000001bd徐露-地的应用药理2

1、EGB制剂、阿司匹林与波立维抗血小板聚集作用比拟与对PAF含量影响徐露董志王如伟黄黎某某医科大学药学院某某市生化与分子药理重点实验室400016【摘要】目的 观察EGB银杏叶提取物制剂、阿司匹林与波立维对家兔血小板聚集率与PAF含量的影响。方法 采用体内实验，观察 EGB制剂、阿司匹林与波立维对由花生四烯酸AA、二磷酸腺苷ADP和血小板活化因子PAF诱导的家兔血小板聚集作用的影响，以与对给药前后家兔血小板活化因子PAF含量的影响。结果 与生理盐水组相比，EGB制剂抑制AA ADP PAF诱导的家兔血小板聚集有显著差异p<0.05，p<0.01，并能够降低血清中PAF的含量p<

2、0.05；阿司匹林对 AA诱导的血小板聚集有显著差异p<0.01；波立维对ADP诱导的血小板聚集有显著差异p<0.01；而阿司匹林和波立维对 PAF的含量没有显著影响p>0.05。结论EGB制剂具有抗血小板聚集作用，抗PAF诱导的血小板聚集作用最强，并能显著降低PAF含量，是一种新的作用途径的药物，为临床抗血小板聚集的用药提供了新的选择。EGB银杏叶提取物制剂是由银杏叶提取得到的，它的活性成分主要是黄酮和银杏内酯， 具有抗炎和保护神经作用。阿司匹林和波立维是临床常用的抗凝药物。本实验将比拟这三种药物抗血小板聚集的途径与靶点特异性。1.材料与方法± 0.2kg，雌雄各

3、半，由某某医科大学实验动物中心提供；EGB制剂天保宁片，某某康恩贝制药股份某某生产、阿司匹林拜耳药业、波立维赛诺菲-安万特；AA sigma使 用时将其溶解在1%碳酸钠溶液中，配成 0. 35mmol/L的浓度；ADP sigma溶于磷酸盐缓 冲液，最终浓度为300卩mol/L ； PAF cayman溶解在 PH为7.6的含0.25%小牛血清蛋白的 Tris-NaCI溶液中，终浓度为 3.6nmol/L ;枸橼酸钠中杉金桥生物技术公司蒸馏水配成 3.8%的浓度；TYXN-96多功能智能血液凝聚仪某某通用技术研究所研制；兔血小板活化因子（PAF）ELISA试剂盒Uslife；酶标仪spectr

4、a maxm2多功能酶标仪。日本大耳白兔 28只，随机分为4组，每组7只：生理盐水组、EGB制剂组、阿司匹林组、波立维组。以上各组剂量均根据文献1由人体剂量换算为家兔等效剂量，ig给药，生理盐水组、EGB制剂组每日三次，阿司匹林和波立维组每日给药一次，连续7d。每只动物首次给药前，耳缘静脉抽血 1ml，室温放置2h取血清，检测给药前 PAF含量。在 第7d给药后1h,心脏取血7ml，分出1ml用于检测给药后 PAF的含量，剩余6ml用3.8%枸橼酸钠1: 9抗凝，800r/min离心10min，取上清得富血小板血浆 PRP，剩余局部3000r/min速度离心15min ,取贫血小板血浆PPP)

5、。用PPP调节PRP使PRP血小板数目在 360x 109/L。 测定并记录在不同诱导剂下1min、5min与最大血小板聚集率。血小板聚集率=对照组血小板聚集率-给药组血小板聚集率/对照组血小板聚集率x100血小板聚集率检测用生理盐水组与给药组比拟，采用成组t检验；PAF含量检测采用给药前后自身对照，用配对 t检验。检测结果明确，和对照组相比，EGB制剂能抑制AAADRPAF诱导的家兔血小板聚集(p<0.05, p<0.01)，并且对PAF诱导的血小板聚集抑制作用最强(38.93%);和对照组相比，阿司匹林对AA诱导的血小板聚集有显著差异p<0.01；波立维对ADP诱导的血小

