动物源性食品中近百种常见抗生素的筛查和谱库检索确证

1、动物源性食品中近百种常见抗生素的筛查和谱库检索确证在现代化农业生产过程中，牛肉，猪肉，鸡肉和火鸡等在饲养环节往往在饲料 中使用大量抗生素来辅助预防和治疗疾病。 -内酰胺类，大环内酯类，磺胺类，四 环素等抗生素，是畜牧饲养生产中不可缺少的一部分。然而，食品中抗生素的残留 可能会对人类造成潜在的危害，长期摄入可能会产生抗药性。许多国家已经建立了 一系列有关这些抗生素在动物生产中使用、用量和停药的法规。目前已有多种方法来进行抗生素残留的测定，包括生物测定，免疫法，薄层层 析法等，而 LC-MS/MS 因为其较高的选择性和灵敏度能帮助进行更好的检测和确 证，所以得到更广泛的应用。本文包含多类抗生素的筛

2、选方法，包括 -内酰胺类，四环素，磺胺类，大环 内酯类，氯霉素类，氟喹诺酮类，抗寄生虫等。具体的化合物信息详见化合物列 表。采用 scheduled -MRM? -IDA-EPI （增强子离子扫描）的技术路线来进行检 测，同时得到 MRM 离子对的定量数据以及高灵敏度的二级质谱谱图。采用正离子 和负离子两种采集方法，以达到最高的灵敏度。其中正离子可同时进行 76 种抗生 素的定量和筛查，负离子可同时进行 18 种抗生素的定量和筛查。二、目标化合物列表动物源性食品中近百种常见抗生素的筛查和谱库检索确证中文名称 英文通用名分子式 2-巯基苯并咪唑 2-mercaptobenzimidazole C

3、 7H 6N 2S阿 苯达唑 AlbendazoleC 12H 15N 3O 2S 阿苯达唑胺砜 Albendazole Amino Sulfone C 10H 13N 3O 2S阿苯达唑砜 Albendazole Sulfone C 12H 15N 3O 4S 阿苯达唑亚砜 Albendazole Sulfoxide C 12H 15N 3O 3S 阿莫西林 Amoxicillin C 16H 19N 3O 5S 杆菌肽Bacitracin C 66H 103N 17O 16S 卡巴氧 Carbadox C 11H 10N 4O 4头孢噻夫 Ceftiofur C19H 17N 5O 7S

4、3 金霉素 Chlortetracycline C 22H 23ClN 2O 8环丙沙星 Cipro?oxacin C 17H 18FN 3O 3克林霉素 Clindamycin C 18H 33ClN 2O 5S 达氟沙星 Dano?oxacin C 19H 20FN 3O 3癸氧喹酯 DecoquinateC 24H 35NO 5 去乙烯环丙沙星 Desethylene Cipro?oxacin C 15H 16FN 3O 3二 氟沙星 Di?oxacin C 21H 19F 2N 3O 3二甲硝咪唑 Dimetridazole C 5H 7N 3O 2多西 环素 Doxycycline

5、C 22H 24N 2O 8依诺沙星 Enoxacin C 15H 17FN 4O 3恩诺沙星Enro?oxacinC 19H 22FN 3O 3红霉素 Erythromycin C 37H 67NO 13 芬苯达唑 Fenbendazole C 15H 13N 3O 2S 芬苯达唑砜 Fenbendazole Sulfone C 15H 13N 3O 4S芬 苯达唑亚砜 Fenbendazole Sulfoxide C 15H 13N 3O 3S 氟苯尼考 Florfenicol C 12H 14Cl 2FNO 4S 氟苯尼考胺 Florfenicol Amine C 10H 14FNO 3

6、S 氟甲喹 Flumequine C 14H 12FNO 3 布洛芬 Ibuprofen C 13H 18O 2交沙霉素 Josamycin C 42H 69NO 15酮洛芬 Ketoprofen C 16H 14O 3拉沙里菌素 Lasalocid C 34H 53NaO 林可霉素 Lincomycin C 18H 34N 2O 6S 洛美沙星 Lome?oxacin C 17H 19F 2N 3O 3甲苯达唑 Mebendazole C 16H 13N 3O 3 甲硝唑 Metronidazole C 6H 9N 3O 3米诺环素 Minocycline C 23H 27N 3O 7 莫能

