第七章抗体酶

1、第七章第七章 抗体酶抗体酶抗体是和抗原结合的物质。抗体是和抗原结合的物质。抗体与靶分子精确匹配。抗体与靶分子精确匹配。产生高度特异性和亲和性。产生高度特异性和亲和性。免疫系统可以产生免疫系统可以产生1081010个不同的抗体分个不同的抗体分子（多样性子（多样性 ） 抗体结构抗体结构 抗体分子是由抗体分子是由两条轻链两条轻链( l链链)和和两条重链两条重链(h链链)通过链间二通过链间二硫键连接而成硫键连接而成的四肽链结构。的四肽链结构。能否利用抗体的这些特性将抗体能否利用抗体的这些特性将抗体开发成象酶那样的催化剂呢？开发成象酶那样的催化剂呢？1969年，年， jentcks根据根据panling

2、的化学反应过渡的化学反应过渡态理论预言，用过渡态类似物，作为半抗原，态理论预言，用过渡态类似物，作为半抗原，产生的抗体，产生的抗体，该抗体该抗体具有酶催化反应的具有酶催化反应的基本特基本特征。征。1986年年science同时发表了两篇来自由同时发表了两篇来自由lemer和和schultz分别领导的两个研究组的发现分别领导的两个研究组的发现具有具有酶催化能力的抗体酶催化能力的抗体研究报告，揭开研究抗研究报告，揭开研究抗体酶的体酶的热潮热潮。取得的成果：取得的成果：天然酶所催化的天然酶所催化的6种种酶促反应酶促反应数十种类型数十种类型的常规反应的抗体酶。包括酯、的常规反应的抗体酶。包括酯、羧酸和

3、酰胺键的水解，酰胺形成，光诱导裂羧酸和酰胺键的水解，酰胺形成，光诱导裂解和聚合，酯交换，等等。解和聚合，酯交换，等等。 抗体酶（抗体酶（abzyme）：是抗体的高度选择性和酶）：是抗体的高度选择性和酶的高效催化能力巧妙结合的产物，本质上是一的高效催化能力巧妙结合的产物，本质上是一类具有催化活力的免疫球蛋白，在其可变区赋类具有催化活力的免疫球蛋白，在其可变区赋予了酶的属性，也叫催化抗体予了酶的属性，也叫催化抗体。 特点：特点：1、反应、反应专一性专一性相当于或超过自然酶反应的专一相当于或超过自然酶反应的专一性，性，2、催化速度有的可达到自然酶催化的水平。但、催化速度有的可达到自然酶催化的水平。但

4、一般来说比非催化反应快一般来说比非催化反应快 102106倍，比天然倍，比天然酶催化反应酶催化反应速度慢速度慢，仅为它的，仅为它的 10-4-10-2。革命尚未成功，同志仍需努力。革命尚未成功，同志仍需努力。 二、抗体酶的制备方法二、抗体酶的制备方法 1. 诱导法诱导法 l 以以pauling的稳定过渡态理论为指导，的稳定过渡态理论为指导，即酶的催化在于能结合底物产生过渡态，降即酶的催化在于能结合底物产生过渡态，降低能障（反应的活化能）。低能障（反应的活化能）。l 以过渡态类似物作为半抗原，诱导与其以过渡态类似物作为半抗原，诱导与其互补构象的抗体，使其具有催化活性，可观互补构象的抗体，使其具有

5、催化活性，可观察到抗体催化相应底物发生化学反应。察到抗体催化相应底物发生化学反应。 用设计好的半抗原，通过间隔链与载用设计好的半抗原，通过间隔链与载体蛋白（如牛血清白蛋白）偶联制成抗原。体蛋白（如牛血清白蛋白）偶联制成抗原。然后对动物进行然后对动物进行免疫免疫，取免疫动物的脾细，取免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞杂交，杂交细胞则分泌单胞与骨髓瘤细胞杂交，杂交细胞则分泌单克隆抗体，经筛选和纯化，得抗体酶。克隆抗体，经筛选和纯化，得抗体酶。例例 1： schultz研究小组以研究小组以羧酸二酯水解反应羧酸二酯水解反应的的过渡态类似物过渡态类似物对硝基苯磷酰胆碱对硝基苯磷酰胆碱作为半抗原，诱作为半抗原，

