm的标准灭菌规格板，放在被检的标准灭菌

36、规格板，放在被检 物体表面，采样面积物体表面，采样面积100cm2，连续采样，连续采样4个，个，用浸有用浸有含相含相 应中和剂的无菌洗脱液应中和剂的无菌洗脱液( (常用含常用含0.5%硫代硫酸钠硫代硫酸钠+0.1%吐温吐温 80的的PBS）的棉拭子的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦支，在规格板内横竖往返均匀涂擦 各各5次，并随之转棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投次，并随之转棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投 入入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。，立即送检。 门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。门把手等不规则物体表面用棉拭子直接

37、涂擦采样。 整理课件 物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测 3. 3. 检测方法：检测方法： (1) (1) 细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振或用力振 打打80次，用无菌吸管吸取次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平待检样品接种于灭菌平 皿，每一样本接种皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的个平皿，内加入已溶化的4548 的营养琼脂的营养琼脂15ml18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，边倾注边摇匀，待琼脂凝固， 置置361温箱培养温箱培养48h，计数菌落数。，计数菌落数。 整理课件 物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测

38、采样结果计算方法：采样结果计算方法： 平皿上菌落的平均数平皿上菌落的平均数 稀释倍数稀释倍数 物体表面细菌菌落总数物体表面细菌菌落总数(cfu/cm2) 采样面积采样面积（cm2） 小型物体表面的结果计算，用小型物体表面的结果计算，用 cfu/件表件表示。示。 举例：举例：平皿上菌落数（平皿上菌落数（10，8），结果为：），结果为：9.010/100=0.9(cfu/cm2) (2) (2) 致病菌检测：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢致病菌检测：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢 菌、沙门氏菌检测。菌、沙门氏菌检测。 整理课件 物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测 4. 4. 结果

39、判定：结果判定： S、类区域：细菌总数类区域：细菌总数5cfu/cm2，并未检出致病菌，并未检出致病菌（金（金 黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌）黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌） 为消毒合格；为消毒合格； S类区域细菌：总数类区域细菌：总数10cfu/cm2，并未检出致病菌，并未检出致病菌（金黄（金黄 色葡萄球菌、大肠杆菌、溶血性链球菌）色葡萄球菌、大肠杆菌、溶血性链球菌）为消毒合格；为消毒合格； S类区域细菌：总数类区域细菌：总数15cfu/cm2，并未检出致病菌，并未检出致病菌（金黄（金黄 色葡萄球菌、大肠杆菌）色葡萄球菌、大肠杆菌）为消毒合格；为消毒

40、合格； S母婴同室、早产儿室、婴儿室、母婴同室、早产儿室、婴儿室、 新生儿室及儿科病房的物新生儿室及儿科病房的物 体表面不得检出沙门氏菌。体表面不得检出沙门氏菌。 整理课件 物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测 5. 5. 注意事项：注意事项： 采集样本要有足够的数量且具有代表性，如层流采集样本要有足够的数量且具有代表性，如层流 洁净手术室，选择具有代表性采样地点（如手术洁净手术室，选择具有代表性采样地点（如手术 台、治疗车、无影灯把手等）；台、治疗车、无影灯把手等）； 采样时，棉拭子处于湿润状态，如处于饱和状态采样时，棉拭子处于湿润状态，如处于饱和状态 可将多余的采样液在采样管壁上挤压去

41、除。禁止可将多余的采样液在采样管壁上挤压去除。禁止 使用干棉拭子采样。使用干棉拭子采样。 整理课件 手消毒效果监测手消毒效果监测 医务人员手的消毒是预防和控制医院医务人员手的消毒是预防和控制医院 感染的重要环节，医务人员的手在传染病感染的重要环节，医务人员的手在传染病 的传播和医院内感染的传播和流行过程中的传播和医院内感染的传播和流行过程中 起着重要的传播媒介作用，所以手的科学起着重要的传播媒介作用，所以手的科学 合理消毒不仅是医院管理的重要环节，也合理消毒不仅是医院管理的重要环节，也 是医务人员的必修课。手的消毒有其特殊是医务人员的必修课。手的消毒有其特殊 性，因为手的皮肤污染更为严重，传播

42、的性，因为手的皮肤污染更为严重，传播的 机会更多，消毒更加困难。机会更多，消毒更加困难。 整理课件 手消毒效果监测手消毒效果监测 n手的污染特点：受工作性质影响，首先是工作环手的污染特点：受工作性质影响，首先是工作环 境污染物越多，手污染越严重；手上携带细菌种境污染物越多，手污染越严重；手上携带细菌种 类与其工作环境有关；手上携带致病菌群与医院类与其工作环境有关；手上携带致病菌群与医院 感染的发生有密切关系。感染的发生有密切关系。 n经调查发现，国内一个在临床一线工作的医生或经调查发现，国内一个在临床一线工作的医生或 护士，每天接触不同病人和不同带菌物品均在护士，每天接触不同病人和不同带菌物品

