加压毛细管电色谱仪的

1、加压毛细管电色谱仪的原理及应用 Capillary ElectrochromatographyAdvances and ApplicationsCEC基本原理1微型分离技术2micro-HPLC 和 CE的结合3电渗流 (EOF) 为流动向的推动力4二维分离机理：液相色谱和电泳之和（分配和电泳淌度）用途:分析生物活性肽中草药多糖等的成分分析.建立中草药的指纹图谱.药品的质量监控.结合高电压系统可提高分析效率.并使图谱更清晰明了.Hw-001(001,20050727 15;55;32)血 清 肽Hw-001(002,20050727 16;23;19)血 清 肽 -10kvHw-001(003

2、,20050727 16;48;15)血 清 肽 +10kvHw-001(004,20050727 16;59;21)血 清 肽 +20kv1.822.22.42.62.833.2mV12345678910min图形分析:黑色代表普通HPLC的血清肽图谱.粉色代表加-10KV电压后血清肽图谱.黄色代表加+20KV电压后血清肽图谱.说明分析: 加负电压后血清肽的出峰时间向后延迟,加正电压后出峰时间向前平移.表明血清肽合流动相后显负电性.样本在淌度和电压共同作用下谱图有变化.可以发现更多成分.同时提高分离效率.因为同一成分在流动相相同的情况下只是淌度不同.现在加了高电压.使以前需很长时间才能出现的

3、峰现在只需很短时间就可出现.Hw-001(002,20050720 15;46;14)Hw-001(005,20050720 16;38;22)-5kvHw-001(003,20050720 16;07;46)-10kvHw-001(004,20050720 16;16;36)-15kv0.91.82.73.64.55.46.37.28.19mV0.91.82.73.64.55.46.37.28.19min黑色代表普通HPLC的脾肽图谱.蓝色代表加-5KV电压后脾肽图谱.粉色代表加-10KV电压后脾肽图谱.黄色代表加-15KV电压后脾肽图谱. 出峰时间从5.6分提前到了3.4分.效率几乎底稿5

4、0%.而且各主要成分均完美再现.没有漏掉主要的峰.TriSepTM-2100加压毛细管电色谱仪操作流程 准备工作：样品：过滤（0.45或0.22m滤膜）流动相：过滤（0.45或0.22m滤膜），脱气, (注意：超声脱气时，水太热了要换)仪器 主要包括四个模块：流体输送单元（Solvent Delivery Module）；微流控制单元（Micro Flow Control Module）；高压电源（High Voltage Module）；检测器（Detection Module）和数据采集软件。各部分分别开关、设置工作参数和程序。 使用温度10-35，相对湿度不大于75%。可以进行毛细管微柱

5、色谱、毛细管电色谱、加压毛细管电色谱、毛细管电泳分析。 各单元参数设置及操作 1溶剂输送单元11 参数设置：反复按 FUNC/BACK 键至显示所要设置的参数，按数字键输入后，ENTER 确认；设置下一参数，主要参数设置完成，按CE 回到初始画面。常用参数包括流速FLOW（正常流速为0.02-0.05mL/min, 如果在这个流速范围内进样量太大，就增加流速；反之就减小流速）、最高、最低限压P.MAX/P.MIN等（最低限压建议设置大于0的数值，否则漏夜、进气保护功能不能发挥作用）12 输液方式 121 单泵恒比例送液：使用两个溶剂输送单元中的一个，按比例配好流动相并超声脱气，设置流速，按PU

6、MP开始输液122 双泵恒比例送液：一种方式是分别在两个溶剂输送单元上分别设置流速，输送需要混合的A、B两种溶剂；另一种方法是设置主泵和从泵：FUNC/BACK 滚动至SYS 项，将主泵设为2，（从泵此项为1），此时主泵面板上的G.E.灯亮，在主泵面板上设置两种溶剂的比例CONC和总流速FLOW后，按主泵PUMP开始送液（注意，辅泵的流速是总流速乘梯度的比例后的值，此值最好不要小于0.005mL/min, 否则辅泵流速不稳，影响梯度基线） 123 编辑梯度送液程序：在主泵上设置流速FLOW、基本输液比例CONC，编辑时间程序： EDIT 进入编辑状态，输入时间数值，滚动FUNC/BACK 到B

