刻度吸量管的使用

1、临床生物化学和生物化学检验 实验操作技能项目与考核标准 一、刻度吸量管的使用技能 1. 选择：使用前先根据需要选择适当的吸量管，刻度吸量管的总容量最好等于或稍大于最大 取液量。临用前要看清总容量和刻度。 2. 执管：用拇指和中指（辅以无名指） ，拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。 刻度数字要朝向自己。 3. 取液：另一只手捏压橡皮球，将吸量管插入液体内（不得悬空，以免液体吸入球内），用 橡皮球将液体吸至最高刻度上端 12cm 处，然后迅速用食指按紧吸量管上口，以免液体从 吸量管下口流出。 4. 调准刻度：将吸量管提出液面，吸粘性较大的液体时，先用滤纸擦干管尖外壁；然后用食 指控制液体

2、使之缓慢下降，当至所需刻度时， 立即按紧吸量管上口 （此时液体凹面、视线和 刻度应在同一水平面上） 。 5. 放液：放松食指，让液体自然流入容器内，放液时，管尖最好接触容器内壁，但不要插入 容器内原有的液体中，以免污染吸量管和试剂。 6. 洗涤： 吸取血液、 血清等粘稠液体及尿液标本的吸量管， 使用后要及时用自来水冲洗干净； 吸一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，实验完毕后再冲洗。冲洗干净后，晾干，再浸泡于铬 酸洗液中，数小时后取出，再用流水冲净，最后用蒸馏水冲洗，晾干备用。 二、溶液的混匀技术 混匀的方式大致有以下几种，可随使用的器皿和液体容量而选用。 1. 旋转混匀法 用手持容器，使溶液作离心

3、旋转，适用于未盛满液体的试管或小口器皿， 如锥形瓶。旋转试管时最好用手腕旋转。 2. 指弹混匀法 左手持试管上端，用右手指轻轻弹动试管下部，使管内溶液作旋涡运动。 3. 倒转混匀法 适用于有塞量筒和容量瓶、试管内容物的混匀。一般试管内容物的混匀可 用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒转混匀。 4. 吸管混匀法 用吸量管将溶液反复吸放数次，使溶液充分混匀。 5. 玻棒搅动法 适用于烧杯内容物的混匀，如固体试剂的溶解和混匀。 6. 甩动混匀法 右手持试管上部，轻轻甩动振摇，即可混匀。 7. 电磁搅拌混匀法 在电磁搅拌机上放置烧杯，在烧杯内放入封闭于玻璃或塑料管中的小 铁棒，利用磁力使小铁棒旋转以达

4、到混匀杯中液体的目的，适用于酸碱自动滴定， pH 梯度 滴定等。 8. 振荡器混匀法 利用振荡器使容器中的内容物振荡，达到混匀的目的。 9. 注意： （1） 混匀时须防止容器内液体溅出或被污染。 （2） 严禁用手指直接堵塞试管口或锥 形瓶口振摇。 三、离心机的使用方法 使用离心机前，应检查离心机转动状态是否平稳，以确定离心机的性能；检查套管与 离心管大小是否相配，套管是否铺好软垫（用棉药或橡皮） ，检查套管底部应无碎玻璃片或 漏缝。 检查合格后，将一对离心管（待分离管与非分离空白管）放入一对套管中，然后连套 管一起分置粗天平两侧， 用滴管向非分离空白管一侧加水， 直至天平两侧彼此相等为止。 将

5、 各对平衡的套管连同内容物放置于离心机内， 两个等重的离心管必须放于对称位置。 放妥后， 接通电源开关， 逐步扭动转速旋钮， 缓慢增加离心机转速， 直到所需的转速。 达规定时间后， 将转速旋钮逐步调回零，待离心机停稳后，取出离心管。 四、721 型分光光度计 使用方法如下： 1. 接通电源（指示灯亮），预热1520分钟。 2. 灵敏度选择钮放在“ 1 ”档（如调不到“ OD=0” 时选用较高的档次） 。 3. 转动波长选择钮，选用所需的波长。 4. 揭开比色杯暗箱盖，转动“ 0电位器”使电表指针对准 T=0处。 5. 将比色杯放入比色杯架，使空白管对向光路，盖好比色杯暗箱盖。转动“100电位器