6、诱导产生单克隆抗体，经过筛选找到一株导产生单克隆抗体，经过筛选找到一株mopc167。使水解反应速度加快使水解反应速度加快 12 000倍。倍。 例例2： napper等用一个环化的磷酸酯作为过渡态类似物，得到等用一个环化的磷酸酯作为过渡态类似物，得到单克隆抗体单克隆抗体24b111、可催化外消旋的羟基羧酸酯分子内环化形成内酯；可催化外消旋的羟基羧酸酯分子内环化形成内酯；2、加速反应、加速反应167倍；倍；3、产物中一种、产物中一种对映体对映体的含量比另一种高出的含量比另一种高出94。 这类抗体可用于含有酸或醇功能基的这类抗体可用于含有酸或醇功能基的合成中间物的手性拆分合成中间物的手性拆分，有

7、重要的有重要的商业价值商业价值。 2.抗体与半抗原互补法抗体与半抗原互补法 抗体抗体与其与其配体配体的相互作用是的相互作用是相当精确相当精确的。的。抗体常含有与配体功能抗体常含有与配体功能互补的特殊功能基互补的特殊功能基。在。在开发诱导抗体酶的产生时，一个重要的目标是开发诱导抗体酶的产生时，一个重要的目标是产生产生的抗体结合部位的的抗体结合部位的催化基团催化基团和半抗原的结和半抗原的结合直接相关。合直接相关。 例：例：shokat等利用等利用抗体与半抗原之抗体与半抗原之间的电荷互补性间的电荷互补性制备了针对制备了针对带正带正电半抗原电半抗原的抗体的抗体 3.多底物类似物法多底物类似物法 很多酶

8、的催化作用要有辅因子参与，很多酶的催化作用要有辅因子参与，辅因子包括金属离子、血红素、硫胺素辅因子包括金属离子、血红素、硫胺素等。等。 因此，将辅因子引入抗体结合部位将因此，将辅因子引入抗体结合部位将会扩大抗体催化作用的范围。会扩大抗体催化作用的范围。 用多底物类似物对动物进行一次免疫，用多底物类似物对动物进行一次免疫，可产生可产生既有辅因子结合部位既有辅因子结合部位，又，又有底物有底物结合部位的抗体结合部位的抗体。 4. 抗体结合部位修饰法抗体结合部位修饰法 在抗体的抗原结合部位引入催化基团。在抗体的抗原结合部位引入催化基团。 方法有两种：方法有两种：（1 1）选择性化学修饰法）选择性化学修

9、饰法（2 2）基因工程定点突变法）基因工程定点突变法 亲和标记（修饰法的重要一种技术）亲和标记（修饰法的重要一种技术） 1、可裂解亲和试剂与抗体作用；、可裂解亲和试剂与抗体作用； 2、用二硫苏糖醇（、用二硫苏糖醇（dtt）处理，则在抗体结合部位附处理，则在抗体结合部位附近引入巯基；近引入巯基； 3、用此巯基作为锚引入其他化学功能基（如咪唑）。、用此巯基作为锚引入其他化学功能基（如咪唑）。 l例：使用可裂解亲和标记物将含巯基的柄例：使用可裂解亲和标记物将含巯基的柄状亲核基团引入到抗状亲核基团引入到抗2，4-二硝基苯酚二硝基苯酚（dnp）的单抗的抗原结合位点，得到的的单抗的抗原结合位点，得到的抗体

