岛津分子荧光光谱仪RF-5301PC氙灯安装及性能测试(整理的说明书)

1、岛津分子荧光光谱仪 RF-5301PC氙灯安装和性能测试岛津分子荧光光谱仪 RF-5301PC氙灯安装和性能测试S/N，波长准确度测试，及荧光谱仪的另一个目的也是自己以后维护便于摘要：介绍了岛津分子荧光谱仪RF-5301PC的氙灯安装和仪器的灵敏度,结构和一些主要构件。面向的对象：主要是化验人员的仪器维护和初次接触荧光光谱仪的工程人员。 查看。这个仪器接触不多，也希望其他朋友帮助指正。目录:一些安全问题1 楼仪器的一个不能和计算机通信的问题解决 1 楼RF-5301的通信设置 2楼灯的安装及位置的校准 3楼仪器灵敏度的调整（增益调整） 4 楼仪器性能测试（S/N的测试）5 楼校准波长准确度6楼

2、分子荧光光谱仪介绍7楼参考文献:Principles ofFluorescence Spectroscopyrx丄itt:荧尢分析法Spectrofluorophotometer RF-5301 PC Series INSTRUCTION MANUAL【3】图片后面的【X】表示引用的文献。仪器专场展示：分子荧光光谱圆二色光谱 拉曼光谱关键词：岛津安装氙灯性能测试PC一、一些安全问题1. RF-5301的氙灯保证flicker 500小时。说明书中是说，当使用时间超过1000小时时，可能会爆炸(burst)。2由于氙灯内有高压气体，如果氙灯被硬物撞击存在爆裂的危险，所以安装氙灯时，要带上安全眼镜

3、，手套，长袖子衣服。3安装氙灯时，必须关掉电源，拔掉电源线。因为关机后，氙灯电极上仍然存有充电电压，所以，关掉电源后，要等5分钟或更长，才能换灯，不然有触电危险。4氙灯工作时温度非常高。关机后，必须等 1个小时才能更换。5氙灯启动时有3KV高压加在氙灯的电极上，所以，开机前，保证盖子盖好。6氙灯工作时，灯光很强，其射线会损伤视网膜，紫外线会损伤眼角膜，所以，应该避免直视光源。7手印问题CAUTION |While instalfing the lamp, do not touch the bulb with bare fingers. If any fmgerprints remain on

4、the bulb, remove them with gauze moistened with ethyl alcohol or the special cleaning agent supplied with the lamp. Finger oil remaining on the bulb can becorne baked onto the bulb when the lamp is Nt, possibly causing the lamp to burst,二。仪器的一个不能和计算机通信的问题解决 先说说仪器 RF5301的保险丝位置。图1(【3】)灯优置调樹L和安装孔图2（【3】

5、）L .1_KELUP；有两4保率，估计是仪; I时丁的仪器保险丝的位置:1仪器后盖处的保险丝。这里有两个。这两个保险丝电子市场一般买不到，但是只要粗细和长短一致，电气参数一致即可。 如下图：2. 仪器内部：打开盖子，在一个竖着的板子上有一个保险丝。普通类型。 另外主板上有一排，大概五六个。为了更换主板上的保险丝，必须拿出主板。说说主板的拆出问题。图4( 31 )图中两个红色圈圈圈住得螺丝钉，拧开，可以拔出主电路板（拔出前，一定要打开仪器盖子，拔掉连接主板的一 个排线，并保证没有其他的接插线在拔出主板时，会被拉坏。）主电路板上有一排保险丝。在一些故障时，可以先看看这些保险丝的通断。三、RF-5

6、301的通信设置:1打开仪器电源，打开计算机。2点击计算机上的工作站软件RFPC，在主菜单里，点击Con figrue。口问冈51 figureFile Acquffe Mode Configure ManiciLlaite Presertation yelpipulate Presentation HelpParameters.Ctrl+PPopup 5can(TM) Parameters. * PC Configuration.SpeedBox(R) Configuration-Instrume nt AttachmentsSave Parameters.图5( L31 )Load Par