6、” ， 调准电表指针使之指向 OD=0（T=100）处。 6. 拉动比色杯座的拉杆，使测定杯进入光路，迅速从电表上读出光密度值，并记录。测读 过程中，随机拉回拉杆到原位，使空白杯进入光路，随时调整OD=0。 7. 比色完毕后，关上电源开关，取出比色杯，将比色杯暗箱盖好，清洗比色杯并晾干。 五、恒温水浴箱的使用 1、加水到适当高度。 2、接通电源，打开开关。 3、调节温度，使之恒温。 4、如长时间不用，应关上开关拔掉电源。 六、氨基酸的薄层层析技术 操作步骤： （一）薄板的制备 1称取硅胶 G 0.5g 放入研钵中，加 1.5ml0.2% 羧甲基纤维素钠，研磨成均匀的稀糊状。 2. 将上述糊状物

7、倾倒在 4X 10cm的玻璃片（图11）上，使之均匀地布满于玻片，将玻片轻 轻地晃动，使硅胶 G均匀分布，表面平坦，光滑，无水层及气泡，然后水平放置在空气中使 其自然干燥。 3. 薄板上硅胶干后，放入 105 C的恒温干燥箱内活化，半小时后取出，晾凉备用。 （二）点样 1. 在距离薄板一端约 2cm 处用细线向下压硅胶，压成一条点样线。 2. 用直径约1mm的玻璃毛细管分别吸取甘氨酸、精氨酸、酪氨酸及混合氨基酸溶液，在点 样线上点样，每隔0.8cm处点一种样品（约 5ul ），点样直径约23mm待点样处干后，再将 样品在原点样处重复点一次。 （三）展层 1. 硅胶板的点样端向下，倾斜地放入层析

8、缸内，使其与缸底平面呈约30。角。 2 用长颈漏斗加入展开剂使展开剂离点样处12cm处为止。 3. 盖上层析缸盖进行层析。 4. 当展开剂前沿到达玻璃板全长的3/4 处停止层析，取出玻片，记下展开剂前沿位置，将 硅胶板置干燥箱烘干。 （四）显色 1. 用 0.5%茚三酮丙酮溶液均匀地喷洒于硅胶板上。 2将玻板置105 C干燥箱内烘干，约 2分钟左右即可显出粉红色斑点。 （五）测量 10 1分别测量甘氨酸、精氨酸、酪氨酸的Rf值，作为标准。 2. 再测出混合液中分离出的各种氨基酸的 Rf值与标准值对照，以确定为何种氨基酸。 （六）结果计算 计算Rf值: R值=氨基酸移动的距离（cm） 溶剂移动的

9、距离（cm） 样品至色斑中心的距离（cm） 样品至溶剂前沿的距离（cm） 七、血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 操作步骤 1准备与点样： 取8cm 2cm醋酸纤维素薄膜，将其浸泡在pH8.6缓冲溶液中，待薄膜完全 浸透后，取出轻轻夹于滤纸中，吸去多余的液体。 然后用点样器蘸新鲜血清， 在无光泽面距 一端约2cm处点样。待血清全部渗入膜内 ,移开点样器。 2电泳：取已点样的薄膜，点样面向下两端紧贴在四层滤纸桥上，注意点样端放阴极。盖 好电泳槽盖，平衡10分钟，打开电源开关，调节电压至110130V,电流0.40.6mA/cm, 通电4560分钟。 3染色与漂洗：电泳结束后，关闭电源。 将薄膜从电泳槽

10、中取出，浸入氨基黑10B染色液中 510分钟。待充分染色后，取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗34遍，直至背景无色为止。 用滤纸吸干薄膜。 4定量：取试管6支，编号，将电泳薄膜按蛋白质区带剪开，分别置于试管中，另于薄膜 的空白部分剪一平均大小的薄膜条放入空白管中。各管中加入0.4mol/L NaOH 5ml，反复振 摇，使其颜色充分洗脱。用721分光光度计进行比色，波长650nm,以空白管调零，读取各 管的吸光度。各种蛋白质占总蛋白百分含量的计算： 吸光度总和（T）=ODa+OD什OD2+OD+OD 清蛋白（A）% = ODa /T 100 -球蛋白 % = OD：1/T 100 :-2-球蛋白 %

