--生物制片的基本原理

1、生物制片的基本原理生物制片的基本原理医学与生命科学学院 生物制片是研究生物有机体微观结构的生物制片是研究生物有机体微观结构的基础方法，其目的是提供在显微镜下以适度基础方法，其目的是提供在显微镜下以适度的样品，有效地对其进行形态和功能观察研的样品，有效地对其进行形态和功能观察研究。究。 生物制片的目的生物制片的目的（一）切片法（一）切片法:用刀片将标本切成薄片。用刀片将标本切成薄片。石蜡切片法石蜡切片法火棉胶切片法火棉胶切片法冰冻切片法冰冻切片法炭蜡切片法炭蜡切片法 超微切片法超微切片法徒手切片法徒手切片法切片法分类切片法分类（二）非切片法：（二）非切片法：用用物理或化学的方法，将生物组织分物理

2、或化学的方法，将生物组织分离成单个细胞或，薄片或将整个组离成单个细胞或，薄片或将整个组织进行整体封藏。织进行整体封藏。非切片法分类非切片法分类整体制片法整体制片法涂片（布）法涂片（布）法压片（碎）法压片（碎）法磨片法磨片法离析法离析法生物制片的方法生物制片的方法切片法制作过程切片法制作过程（以常用石蜡切片为例）（以常用石蜡切片为例）取材取材固定固定冲洗冲洗脱水脱水或保存或保存透明透明贴片贴片烘干烘干脱蜡脱蜡染色染色封片封片 透蜡浸蜡透蜡浸蜡 包埋包埋修块修块切片切片展片展片非切片法制作过程非切片法制作过程（以整体封藏法为例）（以整体封藏法为例）固定固定冲洗（冲洗（遇必要时遇必要时）整体染色整体

3、染色分化与退染分化与退染脱水脱水透明透明封藏封藏1.动物选择动物选择 组织材料的选择非常重要，一般必须根据教学或组织材料的选择非常重要，一般必须根据教学或科研的目的和要求确定。科研的目的和要求确定。 组织切片以人的材料最好但局限性大，不过一些组织切片以人的材料最好但局限性大，不过一些特殊的结构动物的比人的更具有代表性。特殊的结构动物的比人的更具有代表性。 第一节第一节 材料的采集与处理材料的采集与处理几种动物组织取材选择简表几种动物组织取材选择简表猴：猴：肝、脾、肾、胰、大脑、小脑、脊髓、脊神经节、有肝、脾、肾、胰、大脑、小脑、脊髓、脊神经节、有髓神经纤维、气管、血管、淋巴结、输尿管、膀胱、髓

4、神经纤维、气管、血管、淋巴结、输尿管、膀胱、子宫、卵巢、输卵管、乳腺、输精管、前列腺、食道、子宫、卵巢、输卵管、乳腺、输精管、前列腺、食道、胃、十二指肠、结肠、甲状腺、肾上腺、脑垂体、松胃、十二指肠、结肠、甲状腺、肾上腺、脑垂体、松果体、眼球、手掌皮、内耳、鼻腔、喉、骨骼肌、腮果体、眼球、手掌皮、内耳、鼻腔、喉、骨骼肌、腮腺、颌下腺腺、颌下腺狗：狗：食道、结肠、胆囊、舌、喉声带、扁桃体、淋巴食道、结肠、胆囊、舌、喉声带、扁桃体、淋巴结、脾、心脏、血管、肺、气管、输尿管、膀胱、结、脾、心脏、血管、肺、气管、输尿管、膀胱、输精管、甲状腺、周围神经（坐骨神经）、脊神输精管、甲状腺、周围神经（坐骨神经

5、）、脊神经节、颌下腺、眼球、胃贲门、幽门、直肠肛管经节、颌下腺、眼球、胃贲门、幽门、直肠肛管交界处、鼻粘膜（嗅细胞）交界处、鼻粘膜（嗅细胞）猫：猫：肝、胃、十二指肠、空肠、回肠、肾、肾上腺、肝、胃、十二指肠、空肠、回肠、肾、肾上腺、脑垂体、卵巢、大脑、小脑、脊髓、脊神经节、脑垂体、卵巢、大脑、小脑、脊髓、脊神经节、交感神经节、周围神经纤维、运动末梢（肋间交感神经节、周围神经纤维、运动末梢（肋间肌）、骨骼肌、平滑肌、手掌皮肌）、骨骼肌、平滑肌、手掌皮羊：羊：心肌、心传导系统、子宫、宫颈、乳腺心肌、心传导系统、子宫、宫颈、乳腺猪：猪：肝（肝小叶）、脊髓、脑垂体、胆囊、脾肝（肝小叶）、脊髓、脑垂体、

