除草剂生物测定技术学习教案

1、会计学1除草剂生物测定技术除草剂生物测定技术(jsh)第一页，共48页。 二、除草剂生物测定的基本原理 试验均在同一控制条件下必须设对照，每一处理重复(chngf)34次试材应该健壮、整齐、随机排列测定结果应进行统计学分析在一定范围内，生物试材与除草剂浓度成比例的伤害反应第1页/共48页第二页，共48页。三、除草剂生物测定技术的程序(chngx)和原则 （）生物测定材料的选择试材的选择应兼备对药剂较感性高和具有(jyu)一定的可测范围以及大量易得的均一材料。第2页/共48页第三页，共48页。（二）测定参数的选择试材对除草剂的反应可以通过各种参数来评价。除草剂对植物的影响(yngxing)一般为

2、非专一性的，因此，各种器官均能作为某一除草剂的活力指标。 第3页/共48页第四页，共48页。种子发芽率许多(xdu)除草剂可抑制敏感种子的发芽及胚根和芽鞘的生长、因此，可以利用观察种子的萌发率来测定某种药剂的存在与否。 植株生长量在生物测定中，试材重量的测定是最常用的。 主要(zhyo)测定参数第4页/共48页第五页，共48页。生理生化指标在肉眼可见的反应出现之前，试材的生理生化的变化(binhu)往往可以测定出来。植物呼吸和光合作用以及所含成分或新陈代谢物质的变化(binhu)等都可以作为测定的指标。第5页/共48页第六页，共48页。症状有些除草剂可引起试材的典型(dinxng)症状，因此，

3、可以利用此种反应来鉴定除草剂。 特殊技术Parker以青萍为试材，以百草枯和脲类除草剂的拮抗作用来测青萍的浓度；若以愈伤组织为试材，则测愈伤组织的生长量。 第6页/共48页第七页，共48页。测定(cdng)结果表达方法正确地评价某一药剂的生物测定结果是很重要的 。常用(chn yn)地上部鲜重减少50（ED50）、地上部干重减少50CR50、株高减少50（LD50。或ED50）及覆盖面积减少50（EC50）所需要的除草剂量来表示这一类试验结果。 Y=a+bx第7页/共48页第八页，共48页。0级同对照 1级抑剂生长25以下(yxi) 2级抑制生长50以下(yxi) 3级抑制生长75以下(yxi

4、) 4级抑制生长75以上 5级死亡目测(m c)的分级标准第8页/共48页第九页，共48页。四、除草剂常用(chn yn)的生物测定方法 v黄瓜幼苗法v小杯法v小球藻法v去胚乳小麦(xiomi)幼苗法v浮萍法第9页/共48页第十页，共48页。 种子发芽(f y)测定法是一种常用的除草剂活性测定方法，种子发芽(f y)率、根与茎的生长量或作长度在一定范围内与药剂剂量呈相关性，因此可用作除草剂的定量测定，有较高的灵敏度。种子(zhng zi)发芽测定法第10页/共48页第十一页，共48页。 1发芽率 调查对照处理和药剂处理种子的发芽数量(shling)，然后计算发芽率。 药剂处理的发芽数 发芽率（

5、）一一X 100 对照处理的发芽数 调查(dio ch)项目第11页/共48页第十二页，共48页。2生长抑制率 测定发芽(f y)以后芽或根的长度，或者是测量鲜重或干重（较少）。 对照处理一药剂处理生 长 抑 制 率 （ % ） X100 对照处理第12页/共48页第十三页，共48页。1.黄瓜幼苗(yumio)形态法。1234CK第13页/共48页第十四页，共48页。57%2,4D丁酯乳油对黄瓜(hung gu)种苗的抑制作用100mg/L10mg/L1mg/L1mg/L0.01mg/LCK第14页/共48页第十五页，共48页。 本方法是测定(cdng)激素类除草剂及其他植物生长调节剂活性的常

6、用方法，具有反应灵敏、测定(cdng)范围大（0.11000ppm），操作简便等优点。 第15页/共48页第十六页，共48页。2.小杯法4 5 CK 1 2 3第16页/共48页第十七页，共48页。 该法是上海植物生理研究所于1972年建立的。可以测定二苯醚类，酰胺类和氨基甲酸酯类、氯代脂肪酸类等除草剂的活性，但对抑制植物光合作用的除草剂则几乎不能采用。该法具有操作简便，测定周期短、范围(fnwi)较广的优点。第17页/共48页第十八页，共48页。 试材选用小麦、油菜、水稻、稗草等。以直径3.5 cm，高5.0cm的玻璃杯为容器（亦可用50ml 的小烧杯代替）。杯底放一张圆滤纸片，吸取一定量的