11、= OD：2/T 100 -球蛋白 % = OD 7T 100 -球蛋白 % = OD /T 100 5. 结果识别与计算 点样线-2 清蛋白 临床生物化学实验操作技能项目与考核标准 一、刻度吸量管的使用技能 1. 选择：使用前先根据需要选择适当的吸量管，刻度吸量管的总容量最好等于或稍大于最大 取液量。临用前要看清总容量和刻度。 2. 执管：用拇指和中指（辅以无名指） ，拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。 刻度数字要朝向自己。 3. 取液：另一只手捏压橡皮球，将吸量管插入液体内（不得悬空，以免液体吸入球内），用 橡皮球将液体吸至最高刻度上端 12cm 处，然后迅速用食指按紧吸量管上口

12、，以免液体从 吸量管下口流出。 4. 调准刻度：将吸量管提出液面，吸粘性较大的液体时，先用滤纸擦干管尖外壁；然后用食 指控制液体使之缓慢下降，当至所需刻度时， 立即按紧吸量管上口 （此时液体凹面、视线和 刻度应在同一水平面上） 。 5. 放液：放松食指，让液体自然流入容器内，放液时，管尖最好接触容器内壁，但不要插入 容器内原有的液体中，以免污染吸量管和试剂。 6. 洗涤： 吸取血液、 血清等粘稠液体及尿液标本的吸量管， 使用后要及时用自来水冲洗干净； 吸一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，实验完毕后再冲洗。冲洗干净后，晾干，再浸泡于铬 酸洗液中，数小时后取出，再用流水冲净，最后用蒸馏水冲洗，晾干备

13、用。 二、溶液的混匀技术 混匀的方式大致有以下几种，可随使用的器皿和液体容量而选用。 1. 旋转混匀法 用手持容器，使溶液作离心旋转，适用于未盛满液体的试管或小口器皿， 如锥形瓶。旋转试管时最好用手腕旋转。 2. 指弹混匀法 左手持试管上端，用右手指轻轻弹动试管下部，使管内溶液作旋涡运动。 3. 倒转混匀法 适用于有塞量筒和容量瓶、试管内容物的混匀。一般试管内容物的混匀可 用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒转混匀。 4. 吸管混匀法 用吸量管将溶液反复吸放数次，使溶液充分混匀。 5. 玻棒搅动法 适用于烧杯内容物的混匀，如固体试剂的溶解和混匀。 6. 甩动混匀法 右手持试管上部，轻轻甩动振摇

14、，即可混匀。 7. 电磁搅拌混匀法 在电磁搅拌机上放置烧杯，在烧杯内放入封闭于玻璃或塑料管中的小 铁棒，利用磁力使小铁棒旋转以达到混匀杯中液体的目的，适用于酸碱自动滴定， pH 梯度 滴定等。 8. 振荡器混匀法 利用振荡器使容器中的内容物振荡，达到混匀的目的。 9. 注意： （1） 混匀时须防止容器内液体溅出或被污染。 （2） 严禁用手指直接堵塞试管口或锥 形瓶口振摇。 三、离心机的使用方法 使用离心机前，应检查离心机转动状态是否平稳，以确定离心机的性能；检查套管与 离心管大小是否相配，套管是否铺好软垫（用棉药或橡皮） ，检查套管底部应无碎玻璃片或 漏缝。 检查合格后，将一对离心管（待分离管