7、ameters.点击"PC Configuration",弹出PC Configuration ParametersData DirectoryDRFPQdataExp on Dire ctaryDiVRFPC 肩 dOKCancel图6（ C3）3. 设置使用的串口，点击OK。仪器就会开始跟计算机建立通信。如果没有，可以点击菜单 "Configure-lnstrument",弹出，Fluorometer选择On ,仪器开始和计算机建立通信。Instrument ParametersFluorometerr*li | ihFOff-HV Control:

8、OnOffEMT Protect：On广OffAuto Shutter；OnrOffDark Level Correction：PerformS/N Ratio Check:PertormLamp Align：PerformInstrument Serial Number：A40193700967SAInslrument ROM Version:2,1Linp Time Used:1QKFig. 7 24 irtstrument Parafreiers dia：O9 box 图 7（31 ）当通信建立后，仪器显示自检画面，并设置仪器参数。Initializationinstrument RF5

9、3D1Serial Number A40193700967SAROM Version: 2 J ROMO RAMO EEPROM Excttution Shi Emission SlitO Excitaiion MonochromatorEmission MonochromatarO BaselineTesting O PassedFailed图8( 3l )仪器初始化完成后，可以点击菜单"Configure-Parameters"或者用快捷键"Ctrl+P" >仪器初始化完成后，可以点击菜单"Configure-Parameters&q

10、uot;或者用快捷键"Ctrl+P"，弹出图g( 3)输入文件名，点击"Save"，通信参数保存为缺省文件。四、灯的安装及位置的校准：1. 拧松图中两个螺钉，打开灯室。0图 11( (313.用仪器自带的工具，插入下图中孔的靠下位置，逆时针转动，拧松氙灯紧固螺钉。调节灯水平位置图 53 C 3)2拧松下图螺钉，移动可移动板。训节灯垂直位置4.从包装盒中取出氙灯，去掉在正负极上的防护件。图10（）f 1|MOM9OMT< MUVERTKAl AtULAMP CM M*可卷动盖子松动/紧固氤灯安装时用）Xenon lamp图12(4. 使负极上的黑色或

11、者红色标记朝向灯紧固螺钉方向。把氙灯插入光室。Direction of lamp fixing图 13( L31 )screw5. 用工具插入下图位置，顺时针方向紧固氙灯。图14（【3】）6. 关上可移动盖子，拧紧螺钉。把氙灯正极接上正电极线，并用螺钉紧固 （只允许用手拧，用工具可能损坏氙灯）Knurled screv;Cord terminal for the positive electrode灯位置粗调：图15（【3】）（仪器预先预热30分钟）1. 打开工作站 RFPC，右下角的"Go To WL"图16( 3)2. 设置激发波长（Ex Wavelength）为 50

12、0nm。Wavelength SelectionEX WavelengthEM Wavelength500±1±1±|35D.QJ 21 |Intensity： 10.191ReadSetCancel图 31 )3. 打开样品室，在样品室中放一个白纸，应该可以看到一个绿色光斑。018( 3)4. 用工具调整灯的水平位置，使绿色光斑最亮。 （一定要先调整灯的水平位置！）水平位置垂直位置图19( (3)5. 调整灯的垂直位置，使绿色光斑最亮。6.这样灯位置的大概位置就调好了。灯位置的精细调整：1. 拿掉白纸，样品室中放入盛有蒸馏水的比色皿，盖上盖子。2. 点击菜单”

13、Configure-lnstrument “,弹出Instrument Parametersrg. 7.24 Instrument Parameiers dia og box图班C31 )点击"Lamp Align"的"Perform"，弹出Ldm AUgnmcnt图 21（ 31 ）（注：灯使用时间的复位也在这里）然后，a用工具调整灯的水平位置，使上图中的数值最大b用工具调整灯的垂直位置，使上图中的数值最大 这样灯的位置就完全调好了。如果是新安装的灯，可以按一下上图中的Reset键，这样灯的使用时间就可以从零开始记录。五、仪器灵敏度的调整（增益调整）：

