从生物样品中分离纯化生物大分子

1、报告人：王瀚辉报告人：王瀚辉 陈聪陈聪 王楠王楠 赵一亮赵一亮指导教师：赵慧珊指导教师：赵慧珊时间：时间：2014.122014.12概述概述1.1.课题研究背景课题研究背景2.2.课题研究内容及创新点课题研究内容及创新点3.3.课题技术路线课题技术路线4.4.仪器及试剂仪器及试剂5.5.前期研究基础或预实验结果前期研究基础或预实验结果概述概述1.1.课题研究背景课题研究背景2.2.课题研究内容及创新点课题研究内容及创新点3.3.课题技术路线课题技术路线4.4.仪器及试剂仪器及试剂5.5.前期研究基础或预实验结果前期研究基础或预实验结果1.1.课题研究背景课题研究背景生物大分子是指生物体内广泛

2、的活性物质，分子量上千上生物大分子是指生物体内广泛的活性物质，分子量上千上万甚至更大，多数生物大分子为多聚体。由简单有机化合万甚至更大，多数生物大分子为多聚体。由简单有机化合物聚合而成。物聚合而成。2020世纪以来，生物化学、分子生物学和细胞生物学生物迅世纪以来，生物化学、分子生物学和细胞生物学生物迅猛发展，实验室里生物大分子的合成进步速度可观。大分猛发展，实验室里生物大分子的合成进步速度可观。大分子的分离纯化与鉴定一直以来是生物化学研究的基础，是子的分离纯化与鉴定一直以来是生物化学研究的基础，是生物化学工作者的重要基本功。生物大分子广泛存在于机生物化学工作者的重要基本功。生物大分子广泛存在于

3、机体的各类组织中，以蛋白质、核酸、脂质、多糖为主。诸体的各类组织中，以蛋白质、核酸、脂质、多糖为主。诸多生物大分子合成分离和纯化已经从实验室走向工厂化，多生物大分子合成分离和纯化已经从实验室走向工厂化，因此生物大分子的相关技术尤为重要。因此生物大分子的相关技术尤为重要。概述概述1.1.课题研究背景课题研究背景2.2.课题研究内容及创新点课题研究内容及创新点3.3.课题技术路线课题技术路线4.4.仪器及试剂仪器及试剂5.5.前期研究基础或预实验结果前期研究基础或预实验结果2.2.课题研究内容课题研究内容1.1.从生物样品中分离纯化生物从生物样品中分离纯化生物大分子大分子2.2.利用分离纯化生物大

4、分子方利用分离纯化生物大分子方法从肝组织中提取分离鉴定一法从肝组织中提取分离鉴定一种酶（该酶含三个大小不同亚种酶（该酶含三个大小不同亚基，基，pI=6.2pI=6.2。）。）创新点创新点对该酶的特性结果及分子量不对该酶的特性结果及分子量不明确，无法利用分子量差异分明确，无法利用分子量差异分离，但可以利用其等电点完成离，但可以利用其等电点完成分离。鉴定过程中利用分离。鉴定过程中利用SDS-SDS-PAGEPAGE电泳技术可以鉴定亚基情电泳技术可以鉴定亚基情况是否是符合要求。况是否是符合要求。概述概述1.1.课题研究背景课题研究背景2.2.课题研究内容及创新点课题研究内容及创新点3.3.课题技术路

5、线课题技术路线4.4.仪器及试剂仪器及试剂5.5.前期研究基础或预实验结果前期研究基础或预实验结果3.3.课题技术路线课题技术路线( (一）从生物样品中分离纯化生物大一）从生物样品中分离纯化生物大分子方法分子方法1.1.提取对象选择提取对象选择2.2.制定提取方案制定提取方案3.3.文献查阅和前期预备性实验文献查阅和前期预备性实验4.4.生物材料处理生物材料处理5.5.生物大分子提取方法生物大分子提取方法1.1.提取对象选择：确定细胞内目标分子的种类，提取对象选择：确定细胞内目标分子的种类，和目标分子的位置。和目标分子的位置。2.2.制定提取方案：确定一套能够确定完善分离制定提取方案：确定一套