43、均在5050 次以上，如果能按规定洗手，将大大减少交叉污次以上，如果能按规定洗手，将大大减少交叉污 染和交叉感染。染和交叉感染。 整理课件 手消毒效果监测手消毒效果监测 1. 1. 采样时间：接触病人、从事医疗活动前进行采样采样时间：接触病人、从事医疗活动前进行采样 2. 2. 采样方法：采样方法： 被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗 脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂 擦擦 2次次(一只手涂擦面积约一只手涂擦面积约30cm2)，并随之转动，并随之转动 采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子

44、采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子 投入投入10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，试管内， 立即送检。立即送检。 整理课件 手消毒效果监测手消毒效果监测 3. 3. 检测方法：检测方法： (1) (1) 细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打或用力振打80次，用次，用 无菌吸管吸取无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平个平 皿，内加入已溶化的皿，内加入已溶化的4548的营养琼脂的营养琼脂15ml18ml，边倾注，边倾注 边摇匀，待琼脂凝固，置边摇匀

45、，待琼脂凝固，置361温箱培养温箱培养48h，计数菌落数。计数菌落数。 采样结果计算方法：采样结果计算方法： 平皿上菌落的平均数平皿上菌落的平均数 稀释倍数稀释倍数 细菌总数细菌总数(cfu/cm2) 302 举例：举例：平皿上菌落数（平皿上菌落数（10，8），结果为：），结果为：9.010/60=1.5(cfu/cm2) (2) (2) 致病菌检测：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、沙门氏致病菌检测：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、沙门氏 菌检测。菌检测。 整理课件 手消毒效果监测手消毒效果监测 4. 4. 结果判定：结果判定： F、类区域工作人员：细菌总数类区域工作人员：细菌

46、总数5cfu/cm2，并未检出金，并未检出金 黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、溶血性链球菌溶血性链球菌为为 消毒合格；消毒合格； F类区域工作人员：细菌总数类区域工作人员：细菌总数10cfu/cm2，并未检出金黄，并未检出金黄 色葡萄球菌、大肠杆菌、色葡萄球菌、大肠杆菌、溶血性链球菌溶血性链球菌为消毒合格；为消毒合格； F类区域工作人员：细菌总数类区域工作人员：细菌总数15cfu/cm2，并未检出金黄，并未检出金黄 色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。 F母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员手上，母婴同室、婴儿室

47、、新生儿室及儿科病房的工作人员手上， 不得检出不得检出沙门氏菌沙门氏菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄、大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄 球菌为消毒合格。球菌为消毒合格。 整理课件 手消毒效果监测手消毒效果监测 5. 5. 注意事项：注意事项： 对化学杀菌因子消毒的效果监测，采样液应为含对化学杀菌因子消毒的效果监测，采样液应为含 经鉴定合格的中和剂的洗脱液。若对非化学因子经鉴定合格的中和剂的洗脱液。若对非化学因子 消毒效果监测，则不必加中和剂。消毒效果监测，则不必加中和剂。 所采样本应及时检测，室温下存放不得超过所采样本应及时检测，室温下存放不得超过2 2小时；小时； 44冰箱存放不得超

48、过冰箱存放不得超过4 4小时。小时。 整理课件 空气消毒效果监测空气消毒效果监测 空气是许多疾病的传播媒介，由于空气空气是许多疾病的传播媒介，由于空气 中微生物是以气溶胶形式存在，颗粒小、可中微生物是以气溶胶形式存在，颗粒小、可 随气流运动，因此，空气传播疾病的特点是随气流运动，因此，空气传播疾病的特点是 传播速度快，波及面广，控制困难，后果严传播速度快，波及面广，控制困难，后果严 重。空气中的病原微生物不仅可造成医院内重。空气中的病原微生物不仅可造成医院内 感染，而且可以污染其他物品甚至诊疗器具，感染，而且可以污染其他物品甚至诊疗器具， 引起医院内感染。引起医院内感染。 整理课件 空气消毒效

49、果监测空气消毒效果监测 医院室内空气中含微生物数量过高对医院感染医院室内空气中含微生物数量过高对医院感染 的发生会产生严重影响，的发生会产生严重影响，WHO调查显示，手术室空调查显示，手术室空 气中含菌量与切口感染成正相关。当空气细菌含量气中含菌量与切口感染成正相关。当空气细菌含量 在在10001800cfu/m3时，手术后感染率明显增高；时，手术后感染率明显增高； 若降低至若降低至180cfu/m3以下时，感染的危险性明显降以下时，感染的危险性明显降 低。我国医院感染则是以呼吸道感染率最高，这可低。我国医院感染则是以呼吸道感染率最高，这可 能与我国医院内环境空气中微生物含量居高不下有能与我国