6、胆囊、脾兔：兔：疏松结缔组织（皮下组织）、肠系膜、卵巢、睾丸、肺、疏松结缔组织（皮下组织）、肠系膜、卵巢、睾丸、肺、 耳廓（弹性纤维）、回肠（潘氏细胞）耳廓（弹性纤维）、回肠（潘氏细胞）豚鼠：豚鼠：胰腺（胰岛细胞）、肾上腺、内耳、小肠（嗜银细胞）胰腺（胰岛细胞）、肾上腺、内耳、小肠（嗜银细胞）大白鼠：大白鼠：皮下组织（肥大细胞）、小肠（潘氏细胞）皮下组织（肥大细胞）、小肠（潘氏细胞）2. 组织取材的方法组织取材的方法总原则：总原则：取材一般先取腹腔内的器官组织，多数遵循下列顺序：取材一般先取腹腔内的器官组织，多数遵循下列顺序：肝脏、胆囊肝脏、胆囊 胃、肾上腺胃、肾上腺 胰腺、脾胰腺、脾 小肠、

7、结肠；小肠、结肠；然后是胸腔、盆腔器官组织；然后是胸腔、盆腔器官组织；最后取神经系统。最后取神经系统。 组织取材以前，首先对该器官组织做大体检查，组织取材以前，首先对该器官组织做大体检查，观察是否有病变。观察是否有病变。1.肌组织取材肌组织取材 肌组织取材时要注意防止因肌肉收缩肌纤维起波肌组织取材时要注意防止因肌肉收缩肌纤维起波浪形变化而影响对肌纤维正常形态的观察。浪形变化而影响对肌纤维正常形态的观察。 避免方法是在固定前将肌肉切成纵条，结扎并分避免方法是在固定前将肌肉切成纵条，结扎并分别固定于拱形玻璃棒两端。别固定于拱形玻璃棒两端。 骨骼肌应该取纵横两个切面。骨骼肌应该取纵横两个切面。2.肝

8、脏取材肝脏取材 肝脏左右四叶，组织学取材一般在肝脏右前叶或左肝脏左右四叶，组织学取材一般在肝脏右前叶或左外叶中部做纵切或冠状切面，然后分切成若干小块，投外叶中部做纵切或冠状切面，然后分切成若干小块，投入固定液固。因肝是实质性器官，固定液不宜迅速渗入入固定液固。因肝是实质性器官，固定液不宜迅速渗入组织内，故肝取材不宜过大，以厚组织内，故肝取材不宜过大，以厚2-3mm为宜。为宜。3.胆囊胆囊 应先将胆囊与肝脏分离，用无齿镊子夹起胆囊，从一应先将胆囊与肝脏分离，用无齿镊子夹起胆囊，从一侧将胆囊剪开，倒掉胆汁，用生理盐水充分洗干净。取材侧将胆囊剪开，倒掉胆汁，用生理盐水充分洗干净。取材时不要取贴附于肝

9、脏的一面，可在游离面胆囊的体部做一时不要取贴附于肝脏的一面，可在游离面胆囊的体部做一纵切面，以被膜面附贴于滤纸上再行固定。另法：亦可直纵切面，以被膜面附贴于滤纸上再行固定。另法：亦可直接在胆囊游离面的体部取材，取下胆囊立即附贴于滤纸再接在胆囊游离面的体部取材，取下胆囊立即附贴于滤纸再置于生理盐水中充分洗去胆汁，然后投入固定液固定，注置于生理盐水中充分洗去胆汁，然后投入固定液固定，注意不要让镊子损伤胆囊粘膜。意不要让镊子损伤胆囊粘膜。4.胰腺胰腺 一般取胰腺的尾部做横切面，因胰尾含胰岛较多，便一般取胰腺的尾部做横切面，因胰尾含胰岛较多，便于做胰岛细胞的特色染色研究，取材时应注意将胰腺周于做胰岛细

10、胞的特色染色研究，取材时应注意将胰腺周围的脂肪组织去掉，以免影响胰组织的固定，胰腺有各围的脂肪组织去掉，以免影响胰组织的固定，胰腺有各种消化酶，动物死后易于自溶，取材操作要快，保持新种消化酶，动物死后易于自溶，取材操作要快，保持新鲜，组织切取要小，以免发生组织自溶变性。鲜，组织切取要小，以免发生组织自溶变性。6.肾脏肾脏肾脏取材可采用两种方法：肾脏取材可采用两种方法：一，先从肾脏注射固定液，固定后取材，固定液可由肾动一，先从肾脏注射固定液，固定后取材，固定液可由肾动脉注入，同时切断肾静脉，使在固定液注入的同时，肾脏脉注入，同时切断肾静脉，使在固定液注入的同时，肾脏血液也同时排出。血液也同时排出