6、能够确定完善分离高纯度目标分子的方法。高纯度目标分子的方法。3.3.文献查阅和前期预备性实验：通过文献资料文献查阅和前期预备性实验：通过文献资料掌握四种分子理化性质，完善计划，确定分离掌握四种分子理化性质，完善计划，确定分离途径、途径、4.4.生物材料的处理：生物大分子来源通常为生物组织生物材料的处理：生物大分子来源通常为生物组织或微生物菌落，首先需要破碎组织。或微生物菌落，首先需要破碎组织。4.14.1机械法：机械法：1) 1) 研磨：将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，研磨：将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，加入少量石英砂研磨或匀浆。加入少量石英砂研磨或匀浆。2) 2) 组织捣碎器：这是

7、一种较剧烈的破碎细胞的方法，组织捣碎器：这是一种较剧烈的破碎细胞的方法，通常可先用家用食品加工机将组织打碎，然后再用通常可先用家用食品加工机将组织打碎，然后再用10000r/min10000r/min20000r/min20000r/min的内刀式组织捣碎机的内刀式组织捣碎机( (即高即高速分散器速分散器) )将组织的细胞打碎。将组织的细胞打碎。( (植物微生物）植物微生物）4.24.2物理法：物理法：1) 1) 反复冻融法：将待破碎的细胞冷至反复冻融法：将待破碎的细胞冷至1515到到2020，然后放于室温然后放于室温( (或或40)40)迅速融化，如此反复冻融多次，由迅速融化，如此反复冻融多

8、次，由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。胀破碎。2) 2) 超声波处理法：此法是借助超声波的振动力破碎细胞超声波处理法：此法是借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。破碎微生物细菌和酵母菌时，时间要长一些。壁和细胞器。破碎微生物细菌和酵母菌时，时间要长一些。3) 3) 压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在10001000105Pa105Pa20002000105Pa 105Pa 的高压下使细胞悬液通过一的高压下使细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。个小

9、孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。4) 4) 冷热交替法：从细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可冷热交替法：从细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可用此法。在用此法。在9090左右维持数分钟，立即放入冰浴中使之冷左右维持数分钟，立即放入冰浴中使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以被破碎。却，如此反复多次，绝大部分细胞可以被破碎。4.34.3化学与生物化学方法：化学与生物化学方法：1) 1) 自溶法：将新鲜的生物材料存放于一定的自溶法：将新鲜的生物材料存放于一定的pHpH和适当的温度下，和适当的温度下，细胞结构在自身所具有的各种水解酶（如蛋白酶和酯酶等）的细胞结构在自身所具有的各种水解酶（如蛋白酶和酯酶

10、等）的作用下发生溶解，使细胞内含物释放出来。作用下发生溶解，使细胞内含物释放出来。2) 2) 溶胀法：细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液和低浓度的稀溶胀法：细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液和低浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子大量进入细胞，将细盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子大量进入细胞，将细胞膜胀破释放出细胞内含物。胞膜胀破释放出细胞内含物。 3) 3) 酶解法：利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶酶解法：利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶和酯酶等，于和酯酶等，于3737，pH8pH8，处理，处理1515分钟，可以专一性地将细胞壁分钟，可以专一性地将细胞壁分解。分解

11、。 4) 4) 有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶剂或有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶剂或SDSSDS（十二烷基硫酸钠）等表面活性剂处理细胞，可将细胞膜溶（十二烷基硫酸钠）等表面活性剂处理细胞，可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，此法也可以与研磨法联合使用。解，从而使细胞破裂，此法也可以与研磨法联合使用。5.5.生物大分子提取方法生物大分子提取方法5.1.5.1.核酸核酸的分离纯化的分离纯化 5.1.1 5.1.1分离纯化原则：分离纯化原则：（1 1） 保持核酸分子一级结构的完整性保持核酸分子一级结构的完整性 意义：遗传信息全部储存在一级结构之中，核酸的意义：遗传信息全部