6、板聚集有显著差异p<0.01。见表 1-3表一 AA诱导的血小板聚集作用X ± s,n=7)组别给药齐U量mg/kg给药次数次 /d给药后聚集率%血小板聚集抑制率(%)1min5minMax生理盐水组等容积3+士EGB制剂天保宁3+士 6.53*士 7.13*阿司匹林1+士 5.88*士 6.02*波立维1+士士表二ADP诱导的血小板聚集作用X 土 s,n=7)组别给药齐U量mg/kg给药次数次 /d给药后聚集率%血小板聚集抑制率(%)1min5minMax生理盐水组等容积3+士EGB制剂天保宁3+± 5.76*士 6.91*阿司匹林1+士波立维1+士 6.23*士

7、6.76*表三PAF诱导的血小板聚集作用X ± s,n=7)组别给药齐U量mg/kg给药次数次 /d给药后聚集率%血小板聚集抑制率(%)1min5minMax生理盐水组等容积3士士士EGB制剂天保宁3士 4.53*士 5.36*士 5.67*阿司匹林1士 5.61*士士波立维1士 5.45*士士检测结果明确，与给药前相比，EGB制剂能降低家兔血清中的PAF含量p<0.05；而阿司匹林和波立维给药前后PAF含量无显著差异p>0.05。见表4表四PAF含量检测结果X ± s,n=7)组别PAF含量ng/ml给药前给药后生理盐水组士士EGB制剂天保宁士士 1.04*阿

8、司匹林士士波立维±±3.讨论血小板聚集有多种诱导机制，AA ADR PAF是通过三条不同的机制来诱导血小板聚集的，这三条途径也是血小板聚集的主要途径。虽然途径不一样，但最终都是通过降低血小板CAMP水平和增加Ca2+浓度而引起血小板活化的，随之血小板黏附，从而形成血栓。本实验用 AA ADR PAF这三种诱导剂来诱导血小板聚集，代表了血小板三种不同的聚集途径。通过 本实验发现，EGB制剂对AA ADR PAF诱导的血小板聚集均有抑制作用，并且对PAF诱导的血小板聚集的抑制作用最强。阿司匹林和波立维分别对AA和ADP诱导的血小板聚集有明显的作用。另外，EGB制剂还能降低家兔血

9、清中 PAF的含量，这对于预防与控制血栓的形成 与开展具有重要的意义。阿司匹林和氯吡格雷是临床上抗血小板聚集的常用药，分别阻断AA途径和ADP途径，但近年降临床上出现阿斯匹林和氯吡格雷抵抗现象，是非常棘手的问题，即使两种药物联用有时也会治疗失败。阿司匹林和氯吡格雷对 PAF途径没有任何作用，因此多一条阻断PAF的途 径无不加强了抗血小板聚集的效果。通过本实验发现EGB制剂有显著的拮抗PAF受体的作用， 是不依赖于 AA ADP的第三条途径，并能显著降低实验兔血清中PAF的含量，是阻断 PAF途径的有效药物，与阿司匹林和波立维联用可能会具有更好的抗血小板聚集效果。参考文献1 黄继汉，黄小晖，陈志

10、扬等药理实验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算J.中国临床药理学与治疗学，2004，9 9： 1069-10722 Braquet P， Touqui L ， ShenTY,etal.Perspectives in platelet activating factorresearch.Pharmacol Rev ， 1987，39 2： 973 Simon MF;Chap H;Braquet P;Douste-Blazy L.Effect of BN 52021, a specific an tag onist of platelet activati ng factor (PAF-acether), on calcium moveme nts andphosphatidic acid productioninduced by PAF-acether in human platelets J.Thrombosis research ， 1987， 45 4： 299-3094 Guo N J， Cha ng YL，Xiao DJ， et al.Activati onof Platelet -n eutrophilmediated byplatelet-activating factorJ.J Exp Hemato