10、酶对含有抗体酶对含有(dnp)与香豆素的羧酸酯的水与香豆素的羧酸酯的水解反应的催化效率比二硫苏糖醇高解反应的催化效率比二硫苏糖醇高104倍。倍。基因工程定点突变法基因工程定点突变法 通过基因工程，精确地将通过基因工程，精确地将催化基团催化基团引引入到入到抗体的结合部位抗体的结合部位上。上。例：例：schultz小组用此法将催化基团小组用此法将催化基团组氨酸组氨酸插入到对二硝基苯专一的插入到对二硝基苯专一的抗体抗体（mopc315）的结合部位的结合部位。合成了。合成了vl片片断的基因，其中抗体结合部位的断的基因，其中抗体结合部位的tyr34被被组氨酸组氨酸取代取代,然后用大肠杆菌表达重组的然后用

11、大肠杆菌表达重组的vl,再将再将vl链与天然的链与天然的vh链组合在一起，链组合在一起，则得到具有则得到具有显著酯解活力的抗体酶显著酯解活力的抗体酶。 5. 抗体库法抗体库法 即用即用基因克隆技术基因克隆技术将将全套抗体重链和轻全套抗体重链和轻链可变区基因链可变区基因克隆出来克隆出来,重组到原核表达重组到原核表达载体载体，通过，通过大肠杆菌大肠杆菌直接直接表达表达有功能的有功能的抗体分子片断抗体分子片断，从中，从中筛选筛选特异性的可变特异性的可变区基因。区基因。 三、抗体酶的应用三、抗体酶的应用 在抗体酶被发现的在抗体酶被发现的13年以后，他们才年以后，他们才开始进入商业领域。目前已有一些公司

12、，开始进入商业领域。目前已有一些公司，比如：美国的比如：美国的med-immune 和和prolifaron 公司以及以色列的公司以及以色列的advanced biotech ltd. 致力于抗体酶的商业应用，并且取得了致力于抗体酶的商业应用，并且取得了一些业绩。一些业绩。1.1.抗体酶在有机合成中的应用抗体酶在有机合成中的应用 抗体的多样性抗体的多样性，专一性标志着抗体酶的，专一性标志着抗体酶的应用潜力巨大。精细化工产品和合成材应用潜力巨大。精细化工产品和合成材料需要精确料需要精确底物专一性底物专一性和和立体专一性立体专一性的的催化剂，而这正是催化抗体的突出特点。催化剂，而这正是催化抗体的突

13、出特点。天然酶不能催化的反应，可通过设计定天然酶不能催化的反应，可通过设计定做做抗体酶来弥补天然酶抗体酶来弥补天然酶的不足。的不足。 2. 用于阐明化学反应机制用于阐明化学反应机制3. 抗体在医疗上的应用抗体在医疗上的应用 抗体酶既具有抗体功能，又能执行一定抗体酶既具有抗体功能，又能执行一定的催化功能。的催化功能。例如，用抗体酶活化处于靶部位的药物例如，用抗体酶活化处于靶部位的药物前体，以降低药物毒性，增加其在体内前体，以降低药物毒性，增加其在体内的稳定性。的稳定性。 例如：例如： 戒毒戒毒 用可卡因水解的用可卡因水解的过渡态类似物过渡态类似物-磷酸单酯为磷酸单酯为半抗原，产生的单克隆抗体能催

14、化可卡因的分解，半抗原，产生的单克隆抗体能催化可卡因的分解，水解后的可卡因片断失去可卡因刺激功能。水解后的可卡因片断失去可卡因刺激功能。四、抗体酶研究进展四、抗体酶研究进展 主要进展表现在如下主要进展表现在如下3 3个方面：个方面：（1 1）半抗原设计方法有创新；）半抗原设计方法有创新；（2 2）抗体催化的化学转化范围有所扩大；）抗体催化的化学转化范围有所扩大；（3 3）又有一些催化抗体的结构得到表征。）又有一些催化抗体的结构得到表征。 1.反应性免疫反应性免疫 利用反应性半抗原迸行的，这种半抗原可在生利用反应性半抗原迸行的，这种半抗原可在生理理ph下释放出传统的过渡态类似物，或者在下释放出传统的过渡态类