7、有机溶剂溶解的待测药液倒入杯内，挥发干溶剂。若以水稻、稗草等水生杂草种子为试材，则在小烧杯中加入(jir)2ml蒸馏水；3d后分别记载株高或测定鲜重。计算抑制生长50所需要的浓度（LC50）。第18页/共48页第十九页，共48页。 若以小麦(xiomi)、油菜种子为试材、则在滤纸片下放一层直径约为0.5cm大小的玻璃珠（短玻棒也可）再加入3ml蒸馏水。选择刚萌动的种子10粒，排放到滤纸片上，置28恒温箱培养，白天给予日光灯照。培养期间每天加入一定量蒸馏水来补充挥发掉的水份。第19页/共48页第二十页，共48页。 0级同对照 1级抑制生长25以下(yxi) 2级抑制生长50以下(yxi) 3级抑

8、制生长75以下(yxi) 4级抑制生长75以上 药效(yo xio)的分级标准为第20页/共48页第二十一页，共48页。然后计算每一浓度处理的抑制(yzh)指数： （级别X各级代表株数）抑制(yzh)指数X100总株数X最高级别 将抑制(yzh)指数（抑制(yzh)百分数）转换为机率值，浓度（剂量）以对数值表示，求出EC50。第21页/共48页第二十二页，共48页。 本法是Parker于1966年首先报道的，后经改进，缩短测定时间。高粱法适宜(shy)于测定非光合作用抑制剂，它具有操作简便，培养期间不用管理、周期短，测定范围广等优点。还可改用燕麦、黄瓜等为材料来扩大测试范围。3.高梁(o li

9、n)法简介第22页/共48页第二十三页，共48页。.。培养皿黄砂(hun sh)除草剂高梁(o lin)种子第23页/共48页第二十四页，共48页。 上海植生所的方法(fngf)是：用直径9cm的培养皿，装满干燥黄砂并刮平，每皿加人30ml药液，正好使全皿黄砂浸透，然后用有十个齿的齿板在皿的适当位置压孔（或用细玻棒均匀压10个孔）以便每皿能排10位根长12mm（根尖尚未长出根鞘）的萌发高粱种子（一般于试验前的一天在25温箱内催芽）。为了缩短测试时间，在排种培养的前一天，将上述培养好的培养皿、置于34恒温箱中过夜，以提高砂温（室温低时尤为重要），排种工作在恒温室中进行，然后放在34恒温箱内培养，

10、隔8小时左右，就可划道标记每一株根尖位置起点，过1416h，对照根长30mm左右，即可测量，求出抑制生长50的除草剂浓度。第24页/共48页第二十五页，共48页。 此法对高粱种子要求严格，杂交高粱种子因生长势不整齐不适于作试材，农家品种生长势整齐。可采用(ciyng)。此外，培养皿内装砂量要适合，少了会使植物材料与药剂接触不良，砂多则使植物生长受阻碍，这都会影响到测定结果的精确性第25页/共48页第二十六页，共48页。本方法是在Jaworski的黑麦草测定法启发下，由沈阳化工研究院除草剂组建立的。它适宜于测定一氯代乙酰胺类除草剂，敏感度达0.01PPm；亦可测除草醚、五氯酚钠等除草剂，但敏感度

11、较低。测定原理是利用稗草中胚轴（从种子(zhng zi)到芽鞘节处的长度）在黑暗中伸长的特点，以药剂抑制中胚轴的长度来测定药剂的活性。 4.稗草胚轴(pi zhu)中胚轴(pi zhu)法第26页/共48页第二十七页，共48页。 将一系列浓度的敌草胺药液或待测液50ml注入50ml小烧杯中。每杯投入10颗刚刚露白的稗草籽。为了避免在测定中可能有个别幼芽浮起，可以(ky)在种子周围撒一些石英砂，使种子固定。放入恒温箱中，在2830下黑暗培养，经4天后测定中胚轴的长度。第27页/共48页第二十八页，共48页。u建立(jinl)时间：1964年由上海植生所建立(jinl)u适用范围：用于测定光合作用

12、抑制剂类除草剂u优点：与其他测定光合作用抑制剂的方法相比，具有操作简便、测定周期短、专一性好等优点。5.去胚乳小麦(xiomi)幼苗法第28页/共48页第二十九页，共48页。（1）选择饱满度一致的小麦种子，浸种(jn zhng)2h后，排列在铺有滤纸或纱布的搪瓷盘中，在室温20左右进行催芽，34d后苗高达23cm。 (2)精选高度一致的幼苗，轻轻取出；免得伤害根部，然后用镊子摘除胚乳，再用水漂洗掉附在上面的胚乳成分，准备种植。去胚乳(pi r)小麦幼苗法第29页/共48页第三十页，共48页。（3）在直径4.5cm高5.0cm的小玻璃杯注入不同浓度的供试药液3ml和稀释10倍的培养液6ml，每杯