7、CNC输入B相的梯度比例数值，按ENTER确认。常用的参数如BCNC（A、B液比例）、FLOW（流速）、STOP（停止程序）等。程序编好后，反复按ENTER查看，按DEL清除错误的程序步。按主泵RUN键运行时间程序, 关掉RUN键，泵按梯度初始化条件走。确认各溶剂系统互溶、缓冲溶液中溶质不会析出结晶！ 13 系统排气或快速更换溶剂系统 把泵的吸滤头放进已经过滤并除气后的流动相中，加电时出口缓冲瓶中也装满相同的缓冲溶液。将Drain阀向OPEN方向（逆时针）旋转180度，按Purge键，约3分钟后自动停止， 也可自己调整Purge 时间，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。Close Dr

8、ain阀。把流速调成1ml/min，把四通处连接反压阀的peek螺丝松开，十分钟后再把流速调成0.05ml/min, 把反压阀的peek螺丝拧紧。2紫外-可见检测器开启电源后，经过短暂的时间，氘灯点亮，波长显示为254 nm。(不一定是254nm，而是上次关机时使用的波长)，按FUNC/BACK键到改波长处，输入实验需要的波长值， ENTER确认，检测器一般30-60min的预热，然后按ZERO基线调零后，基线稳定后，可以进样。 注意：开色谱软件前要把微流控单元的开关打开。否则软件打不开。3高压电源输出电压：0-30kV；电流：0-100A；最大功率：1W注意：当设置10kV以上电压时，应设置

9、较长升压时间（如10秒），突然升压可导致破坏性后果；当环境潮湿时，不要设置超过10kV的电压。31 开机后，按MENU ，以上下箭头选择分析模式：电色谱或电泳，ENTER确认32 以上下左右箭头输入电压（最小单位100V）、升压时间和电场方向/，ENTER确认。确认检测器和微流控制单元仓门关闭、背板电缆连接正确，按RUN 执行注意，改变电压输出极性时，还要改变后面板高压线的插孔位置，设置输出为正电压时，后面板高压线插在“HV+”孔，设置输出为负电压时，后面板高压线插在“HV-”孔，地线始终接在“HV0”孔不变；设置好输出电压极性，按ENTER键 确定33 模式下，还需输入电动进样的电压和时间。

10、把进样条件和运行电泳的条件设好后，首先运行一下RUN ，按RESET键断电后按INJECT ，系统执行进样设置，完成后电压降至0。（每次改条件后都要先运行一下RUN后才能进样）34 RESET键：进样、升压时按下，电压降至0；分析完成，按此键退至上级菜单。装柱： 1 . 装 柱 前 首 先 把 毛 细 管 检 测 窗 口 和 检 测 池 装 检 测 窗 口 的 位 置 都 用 分 析 纯 的 乙 醇 擦 干 净 ， 等 乙 醇 挥 发 完 后 ， 可 以 装 柱 。 （ 注 意 不 要 用 口 吹 干 ）2 . 把 柱 子 的 检 测 窗 口 对 准 检 测 池 的 小 球 ， 对 着 光 看

11、 ， 是 透 光 的 说 明 位 置 正 好3 固 定 柱 子 的 P E E K 螺 丝 的 P E E K 管 要 插 到 底 部 固 定 螺 丝 ， 否 则 毛 细 管 装 好 后 还 会 移 动 。4 然 后 盖 上 盖 子 ， 按 对 角 顺 序 上 四 个 螺 丝 并 固 定 住 。 （ 注 意 不 要 一 次 性 拧 紧 一 个 螺 丝 ）5 螺 丝 固 定 后 ， 把 出 口 端 的 毛 细 管 插 到 P E E K 管 里 ， 把 池 子 安 装 到 检 测 器 上 ，6 打 开 检 测 器 ， 自 检 结 束 后 ， 按 F U N C / B A C K 滚 动 至 看