7、菌素 Monensin C 36H 62O 11那拉霉素 Narasin C 43H 72O 11诺氟沙星 Nor?oxacin C 16H 18FN 3O 3新生霉素 Novobiocin C 31H 36N 2O 11氧氟沙星 O?oxacin C 18H 20FN 3O 4奥比沙星 Orbi?oxacin C 19H 20F 3N 3O 3惡喹酸 Oxolinic Acid C 13H 11NO 5 羟基保泰松 Oxyphenbutazone C 19H 20N 2O 3土霉素 Oxytetracycline C 22H 24N 2O 9保泰松 Phenylbutazone C 19H

8、20N 2O 2雷托巴胺 Ractopamine C 18H 23NO 3罗硝 唑 Ronidazole C 6H 8N 4O 4 沙拉沙星 Sara?oxacin C 20H 17F 2N 3O 3螺旋霉素 Spiramycin C 43H 74N 2O 14磺胺醋酰 Sulfacetamide C 8H 10N 2O 3S磺 胺氯达嗪Sulfachloropyridazine C 10H 9ClN 4O 2S 磺胺嘧啶 Sulfadiazine C 10H 10N 4O 2S 磺 胺二甲嘧啶 Sulfadimethoxine C 12H 14N 4O 4S 磺胺多辛 Sulfadoxine

9、 C 12H 14N 4O 4S 磺胺脒 Sulfaguanidine C 7H 10N 4O 2S 磺胺甲嘧啶SulfamerazineC 11H 12N 4O 2S磺胺二甲嘧啶 Sulfamethazine C 12H 14N 4O 2S磺 胺甲二唑 Sulfamethiazole C 9H 10N 4O 2S 2磺胺甲惡唑 Sulfamethoxazole C 10H 11N 3O 3S磺 胺甲氧嗪 Sulfamethoxypyridazine C 11H 12N 4O 3S 磺胺 Sulfanilamide C 6H 8N 2O 2S 磺胺吡 啶 Sulfapyridine C 11H

10、 11N 3O 2S 磺胺喹惡啉 Sulfaquinoxaline C 14H 12N 4O 2S 柳 氮磺胺吡啶 Sulfasalazine C 18H 14N 4O 5S磺 胺噻唑 Sulfathiazole C 9H 9N 3O 2S 2 磺胺异惡唑 Sul?soxazole C 11H 13N 3O 3S 四环素 T etracycline C 22H 24N 2O 8四 咪唑 T etramisole C 11H 12N 2S 噻菌灵 Thiabendazole C 10H 7N 3S甲 砜氯霉素 Thiamphenicol C 12H 15Cl 2NO 5S 替米考星 Tilmic

11、osin C 46H 80N 2O 13 托灭酸 T olfenamic acid C 14H 12ClNO 2三氯苯哒唑 Triclabendazole C 14H 9Cl 3N 2OS 泰乐 菌素 T ylosinC 46H 77NO 172-喹喔啉羧酸 2-quinoxalinecarboxylic acid C 9H 6N 2O 26-苯基 - 2-硫脲嘧啶 6-phenyl-2-thiouracil C 10H 8N 2OS 氨苄西林 Ampicillin C 16H 19N 3O 4S 氯霉素 Chloramphenicol C 11H 12Cl 2N 2O 5氯唑西林 Cloxa

12、cillin C 19H 20ClN 3O 6S 双氯酚酸 Diclofenac C 14H 11Cl 2NO 2安乃近 Dipyrone C 13H 17N 3O 4S 乙 哚乙酸 Etodolac C 17H 21NO 3氟苯尼考 Florfenicol C 12H 14Cl 2FNO 4S 氟尼克辛 Flunixin C 14H 11F 3N 2O 2拉沙里菌素 Lasalocid C 34H 54O 8萘普生 Naproxen C 14H 14O 3尼卡巴嗪 Nicarbazin C 19H 18N 6O 6氯硝柳胺 Niclosamide C 13H 8Cl 2N 2O 4青霉素 G