12、储存在一级结构之中，核酸的级级结构还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合结构还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合的方式。的方式。 具体原则：温度不要过高；控制具体原则：温度不要过高；控制pHpH值范围值范围(pH(pH值值5-9); 5-9); 保持一定离子强度保持一定离子强度; ; 减少物理因素对核酸的机械剪切力。减少物理因素对核酸的机械剪切力。（2 2） 防止核酸生物降解防止核酸生物降解 DNA DNA酶抑制剂：金属离子螯合剂；阴离子型表面活性剂酶抑制剂：金属离子螯合剂；阴离子型表面活性剂 RNA RNA酶抑制剂：皂土；酶抑制剂：皂土；DEPC(DEPC(二乙基焦碳酸盐二

13、乙基焦碳酸盐) )；肝素；肝素；复合硅酸盐；复合硅酸盐；RNaseRNase阻抑蛋白；氧钒核糖核苷复合物阻抑蛋白；氧钒核糖核苷复合物5.1.2 5.1.2 分离纯化的步骤：分离纯化的步骤：(1)(1)去除杂质：生物样品内常含有大量多糖，脂质，去除杂质：生物样品内常含有大量多糖，脂质，蛋白质等杂志，利用物理或化学方法将其除去。蛋白质等杂志，利用物理或化学方法将其除去。(2)(2)浓缩：常用沉淀的方法。其好处是：改变核酸的浓缩：常用沉淀的方法。其好处是：改变核酸的溶解缓冲液；重新调整核酸的浓度；去除溶液中某些溶解缓冲液；重新调整核酸的浓度；去除溶液中某些盐离子与杂质。盐离子与杂质。(3)(3)测定

14、：一般选用紫外分光光度法或溴乙锭荧光法测定：一般选用紫外分光光度法或溴乙锭荧光法测定核酸的含量。测定核酸的含量。(4)(4)保存：目标核酸的保存处理保存：目标核酸的保存处理5.25.2脂质的分离纯化脂质的分离纯化(1)(1)先配制氯仿先配制氯仿/ /甲醇甲醇=2/1=2/1（v/vv/v），取组织按），取组织按1 1：2020的量和的量和氯仿氯仿/ /甲醇一起组织均浆，分层后在室温下在摇床中摇动甲醇一起组织均浆，分层后在室温下在摇床中摇动15-2015-20分钟。分钟。(2) (2) 均浆通过滤纸过滤或者离心获得液体。均浆通过滤纸过滤或者离心获得液体。(3) (3) 在离心获得的液体中加入在离

15、心获得的液体中加入0.20.2倍体积的水或者倍体积的水或者0.9%0.9%的的生理盐水，涡旋几秒钟混均，然后生理盐水，涡旋几秒钟混均，然后2000rpm2000rpm离心得到两相离心得到两相溶液，如果需要的话用甲醇溶液，如果需要的话用甲醇/ /水（水（1/11/1）的将两相界面洗一）的将两相界面洗一到两次，洗的过程不要让甲醇到两次，洗的过程不要让甲醇/ /水与下层混合。水与下层混合。(4) (4) 通过离心和虹吸去掉上层后，下层氯仿相含有脂质，通过离心和虹吸去掉上层后，下层氯仿相含有脂质，如果体积在如果体积在2-3ml2-3ml以下则通过真空旋转蒸发器或在氮气下以下则通过真空旋转蒸发器或在氮气

16、下浓缩。浓缩。(5) (5) 二氯甲烷可以替代氯仿，结果表明二氯甲烷二氯甲烷可以替代氯仿，结果表明二氯甲烷/ /甲醇能甲醇能够取代氯仿够取代氯仿/ /甲醇，因此能够避免氯仿带来的健康、安全甲醇，因此能够避免氯仿带来的健康、安全和管理问题。和管理问题。5.35.3糖的分离纯化糖的分离纯化5.3.1 5.3.1 单双糖的分离：常见的单、双糖一般采用合成单双糖的分离：常见的单、双糖一般采用合成的方式。制备如下：脱脂的方式。制备如下：脱脂去杂去杂浓缩浓缩再次去杂再次去杂脱色脱色 浓缩浓缩 冷却冷却 结晶（结晶（进一步纯化）。进一步纯化）。5.3.2 5.3.2 多糖的分离纯化：多糖的分离纯化： 脱脂：