50、医院内环境空气中微生物含量居高不下有 密切关系。密切关系。 手术室、新生儿室、产房等重点科室的空气污手术室、新生儿室、产房等重点科室的空气污 染的控制应成为医院感染管理中特别关注的部门。染的控制应成为医院感染管理中特别关注的部门。 整理课件 空气消毒效果监测空气消毒效果监测 1. 1. 采样时间：采样时间：在消毒处理后与进行医疗活动之前期间进行在消毒处理后与进行医疗活动之前期间进行 采样。采样。 2. 2. 采样方法：平板暴露法采样方法：平板暴露法 布点方法：室内面积布点方法：室内面积30m2，设内、中、外对角线，设内、中、外对角线3点，点， 内、外点布点部位距墙壁内、外点布点部位距墙壁1m处

51、；室内面积处；室内面积30m2，设，设4 角及中央角及中央5点，点，4角的布点部位距墙壁角的布点部位距墙壁1m处。处。 采样方法：将普通营养琼脂平板（直径为采样方法：将普通营养琼脂平板（直径为9cm）放在）放在 室内各采样点处，采样高度为距地面室内各采样点处，采样高度为距地面0.8m1.5m，采样，采样 时将平板盖打开，时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露扣放于平板旁，暴露5min，盖，盖好立即好立即 送检。送检。 整理课件 空气消毒效果监测空气消毒效果监测 3. 3. 检测方法：检测方法： 平板暴露法结果计算公式：平板暴露法结果计算公式： 细菌总数（细菌总数（cfu/m3）=50000N/（A

52、T） 式中式中A为平板面积（为平板面积（cm2）；）；T为平板暴露时间为平板暴露时间 （min）；）；N为平均菌落数（为平均菌落数（cfu）。）。 举例：平皿上菌落数（举例：平皿上菌落数（3，2，1） 结果为：结果为：500002/（3.144.525)=314.5(cfu/m3) 平板暴露法简便经济，但只能采集到平板暴露法简便经济，但只能采集到10m10m左右的大粒子。左右的大粒子。 整理课件 空气消毒效果监测空气消毒效果监测 4. 4. 结果判定：结果判定： n类区域：细菌总数类区域：细菌总数10cfu/m10cfu/m3 3( (或或0.2cfu/0.2cfu/平板平板) )，未检出金黄

53、色葡，未检出金黄色葡 萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格；萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格； n类区域：细菌总数类区域：细菌总数200cfu/m200cfu/m3 3( (或或4cfu/4cfu/平板平板) )，未检出金黄色葡萄，未检出金黄色葡萄 球菌、溶血性链球菌为消毒合格；球菌、溶血性链球菌为消毒合格； n类区域：细菌总数类区域：细菌总数500cfu/m500cfu/m3 3( (或或10cfu/10cfu/平板平板) )，未检出金黄色葡，未检出金黄色葡 萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。 5. 5. 注意事项注意事项 采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止采

54、样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min 10min 进行采进行采样。样。 整理课件 整理课件 医院洁净手术部建筑技术规范医院洁净手术部建筑技术规范 （GB50333-2002） 1. 1. 术语：术语： (1) (1) 洁净手术部：由洁净手术室、洁净辅助用房和非洁净辅助洁净手术部：由洁净手术室、洁净辅助用房和非洁净辅助 用房组成的自成体系的功能区域；用房组成的自成体系的功能区域； (2) (2) 浮游法细菌浓度：简称浮游菌浓度。在空气中随机采样，浮游法细菌浓度：简称浮游菌浓度。在空气中随机采样， 对采样培养基经过培养得出菌落数对采样培养基经过培养得出菌落数（CFU），代表空气中的

55、），代表空气中的 浮游菌数，个浮游菌数，个/m3； (3) (3) 沉降法细菌浓度：简称沉降菌浓度。用直径沉降法细菌浓度：简称沉降菌浓度。用直径90mm培养皿培养皿 在空气中暴露在空气中暴露30min，盖好培养皿后经过培养得出的菌落数，盖好培养皿后经过培养得出的菌落数 （CFU），代表空气中可以沉降下来的细菌数，个），代表空气中可以沉降下来的细菌数，个/皿；皿； 整理课件 1. 1. 术语术语 (4) (4) 手术区：需要特别保护的手术台及周围区域。手术区：需要特别保护的手术台及周围区域。 级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推 0.9m、两端至少各外推、两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的后（包括手术台）的 区域；区域；级手术室的手术区是指手术台两侧边至少级手术室的手术区是指手术台两侧边至少 各外推各外推0.6m，两端至少各外推，两端至少各外推0.4m后（包括手术后（包括手术 台）的区域；台）的区域；级手术室的手术区是指手术台四边级手术室的手术区是指手术台四边 至少各外推至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域。后（包括手术台）的区域。级级 手术室不