13、 Penicillin G C 16H 18N 2O 4S 雷复尼特 Rafoxanide C 19H 11Cl 2I 2NO 3 磺胺硝苯 Sulfanitran C 14H 13N 3O 5S 甲砜氯霉素ThiamphenicolC 12H 15Cl 2NO 5S动物源性食品中近百种常见抗生素的筛查和谱库检索确证三、样品制备方法? 牛肾 / 肾积液或血清样品 11. 称取 1 g 牛肾匀浆样品，肾汁，或血清放入 50 mL FEP（氟化乙烯丙烯） 管。2. 添加 5 L内标溶液。 3. 加入 2 mL 水和 8 mL 乙腈。4. 使用旋涡混合器进行混合，然后摇动 5 min 。5. 离心

14、5 min 。6. 将上清液倒出至一 50毫升试管，加入 500 mg C18吸附剂。 7. 使用旋涡混合 器混合 30秒。 8. 离心 1 min 。9. 取 5 mL 上清液，浓缩至 <1 mL 后，用水定容至 1 mL 。10. 过滤（ PVDF ， 0.45 m）至进样小瓶，待用。 ? 牛奶 21. 称 10 g 牛奶至一个干净的 50毫升试管。2. 加入 10 mL 乙腈和 10 L内标溶液（ 100 g/mL），剧烈震摇 1分钟。3. 添加 QuEChERS 预处理填料 Q110 Packets3 （P/N 26213, Restek， 剧烈震摇 1 分钟。 4. 5000转

15、离心 5 min 。5. 1mL上清液转移到 2 mL 试管，加入 150 mg 硫酸镁和 50 mg C18（特殊定制， Restek ），剧烈震摇 1分钟。 6. 5000转，离心 5 min7. 将500 L上清转移到一个干净的 1.5 mL 离心管， 40下进行氮吹至微干，50 L 甲醇复溶，涡旋，离心； 8. 再用 450 L 蒸馏水进行稀释复溶；9. 过滤（ PVDF ，0.45 m）至进样小瓶，待用 ? 蜂蜜 21. 称取蜂蜜 5 克和水 5克到一个干净的 50 毫升试管里，拌匀。2. 可选步骤：添加 200 L 5N 氢氧化钠（ NaOH ）用来调节 pH ，后拌匀。 注：这一

16、步将减少基体效应，并改善一些化合物的回收率（例如，氯唑西林，青霉 素 G ，沙拉沙星等碱性抗生素），然而，一些其他化合物的回收率显著降低（头 孢噻呋，单诺沙星，二氟沙星，恩诺沙星，奥比沙星等酸性抗生素，并依此类 推）。3. 加入 10 mL 的乙腈和 10 L内标溶液（ 100 g/mL），剧烈震摇 1 min 。4. 添加 QuEChERS 预前处理填料 Q110 Packets （P/N 26213, Restek， 剧烈震摇 1分钟。 5. 5000转，离心 5 min 。6. 1 mL 上清液转移到 2 mL 试管，加入 150 mg 硫酸镁和 50 mg C18（特殊定 制， Res

17、tek ，剧烈震摇 1分钟。 7. 5000转，离心 5 min 。8. 将500 L上清转移到一个干净的 1.5 mL 离心管， 40下进行氮吹至微干，50 L 甲醇复溶，涡旋，简单离心；9. 再用 450 L蒸馏水进行稀释复溶；10. 过滤（ PVDF ，0.45 m）至进样小瓶，待用；四、色谱分离条件流动相：A ：含 0.1%甲酸的水（ V/V ）溶液； B：含 0.1%甲酸的乙腈（ V/V） 溶液色谱柱： Phenomenex分 析柱， 3 m 110 ?, Gemini C18 Column, 50 2 ×mm （ P/N 00B-4439-B0）Phenomenex保 护

18、柱， C18 4 ×2 mm （P/N AJ0-4286）含保护柱柱套（ P/N KJ0- 4282） Shimadzu Prominence系统： CBM-20A 系统控制器LC-20AD X 泵（带有 100 L 半微量混合器） DGU-20A3 在线脱气机 SIL- 20AC 自动进样器CTO-20AC 柱温箱流动相梯度条件 :步骤分析时间（ min ）Module Event %B10Pumps Pump B Conc.220.30Pumps Pump BConc.237.27Pumps Pump B Conc.8047.37Pumps Pump B Conc.99510.9