17、由于多糖被脂质包围，通常用醇或醚回流脱脂。脱脂：由于多糖被脂质包围，通常用醇或醚回流脱脂。提取：热水浸提法，微波辅助提取法，超声辅助法，索氏提提取：热水浸提法，微波辅助提取法，超声辅助法，索氏提取法，醇提法，其它方法（如稀碱液浸提法、稀酸液浸提法、取法，醇提法，其它方法（如稀碱液浸提法、稀酸液浸提法、酶法等）酶法等）除杂：去除混有的蛋白质细胞色素等。除杂：去除混有的蛋白质细胞色素等。纯化：分部沉淀法，盐析法，季铵盐沉淀法，柱层析，制备纯化：分部沉淀法，盐析法，季铵盐沉淀法，柱层析，制备性区域电泳，膜分离法，金属络合物法，其它方法（如超过性区域电泳，膜分离法，金属络合物法，其它方法（如超过滤法、

18、活性炭柱色谱、滤法、活性炭柱色谱、LKBLKB柱色谱系统等）柱色谱系统等）5.45.4蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化5.4.1 5.4.1 前处理：破坏生物样品组织，保证蛋白质不失活下前处理：破坏生物样品组织，保证蛋白质不失活下完成。完成。5.4.25.4.2粗分级：选用一套适当方法，把蛋白质混合物提取粗分级：选用一套适当方法，把蛋白质混合物提取液中，所要的蛋白质与其他杂蛋白质分离开来。液中，所要的蛋白质与其他杂蛋白质分离开来。5.4.35.4.3细分级：样品进一步提纯细分级：样品进一步提纯5.4.45.4.4进一步分离优化：将蛋白精细分离开来。常用有沉进一步分离优化：将蛋白精细分离开来。常

19、用有沉淀，离心。电泳。层析。淀，离心。电泳。层析。5.4.5 5.4.5 浓缩：常用减压蒸馏法，空气流动蒸发蒸馏法，冰浓缩：常用减压蒸馏法，空气流动蒸发蒸馏法，冰冻法，吸收法，超滤法提纯。冻法，吸收法，超滤法提纯。5.4.6 5.4.6 干燥与保存：保证蛋白质活性下将其干燥保存。干燥与保存：保证蛋白质活性下将其干燥保存。3.3.课题技术路线课题技术路线（二）从肝组织中提取一种酶（二）从肝组织中提取一种酶2.1.2.1.生物样品的选择生物样品的选择2.22.2生物样品处理生物样品处理2.3.2.3.具体检测方法具体检测方法2.4.2.4.数据处理数据处理2.5.2.5.质量控制方法质量控制方法1

20、.1.生物样品的选择：健康生物样品的选择：健康2 2月龄月龄wistarwistar大鼠大鼠原理：由于肝脏内酶常和脂类或者糖结合，故应将实原理：由于肝脏内酶常和脂类或者糖结合，故应将实验动物饥饿验动物饥饿24h24h处理。保证肝内酶的活性和减少不必处理。保证肝内酶的活性和减少不必要杂质。要杂质。2 2生物样品处理：生物样品处理：2.12.1大鼠饥饿大鼠饥饿24h24h后处死，分离肝脏组织，切碎，匀浆后处死，分离肝脏组织，切碎，匀浆处理，用处理，用3232层纱布过滤得到匀浆液。层纱布过滤得到匀浆液。2.22.2蛋白酶活性抑制：用苯甲基磺酰氟（蛋白酶活性抑制：用苯甲基磺酰氟（PMSFPMSF）抑制

21、）抑制蛋白酶活性，防止目标酶水解。蛋白酶活性，防止目标酶水解。原理：细胞内蛋白酶活性较强，原理：细胞内蛋白酶活性较强，PMSFPMSF可和蛋白酶结合可和蛋白酶结合不破坏蛋白酶结构，防止细胞内蛋白质水解不破坏蛋白酶结构，防止细胞内蛋白质水解2.32.3去除核酸：去除核酸：原理：细胞内含有大量核酸，会影响实验结果。原理：细胞内含有大量核酸，会影响实验结果。除核酸的常用方法是沉淀法，沉淀剂的选择需要大量的试验来选定，已知的有1%2%的链霉素硫酸盐、PEG、溶菌酶等。这里选用链霉素硫酸盐。2.32.3去除核酸：去除核酸：1%-2%1%-2%链霉素硫链霉素硫酸盐，沉淀去除核酸。酸盐，沉淀去除核酸。3.1