11、。二，取出肾脏，注意保护其被膜，沿着肾的外侧缘的中部，二，取出肾脏，注意保护其被膜，沿着肾的外侧缘的中部，直到深部做纵剖切面，全部切成两半，然后在肾的任一半直到深部做纵剖切面，全部切成两半，然后在肾的任一半面再做一扇形切面，皮质和髓质都应切到。面再做一扇形切面，皮质和髓质都应切到。5.胃胃 胃取材一般以空虚为好，如果胃内有储存的食物，应胃取材一般以空虚为好，如果胃内有储存的食物，应先用生理盐水洗干净，取材时可在胃底或胃体部做一纵切先用生理盐水洗干净，取材时可在胃底或胃体部做一纵切面，组织取出后洗去胃内的食物残渣，放在滤纸上铺开，面，组织取出后洗去胃内的食物残渣，放在滤纸上铺开，防止卷缩，而后投

12、入固定剂中固定。防止卷缩，而后投入固定剂中固定。7.肺肺 肺的取材不能取边缘部位，应取肺小叶的中部，肺的取材不能取边缘部位，应取肺小叶的中部，一般做横切片，以能全面看到肺内小支气管一般做横切片，以能全面看到肺内小支气管 细细支气管支气管 终末细支气管终末细支气管 呼吸性细支气管呼吸性细支气管 肺泡囊肺泡囊 肺泡的组织结构为好。肺泡的组织结构为好。8.心脏心脏 主要取左心室壁，首先用解剖刀沿心脏的主要取左心室壁，首先用解剖刀沿心脏的左缘至心尖部切开，再由心尖部沿心室中隔之左缘至心尖部切开，再由心尖部沿心室中隔之平行线切开左心室的前壁和主动脉，这样左心平行线切开左心室的前壁和主动脉，这样左心室便全

13、部剖开，取材一般切取左心室乳头肌部室便全部剖开，取材一般切取左心室乳头肌部位，沿乳头肌的长轴做纵切面。位，沿乳头肌的长轴做纵切面。3.外科活体组织取材法外科活体组织取材法1.临床手术中临床手术中 多用于肿瘤组织，取材时应注意肿瘤的部位、形态、多用于肿瘤组织，取材时应注意肿瘤的部位、形态、大小、颜色以及与四周组织的关系，有无完整或不完整大小、颜色以及与四周组织的关系，有无完整或不完整的包膜，测量肿瘤的体积，包括长度，宽度和高度等。的包膜，测量肿瘤的体积，包括长度，宽度和高度等。2.活体小组织活体小组织 活体组织标本一般体积小，似米粒或芝麻，肉眼观活体组织标本一般体积小，似米粒或芝麻，肉眼观可以看

14、出组织病变区域和大体层次的，必须尽量按切片可以看出组织病变区域和大体层次的，必须尽量按切片的面进行包埋。的面进行包埋。4.组织取材注意事项组织取材注意事项1.取材应遵循准确、典型、完整、适时的原则；2.研究正常结构应选取健全而又有代表性的部分取材，采取病理材料时， 除取病理部位外，还应选取正常部位，以利于对照观察；3.取材前，要根据要求选择并配制好固定液，取材后，立即投入固定液 中，以防组织自溶和腐败保持材料新鲜保持材料新鲜；4.切取材料时，刀必须锐利，动作要快且仔细，切割时切勿拉锯式的来回 切取，镊取也应轻拿轻放，避免材料的损坏，组织块力求小而薄组织块力求小而薄 0.3*0.3*0.2；5.

15、取材要详细记录日期、采集地点、标本名称、取材部位、断面和所用固 定液等。 杀死杀死：两层含义。一是把用于取材的动物处死；二是使用化学：两层含义。一是把用于取材的动物处死；二是使用化学 药品，迅速地终结生物组织的生理活性。药品，迅速地终结生物组织的生理活性。 固定固定：在杀死的基础上，把组织或细胞按生活的状态固定下来：在杀死的基础上，把组织或细胞按生活的状态固定下来 ，使在以后的制片过程中不发生任何变化。，使在以后的制片过程中不发生任何变化。 保存保存：将固定好的材料浸泡于保存液使其不发生变质。：将固定好的材料浸泡于保存液使其不发生变质。5.杀死、固定、保存的概念杀死、固定、保存的概念6.动物致