19、Pumps Pump B Conc.99611Pumps Pump B Conc.2715.00Pumps Pump B Conc.2815.01ControllerStop流速: 0.5 mL/min 柱温: 40 进样体积: 10 L洗针模式 : Before and after aspiration（ 甲醇作为洗针液） Rinse dip time（洗针 时间） : 3 s 注：洗针可有效减少样品残留；五、质谱检测质谱系统为 AB SCIEX 4000 QTRAP? 系统， TurboIon Spray? 离子源 正离子分 析模式 源/气体参数动物源性食品中近百种常见抗生素的筛查和谱库检

20、索确证CUR: 25 psi IS: 5500 V TEM: 600 GS1: 60 psi GS2: 60 psi Ihe: On CAD: highScheduled MRM? 设置方法： MRM 检测窗口时间： 120 s 目标扫描时间： 0.5 s Q1 单位分辨 Q3 单位分辨化合物 MRM 参数和保留时间分析物Q1 (m/z Q3 (m/z 保留时间( min )2-mercaptobenzimidazole 151.2 93 3.12Albendazole266.1 234.1 5.30Albendazole Amino Sulfone 240.1 133.1 1.83Alben

21、dazole Sulfone298.1 266.2 4.54Albendazole Sulfoxide 282.1 208.1 4.17Amoxicillin 366.1 349.1 1.00Bacitracin 712 669.6 4.64Carbadox 263.1 231.1 3.93Ceftiofur524 241.2 5.54Chlorotetracycline 479.3 444 3.45Cipro?oxacin 332.2 314.2 2.79Clindamycin 425.4 126.1 3.85Dano?oxacin 358.2 340.2 2.93Decoquinate41

22、8.3 344.4 8.47Desethylene Cipro?oxacin 306.2 288.1 2.61Di?oxacin 400.2 356.3 3.01Dimetridazole 142.1 96.1 1.89Doxycycline 445.2 428.3 3.99Enoxacin 321.2 303.2 2.66Enro?oxacin 360.3 342.2 2.92Erythomycin 734.6 158.2 4.80Fenbendazole 300.1268.1 6.32Fenbendazole Sulfone 332.1 300.2 5.28Fenbendazole Sul

23、foxide316.1159.24.97Florfenicol Amine 248.1 230.2 0.33Flumequine 262.1 202.1 5.51Ibuprofen 207.1161.2 7.47Indomethacin 358.1 139.1 7.47Ipronidazole-OH 186.1 168.1 3.30Josamycin 828.7 109.1 5.38Ketoprofen 255.1 209.2 6.41Lasalocid 613.4 377.5 8.79Lincomycin 407.4 126.1 1.84Lome?oxacin 352.2 265.2 2.9

24、1Mebendazole 296.1 264.1 5.70Metronidazole 172.1 128.1 1.75Minocycline 458.2 441.3 2.10Monensin 693.4 675.7 8.51Narasin 787.5 531.6 8.61Nor?oxacin 320.2 276.2 2.69Novobiocin 613.2 189.2 8.30O?oxacin 362.2 318.2 2.62Orbi?oxacin 396.2 352.3 2.99Oxolinic acid 262.1 244 4.75Oxyphenbutazone 325.2 204.2 6

25、.24Oxytetracycline 461.2 426.1 2.85Phenylbutazone309.2 160.2 7.08Ractopamine 302.2 107 2.59Ronidazole 201.1 140.1 2.01Sara?oxacin386.3 368.1 3.08Spiramycin 422.5 174.1 3.39Sulfacetamide 215.1 156.1 1.69Sulfachloropyridazine 285 156.1 3.45Sulfadiazine 251.1 156 2.20Sulfadimethoxine311.1 156.2 4.51Sul

26、fadoxine 311.2 156.2 3.76Sulfaguanidine 215 156.1 0.59Sulfamerazine 265.1 92.2 2.71Sulfamethazine 279.2 92.1 3.14Sulfamethizole271.2156.13.16动物源性食品中近百种常见抗生素的筛查和谱库检索确证Sulfamethoxazole 254.1 156.1 3.54Sulfamethoxypyridazine 281.1 155.9 3.29Sulfanilamide 173.1 92.1 0.66Sulfapyridine 250.1 156.1 2.51Sulfaquinoloxaline301.1 156.1 4.71Sulfasalazine 399.3 381.3 7.68Sulfathiazole 256.1 156.1 2.45Sul?soxazole 268.1 156.1 3.79T etracycline 445.2 410.1 2.72T etramisole 205.2178.2 1.01Thiabendazole