14、先看看 几个相关的调节钮的位置。如下图VROVR1VR2OOVRO:增益调整。用户可以做。VR1:厂家设置。不建议用户自己动。这个是当负高压控制关闭时，用来调整检测灵敏度。VR2 :厂家设置。不建议用户自己动。这个是当灯补偿（”灯补偿“，我在整个说明书里都没见提到怎么设置。lamp compe nsation）开启时，用来调整检测灵敏度。可以看到的一个4, Lighbsource compensatton systemMoriochromatic Light monitoring dynode feedback system图23（【3】）增益调整:1点击菜单"Acquire Mod

15、e ” - “Spectrum"，如下图RF 5301PCAcquire Mode图24( 31 )Quantitative7 Time Course2弹出，并设置参数如下图:图25（【3】）3.点击菜单” Configure” - “Instrument “，弹出并设置参数如下图:Intrunient Parametersfluorometer： OiVOff*HV Control：On广owPMT Protect：On广OffAuto Shutter:On广OftDark Level Correction:PerformS/N Ratio Check:PerformLamp Al

16、ign：PertorniInstrument Serial Number:A40193700967SAInstrument ROM Version；2.1Lamp Time Used：1QKFig. 7 24 Irstrtjment Parameters dim og box 图7（【3】）4点击工作站右下角的” >4点击工作站右下角的"Go To WL"图16（【3】）5.弹出对话框如下图，设置EM Wavelength为450nm。Wavelength SelectionEX WavelengthEM Wavelength50D±1_1 2141 jj5

17、01 2JIntensity： 10*191ReadSetCancel6点击” Set “关闭对话框。7点击图16中的” Auto Zero “-” Start “。得出的光谱图如下图图 2M 3)8在谱图上，点击鼠标右键，选择”Cross hair “,会弹出一个子菜单，如下图，选择显示，在谱图上，会出现一个十字光标，用这个光标可以获得蒸馏水拉曼峰的 峰值波长（大概397nm）和峰值强度。CopyCross Hair Fonts* * Limits Line Colors,( *Options.Radar图28( 3)当峰值强度的值在 10± 2时，可以不用调整 VR0.当峰值强度

18、不在这个范围时，调整VR0。然后再重复上面灵敏度测试的方法。六、仪器性能测试(S/N的测试)当安装了新灯后，要进行仪器性能测试。1. 仪器预热30分钟。2. 点击菜单"Configure-lnstruement",弹出Irrshument ParametersFluoramefer:*广Off-HV Control：a OnconPMT ftoled: OnfOffAuto Shufler： OncOftDark Level Correction:PerformS/N Ratio Check:PerformLamp Align：PerformInstrument Seria

19、l Number：A40193700967SAInstrument ROM Version:2JLamp Thne Used：tQKFig. 7.24 Instrument Parameters dialog box 圏T（【3】）3在对话框中，点击” >3在对话框中，点击"S/N Ratio Check"的"Perform",弹出下图:5/N Ml和 CheckFabian Spectrutn20.00010.OQ00.0001.0C0PrintSpc Gra()h0*000-ioao1 >00Exit300.00T line (sec)G

20、OO.DOInstrument Serial Number：A40193700967SAPeak Height:S/N Ratio：图29( K31 )4.按提示，在样品室中放入盛蒸馏水的比色皿后，点击OK。仪器会测量蒸馏水的拉曼峰高，并显示出来。这个峰值会测量10分钟，考虑到峰值的稳定性。基于拉曼峰，仪器噪声会被估算。然后计算出S/N ratio。如下图S/N fUlio Check图30（【3】）规定，S/N ratio应该大于150。VR0.假如上图中的Peak Height不在10±2的范围内，要按上面的调整灵敏度的放大调整 S/N ratio<150，用户可以看看，灯