22、3.1匀浆液的分离：匀浆液的分离：原理：目标酶位置未知，假设存在原理：目标酶位置未知，假设存在于基质、线粒体、酶体三个位置，于基质、线粒体、酶体三个位置，利用差速离心法分离取不同亚细胞利用差速离心法分离取不同亚细胞组分组分。3.13.1匀浆液的分离：匀浆液的分离：3.1.13.1.1组分的分离：取匀浆液组分的分离：取匀浆液1.5ml1.5ml在在4 4下下12000r/min 12000r/min 离心离心15min15min，EPEP管内液面分三层，分别取管内液面分三层，分别取中、下层。中、下层。3.1.23.1.2亚细胞组分的分离：亚细胞组分的分离：(1)(1)离心管加离心管加0.5ml

23、0.34mol/L 0.5ml 0.34mol/L 蔗糖，下层液体蔗糖，下层液体0.5ml0.5ml轻轻覆盖在上面，轻轻覆盖在上面，1600r/min1600r/min离心离心10min,10min,得到上清。得到上清。(2)(2)沉淀加沉淀加1ml 0.25mol/L 1ml 0.25mol/L 蔗糖混匀，蔗糖混匀，3500r/min 3500r/min 离离心心 10min 10min ，得到上清，得到上清(3)(3)上清混合为线粒体及酶体悬浮液。上清混合为线粒体及酶体悬浮液。3.1.2 3.1.2 亚细胞组分处理：用超声破碎仪破碎处理线粒亚细胞组分处理：用超声破碎仪破碎处理线粒体及酶体悬

24、浮液。体及酶体悬浮液。3.23.2目标酶的初步提取：目标酶的初步提取： 原理：提取酶的方法有多种，但因为酶的性质未知，原理：提取酶的方法有多种，但因为酶的性质未知，故使用能分离酶且不损伤酶活性的盐析法。故使用能分离酶且不损伤酶活性的盐析法。盐析法：中性盐能破坏蛋白分子的表面电荷使蛋白质盐析法：中性盐能破坏蛋白分子的表面电荷使蛋白质聚沉析出。聚沉析出。透析法：析出蛋白质因含有大量盐离子影响纯化，故透析法：析出蛋白质因含有大量盐离子影响纯化，故有半透膜透析，离子可以离开半透膜，而蛋白质分子有半透膜透析，离子可以离开半透膜，而蛋白质分子不可以。不可以。3.23.2目标酶的初步提取：目标酶的初步提取：

25、3.2.1 3.2.1 提取液配置：饱和硫酸铵溶液调节提取液配置：饱和硫酸铵溶液调节PHPH值至值至6.26.2，将酶溶液与提取液混匀。将酶溶液与提取液混匀。3.2.2 3.2.2 酶的提取：将混合液于离心机酶的提取：将混合液于离心机3000r/min 3000r/min 离心离心10min10min，取沉淀物加缓冲溶液溶解，将溶液放入透析，取沉淀物加缓冲溶液溶解，将溶液放入透析袋透析至不再有离子析出。袋透析至不再有离子析出。3.33.3目标酶的分离纯化：目标酶的分离纯化：原理：原理：DEAE-DEAE-纤维素为二乙氨乙基纤维素，是阴离子交换纤维素为二乙氨乙基纤维素，是阴离子交换剂。剂。其原理

26、基于离子交换层析：离子交换层析中，基质是由带其原理基于离子交换层析：离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。有电荷的树脂或纤维素组成。由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pHpH条件下，条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换