12、 S a m p l e 和 r e f e r e n c e 值 是 否 正 常 ， 如 果 s a m p l e 值 太 小 ， 说 明 柱 子 没 装 好 。7 卸 柱 子 时 ， 一 定 要 把 柱 子 出 口 端 的 毛 细 管 从 P E E K 管 里 拔 出 ， 是 毛 细 管 柱 子 处 于 自 由 状 态 后 才 卸 四 个 螺 丝 。 否 则 容 易 把 柱 子 折 断 。分析样品1确认各部分正确连接，开启电源，启动数据采集软件UnimicroTriSep Workstation。设置参数及程序，平衡色谱柱2设置工作站信号采集时间等，工作站工具栏绿色示意灯状态，准备采

13、集信号3当进样控制面板的LOAD灯亮时，用微量进样器进样，此时，样品被注入到进样阀的定量环中，定量环的体积是固定的2 l（本系统中见入毛细管柱内的样品量通常是10 L或20 L），与实际进样量无关，多余的样品会流到样品废液瓶中。但应注意，由于在进样孔与进样阀之间存在一个连接管，其体积约10 L，因此，每当进一个新的样品时，第一次进样的进样量要大于40 L，以确保样品置换了进样管路里所有的溶液到达进样阀的定量环，以后每次进样，进样量只须5L即可。要将样品注入色谱柱中时，按进样控制面板上的按键，经过约1 s后，INJECT灯亮，表示样品池已被连入流路系统，样品开始进入色谱柱。当INJECT灯亮时系

14、统自动开始采集数据。同时需按下主泵RUN键开始梯度程序、高压电源RUN 启动高压电场。 4分析结束，存储色谱数据，RESET停止高压。5清洗色谱柱、仪器管路、进样针，进样口；关闭各部分电源；填写使用记录。H w -001(002,20050720 15;46;14)H w -001(005,20050720 16;38;22)-5kvH w -001(003,20050720 16;07;46)-10kvH w -001(004,20050720 16;16;36)-15kv00.91.82.73.64.55.46.37.28.1m V0.91.82.73.64.55.46.37.28.19m

15、 inCEC基本原理1微型分离技术2micro-HPLC 和 CE的结合3电渗流 (EOF) 为流动向的推动力4二维分离机理：液相色谱和电泳之和（分配和电泳淌度）Hw-001(001,20050727 15;55;32)血 清 肽Hw-001(002,20050727 16;23;19)血 清 肽 -10kvHw-001(003,20050727 16;48;15)血 清 肽 +10kvHw-001(004,20050727 16;59;21)血 清 肽 +20kv1.822.22.42.62.833.2mV12345678910minHw-001(001,20050727 15;55;32)

16、血 清 肽Hw-001(002,20050727 16;23;19)血 清 肽 -10kvHw-001(003,20050727 16;48;15)血 清 肽 +10kvHw-001(004,20050727 16;59;21)血 清 肽 +20kv1.822.22.42.62.833.2mV12345678910minHw-001(001,20050727 15;55;32)血 清 肽Hw-001(002,20050727 16;23;19)血 清 肽 -10kvHw-001(003,20050727 16;48;15)血 清 肽 +10kvHw-001(004,20050727 16;59;21)血 清 肽 +20kv1.822.22.42.62.833.2mV12345678910min分析样品1确认各部分正确连接，开启电源，启动数据采集软件UnimicroTriSep Workstation。设置参数及程序，平衡色谱柱2设置工作站信号采集时间等，工作站工具栏绿色示意灯状态，准备采集信号3当进样控制面板的LOAD灯亮时，用微量进样器进样，此时，样品被注入到进样阀的定量环中，定量环的体积是固定的2 l（本系统中见入毛细管柱内的样品量通常是