21、有没安装好，灯寿命是否到了，或者蒸馏水问题。七、校准波长准确度（遗憾的是说明书上没有修正波长误差的方法）校准发射单色器：利用荧光灯的汞发射谱线（435.8nm） 操作：1打开仪器样品室盖，使荧光灯照射样品室，拿掉样品室中的比色皿。2.点击：” Acquire Mode-Spectrum “Acquire ModeConfigSpectrumQuantitative 7 Time Course点击” Configure-Instrument “，弹出 "HV Control"和"PMT Protect"选择 ” off图 31( 31 )3. 点击&quo

22、t;Configure-parameters" >4.点击"Configure-parameters" >4.点击"Configure-parameters",弹出对话框，并设置为如下:5.点击工作站右下角的5.点击工作站右下角的5.点击工作站右下角的图32（【3】）"Start" >"Start" >"Start"。完成扫描后，会显示出谱图ERF-5JO1PCTffeixl15d 斫010579400.052 565fis Acquire Mode C-Drt

23、figure jMnipulace gresent-abon 岀毎450 0 Wavelength (iw)wXGoh WLoh.09JSlhuttj&r1蚀XeLarrp ONEXr0 EUMJOJ033 (【3】)435.8土 1.5 nm。如果峰的强度过高,6利用工作站的寻峰功能(Peak Pink),找到峰值对应的波长。合格范围是: 可以调节在灵敏度调节里提到的VR1。校准激发单色器: 粗测：用蒸馏水；精确测量：用汞灯。使用蒸馏水校准的方法。操作：1. 将盛有蒸馏水的比色皿放入样品室，盖上盖子。2. 点击” Configure-lnstrument “，弹出"HV C

24、ontrol"和"PMT Protect"选择 ” On “fnstrunient ParametersFluorometer：OnrOft-HV Control:金OnOffPMT Protect:OnOffAuto ShutterOn广OffDark Level Correction:PerformS/N Ratio Check:Performl amp Align：Performinstrument Serial Number:A40193700967SAInstrument ROM Version：Lamp Time Used:3.点击"Conf

25、igure-parameters",弹出对话框,F1Spectrum ParameterESpeclrum Type:* ExcHatian广 EmissioncSynchronousEM Wavelength：435n mEX Wavelength Range:StartEndRecording Range:Low0.000High1000.00Scanning Speed：MediuimZJSampling interval (nm)：D.2Slit Width fnm)：EX二EM3创Sensilivlty：* HighcLowResponse Time sec:AutoQep

26、eat Scan.uto F血(3KCancel图35（【3】:设置上图中的” EM Wavelength “值为上面发射单色器校准时测量的值。4点击工作站右下角的"Start"。完成扫描后，会显示出谱图圏36（【3】）5利用工作站得寻峰功能来找到峰值对应的波长。这个波长和设置的”EM Wavelength “应该相差不多。八、分子荧光光谱仪介绍RF-5301PC 光路:一®光栅（发射侧）光电倍增管/入射狭缝人射狭缝狭缝组炉狭缝组16J焦平面気灯准直績（18） 物镜5）光栅激发侧）反光績迤光电倍增管光能量平衡孔038（【2】）比色皿/ 9片透镜叫光QQ（二）荧光光谱仪的一些组件1氙灯2(K)60(1)00014001800波长/nm短弧高压眾灯的光谱能品分布 图旳(【2】)报废的氙灯应裹上厚纸，并把石英壳敲碎，以免留下后患。图40(【2】)图42（【2】）荧光分光光度计示意图-nv图41（【2】）YF-I盘位器检側器电说理图3.荧光光谱仪光电倍增管o光度表电源光源秧缝狭缝 发射单色器I狭縫狭縫光阱图42（【2】）荧光分光光度计示意图650-10型荧光分光光度计的方块图图43(【2】)狭缝-(b)样品室的光学排列(a) 一般荧光分光光度计:(b)日立650-10型荧光分光光度计图44(【2】)几种样品与光路的几何排列图45(【2】)凹面镜E