27、基质结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pHpH值洗脱下来。值洗脱下来。3.33.3目标酶的分离纯化：目标酶的分离纯化：(1)(1)取取DEAE-DEAE-纤维素，调节纤维素，调节PHPH至至6.36.3，进，进行装柱平衡，用乙酸铵进行第一次洗行装柱平衡，用乙酸铵进行第一次洗脱。同时用磺基水杨酸进行检测，收脱。同时用磺基水杨酸进行检测，收集第二个峰的组分。集第二个峰的组分。 (2)(2)回收回收DEAE-DEAE-纤维

28、素，调节纤维素，调节PHPH至至6.16.1，再次装柱平衡再次装柱平衡, ,上上(1)(1)取得样品，洗脱，取得样品，洗脱，收集第一个峰的组分。收集第一个峰的组分。3.4 3.4 目标酶的鉴定：取目标酶提取液，进行目标酶的鉴定：取目标酶提取液，进行SDS-PAGESDS-PAGE电泳检测。电泳检测。(1)(1)样品煮沸样品煮沸10-15min10-15min(2)(2)制电泳胶制电泳胶(3)(3)上样上样(4)(4)电泳电泳(5)0.25%(5)0.25%考马斯亮蓝考马斯亮蓝R250R250染色染色10-15min10-15min(6)(6)脱色处理脱色处理(7)(7)若出现三个条带则确定为目

29、标酶，若无则取线粒若出现三个条带则确定为目标酶，若无则取线粒体和酶体提取液，如重复体和酶体提取液，如重复3 3过程。过程。4.4.数据处理：根据数据处理：根据MARKERMARKER计算蛋白质相对分计算蛋白质相对分子质量。子质量。由于蛋白质为三个亚基组成，三个亚基质量由于蛋白质为三个亚基组成，三个亚基质量和即为蛋白质质量。和即为蛋白质质量。SDS-PAGESDS-PAGE电泳分别得到电泳分别得到三个亚基质量，即可得到蛋白质分子量。三个亚基质量，即可得到蛋白质分子量。5.5.质量控制方法：质量控制方法：5.15.1控制样品分析控制样品分析5.2 5.2 比对比对概述概述1.1.课题研究背景课题研

30、究背景2.2.课题研究内容及创新点课题研究内容及创新点3.3.课题技术路线课题技术路线4.4.仪器及试剂仪器及试剂5.5.前期研究基础或预实验结果前期研究基础或预实验结果4.4.仪器和试剂仪器和试剂试剂：试剂：PBSPBS溶液、溶液、1%-2%1%-2%链霉素硫酸盐、苯甲基磺酰氟、链霉素硫酸盐、苯甲基磺酰氟、饱和硫酸铵溶液、氨水、硫酸、乙酸、蔗糖、磺基水饱和硫酸铵溶液、氨水、硫酸、乙酸、蔗糖、磺基水杨酸、杨酸、DEAE-DEAE-纤维素、纤维素、30%PEAG30%PEAG，1.5mol/L Tris-1.5mol/L Tris-HCl(PH8.8),1.9mol/L Tris-HCl(PH6

31、.8) HCl(PH8.8),1.9mol/L Tris-HCl(PH6.8) ，5X5X电泳缓电泳缓冲液、冲液、100g/L100g/L过硫酸铵溶液，四甲基乙二胺，过硫酸铵溶液，四甲基乙二胺，0.25%0.25%考马斯亮蓝，脱色液。考马斯亮蓝，脱色液。仪器：试管、超速离心机、常速离心机、透析袋、电仪器：试管、超速离心机、常速离心机、透析袋、电磁搅拌器、蠕动泵、玻璃层吸柱、滴管、玻璃板、电磁搅拌器、蠕动泵、玻璃层吸柱、滴管、玻璃板、电泳仪，垂直板电泳槽，烧杯，移液枪，刀片，回形针，泳仪，垂直板电泳槽，烧杯，移液枪，刀片，回形针，塑料盒，刮板，刻度尺。塑料盒，刮板，刻度尺。概述概述1.1.课题研究背景课题研究背景2.2.课题研究内容及创新点课题研究内容及创新点3.3.课题技术路线课题技术路线4.4.仪器及试剂仪器及试剂5.5.前期研究基础或预实