15、与非分离空白管）放入一对套管中，然后连套 管一起分置粗天平两侧， 用滴管向非分离空白管一侧加水， 直至天平两侧彼此相等为止。 将 各对平衡的套管连同内容物放置于离心机内， 两个等重的离心管必须放于对称位置。 放妥后， 接通电源开关， 逐步扭动转速旋钮， 缓慢增加离心机转速， 直到所需的转速。 达规定时间后， 将转速旋钮逐步调回零，待离心机停稳后，取出离心管。 四、721 型分光光度计 使用方法如下： 1. 接通电源（指示灯亮），预热1520分钟。 2. 灵敏度选择钮放在“ 1 ”档（如调不到“ OD=0” 时选用较高的档次） 。 3. 转动波长选择钮，选用所需的波长。 4. 揭开比色杯暗箱盖，

16、转动“ 0电位器”使电表指针对准 T=0处。 5. 将比色杯放入比色杯架，使空白管对向光路，盖好比色杯暗箱盖。转动“100电位器” ， 调准电表指针使之指向 OD=0（T=100）处。 6. 拉动比色杯座的拉杆，使测定杯进入光路，迅速从电表上读出光密度值，并记录。测读 过程中，随机拉回拉杆到原位，使空白杯进入光路，随时调整OD=0。 7. 比色完毕后，关上电源开关，取出比色杯，将比色杯暗箱盖好，清洗比色杯并晾干。 五、722型分光光度计 使用方法如下： 1. 接通电源（指示灯亮），预热1520分钟。 2. 灵敏度选择钮放在“ 1”档（如调不到“ OD=0 时选用较高的档次）。 3. 转动波长选

17、择钮，选用所需的波长；调节“TAC旋钮”至“ T”刻度。 4. 揭开比色杯暗箱盖，转动“ 0电位器”使显示器显示为“ 0”。 5. 将比色杯放入比色杯架，使空白管对向光路，盖好比色杯暗箱盖。转动“100电位器”， 使显示器显示为“ 100”。 6. 调节“ TAC旋钮”至“ A”刻度，观察显示器显示是否为“0”；若不为“ 0”，调节“ Abs0 旋钮”使显示器显示为“ 0 ”。 7. 拉动比色杯座的拉杆，使测定杯进入光路，迅速从电表上读出光密度值，并记录。测读 过程中，随机拉回拉杆到原位，使空白杯进入光路，随时调整OD/A=O 8比色完毕后，关上电源开关，取出比色杯，将比色杯暗箱盖好，清洗比色

18、杯并晾干。 六、恒温水浴箱的使用 5、加水到适当高度。 6、接通电源，打开开关。 7、调节温度，使之恒温。 8、如长时间不用，应关上开关拔掉电源。 七、血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 操作步骤 1.准备与点样：取8cm 2cm醋酸纤维素薄膜，将其浸泡在pH8.6缓冲溶液中，待薄膜完全 浸透后，取出轻轻夹于滤纸中，吸去多余的液体。 然后用点样器蘸新鲜血清，在无光泽面距 一端约2cm处点样。待血清全部渗入膜内,移开点样器。 2电泳：取已点样的薄膜，点样面向下两端紧贴在四层滤纸桥上，注意点样端放阴极。盖 好电泳槽盖，平衡10分钟，打开电源开关，调节电压至110130V,电流0.40.6mA/cm, 通

19、电4560分钟。 3染色与漂洗：电泳结束后，关闭电源。 将薄膜从电泳槽中取出，浸入氨基黑10B染色液中 510分钟。待充分染色后，取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗34遍，直至背景无色为止。 用滤纸吸干薄膜。 4定量：取试管6支，编号，将电泳薄膜按蛋白质区带剪开，分别置于试管中，另于薄膜 的空白部分剪一平均大小的薄膜条放入空白管中。各管中加入O.4mol/L NaOH 5ml，反复振 摇，使其颜色充分洗脱。用 721分光光度计进行比色，波长650nm,以空白管调零，读取各 管的吸光度。 各种蛋白质占总蛋白百分含量的计算： 吸光度总和（T）=ODa+ODi+OD_2+OD+OD 清蛋白（A）% = ODa /T 100 ：i-球蛋白 % = OD1/T 100 ：2-球蛋白 % = OD-2/T 100 -球蛋白 % = OD /T 100 -球蛋白 % = OD /T 100 5 结果识别与计算 11 1 点样 线VP c V (2 1 1 清蛋白 + 八、FP640火焰光度计