13、播入上述去胚乳小麦幼苗10株。（4）在温度(wnd)2126左右和光照下培养67d后观察药效。注意每天应该给每个小杯称重，补足损失的水分。第30页/共48页第三十一页，共48页。12345CK第31页/共48页第三十二页，共48页。测量所有小麦苗的生长(shngzhng)量，即从芽鞘到最长叶尖的距离，并按下式求出生长(shngzhng)抑制率，继而求出EC50 对照生长(shngzhng)量一处理生长(shngzhng)量 生长(shngzhng)抑制率（）X 100 对照生长(shngzhng)量结果(ji gu)检查与计算第32页/共48页第三十三页，共48页。 本法是由南开大学(nn k

14、i d xu)元素所谭惠芳等建立的。对测定触杀型除草剂较敏感，如百草枯、杀草快、除草醚、敌稗等。另外，对通过干扰体内含氮化合物代谢而杀草的除草剂也很敏感，如杀草强、杀草胺， 2，4D， 2，4，5T、二氯丁酸等。 6.萝卜(lu bo)子叶法第33页/共48页第三十四页，共48页。 将洗净的水萝卜种子播种在垫有二层滤纸的大培养皿内，加入适量蒸馏水，加盖后置27恒温箱黑暗(hi n)培养约30h后，从幼苗上切下子叶，选择大小一致的10片放于垫有一层滤纸的培养皿内（皿直径5cm），皿内盛有2mm磷酸缓冲液配制的一系列不同浓度除草剂溶液5ml，加盖置于25土l的恒温室内培养，给予20003000lx

15、萤光灯连续光照3d后，称子叶鲜重，求出抑制叶片生长50的除草剂浓度，也可测定叶绿素的含量。第34页/共48页第三十五页，共48页。该法是由沈阳化工研究院建立的，适用(shyng)于脲类及均三氮苯类光合作用抑制剂的生物测定方法。对绿麦隆、利谷隆的敏感度可达0.025ppm。 7.番茄(fnqi)水培法第35页/共48页第三十六页，共48页。 首先用盆栽(pn zi)法培养番茄苗，待二片真叶时，作水培试材用。取30ml试管编号。将供试药剂用培养液稀释成一系列浓度的溶液，每只试管加入10ml。挑选生长健壮，大小高度一致的番茄苗，将主根及子叶剪掉后插入试管，每管插苗4株（播前称重，使各管苗重相等）。在

16、光照下25培养2周左右（反应速度与光照及温度有关），测定苗的鲜重。培养期间应每天补加蒸发掉的水分。以生长抑制率来评价活性，亦可求出EC50。第36页/共48页第三十七页，共48页。 和番茄水培法相似的还有燕麦法将土壤和供试药剂(yoj)混合，在大玻璃管内装入200g土壤（以干土计），播入挑选的燕麦种子，土壤水分保持在50左右，自然光下培养2周后，测量地上部分的鲜重。 菜豆叶片法土壤内混入一定量药剂(yoj)，然后播入菜豆种子，土壤含水量60左右，自然光下培养，当第一片三重复叶长全，第二片又刚刚出现时，测量其叶面积。第37页/共48页第三十八页，共48页。 Taylor和Loader，1984年

17、建立了该种方法，目的(md)是筛选防治野燕麦的除草剂混剂，该法快速、简便。8.叶鞘(yqio)滴注法第38页/共48页第三十九页，共48页。具体方法是：当正常生长的燕麦长至1个半叶（即1叶1心）时，在第一片叶张开(zhn ki)的叶鞘里，滴加10ul供试的一定浓度的药液。24-28h后，切下根，取上部约2cm长的一段，插入清水洋菜培养基上。再经24h，取出测量每一剂量处理的叶片延伸长度，并以此评判除草剂活性。第39页/共48页第四十页，共48页。本法是Suwunnamek设计的，用来测定内吸传导性且作用缓慢的除草剂，如草甘膦等。该法既可反应药剂的传导性能，又能反映药剂对地下部分再生能力(nng

18、l)的抑制程度。9.再生(zishng)苗测重法第40页/共48页第四十一页，共48页。 用盆栽法种植香附子，等长成苗后，叶面喷洒一定浓度的草甘膦药液，一周后剪除香附子苗（离土表1cm），再经过(jnggu)一个月左右测再生苗的的鲜重。第41页/共48页第四十二页，共48页。沈阳化工研究院改进了此方法，利用玉米做试材。具体方法：将6粒已催芽的玉米种子种在花盆内，在3叶期时喷施草甘膦，24h 后，从第一片玉米叶基部剪去顶端。经一定时间后，测量再生苗的鲜重或高度。也可在喷药后不同时期剪去苗的地上(d shn)部，测其是否再生或再生后地上(d shn)部分的鲜重。第42页/共48页第四十三页，共48页。五、除草剂田间药效(yo xio)试验第43页/共48页第四十四页，共48页。调查除草剂效果或调查除草剂