16、死法动物致死法1.麻醉法麻醉法2.空气栓塞法空气栓塞法3.击头法击头法4.断头法断头法5.股动脉放血法股动脉放血法 动物致死法动物致死法 1 1、麻醉法、麻醉法 可将浸有乙醚或氯仿的棉球连同小动物一起密封于钟罩或有盖玻璃可将浸有乙醚或氯仿的棉球连同小动物一起密封于钟罩或有盖玻璃瓶内进行麻醉；也可用瓶内进行麻醉；也可用4%4%戊巴比妥作静脉注射，剂量按动物体重戊巴比妥作静脉注射，剂量按动物体重1ml/kg1ml/kg；或用；或用20%20%氨基甲酸乙脂作腹腔注射，剂量一般按动物体重氨基甲酸乙脂作腹腔注射，剂量一般按动物体重5ml/kg5ml/kg。 2 2、空气栓塞法、空气栓塞法 如家兔可用如家

17、兔可用50ml50ml注射器将空气由耳静脉推入，使动物很快死亡。注射器将空气由耳静脉推入，使动物很快死亡。 3 3、击头法、击头法 大、小鼠，可用重物击头后部或将其头后部猛撞桌沿，最好一击而死。大、小鼠，可用重物击头后部或将其头后部猛撞桌沿，最好一击而死。 4 4、断头法、断头法 青蛙、小鼠等小动物，可用剪刀剪去其头部，较大动物如兔子等，青蛙、小鼠等小动物，可用剪刀剪去其头部，较大动物如兔子等，可用斧头迅速砍头致死。可用斧头迅速砍头致死。 5 5、股动脉放血法、股动脉放血法 动物经吸入乙醚或氯仿稍麻醉后，立即切开股动脉放血。动物经吸入乙醚或氯仿稍麻醉后，立即切开股动脉放血。 注意：上述各法，应

18、根据制片需要选用，如空气栓塞法不宜用作血注意：上述各法，应根据制片需要选用，如空气栓塞法不宜用作血管注射标本的制作；乙醚麻醉对丘脑下神经部分泌物染色标本不利；股管注射标本的制作；乙醚麻醉对丘脑下神经部分泌物染色标本不利；股动脉放血法有利于肠系膜铺片的制作。动脉放血法有利于肠系膜铺片的制作。 在于通过固定剂，在尽量短的时间内使生物细胞或组织停止生命活动，借助化学药品的作用使其保持原来的形状和结构，同时易于后步骤的染色。 固定有物理方法固定（干燥、高热、低温骤冷等）、化学方法固定（用化学试剂配制成固定液进行的固定）。第二节第二节 固定和固定液固定和固定液1.固定作用的原理固定作用的原理2. 2.固

19、定的意义和目的固定的意义和目的1.意义意义 只有将组织充分固定才能进行制片；只有将组织充分固定才能进行制片； 固定可使要观察的组织结构尽量接近生前的正常状态固定可使要观察的组织结构尽量接近生前的正常状态（机体死亡后细胞内的酶会使蛋白质分解，细胞溶解破坏，（机体死亡后细胞内的酶会使蛋白质分解，细胞溶解破坏，组织变形，而且病原微生物迅速繁殖，不利于形态学观组织变形，而且病原微生物迅速繁殖，不利于形态学观察）。察）。2.目的目的 a、防止组织自溶和腐败；、防止组织自溶和腐败； b、使细胞内各种成分沉淀保存下来，从而保持细胞与生、使细胞内各种成分沉淀保存下来，从而保持细胞与生 活状态相近似的形态和结构

20、；活状态相近似的形态和结构； c、避免组织或细胞发生收缩或膨胀；、避免组织或细胞发生收缩或膨胀； d、能增加着色能力和媒染能力；、能增加着色能力和媒染能力； e、对组织有硬化作用，适于切片，但又不能使材料过于、对组织有硬化作用，适于切片，但又不能使材料过于 坚硬或变得松脆；坚硬或变得松脆； f、增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别；、增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别； g、固定以后，又能有保存的作用。、固定以后，又能有保存的作用。3.固定的对象和方法固定的对象和方法 构成细胞的主要物质是蛋白质，所以构成细胞的主要物质是蛋白质，所以固定的对象主要固定的对象主要是蛋白质是蛋白质。 组织固定时，应使

21、用足够的固定液，固定液的量一般组织固定时，应使用足够的固定液，固定液的量一般不少于组织块总体积的不少于组织块总体积的10倍以上（一般是倍以上（一般是20倍，多比少倍，多比少好）。好）。 小块组织固定法小块组织固定法：从人体和动物取下的小块组织，立：从人体和动物取下的小块组织，立即置入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的即置入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的方法。方法。局部灌注固定局部灌注固定注射或灌注固定注射或灌注固定 对某些体积过大或者固定液极难渗入的组织对某些体积过大或者固定液极难渗入的组织块或者需要对整个脏器或者动物进行固定时多使用此方法，块或者需要对整个脏器或者动物

22、进行固定时多使用此方法，将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身。 肺肺-可从气管、支气管或肺动脉注入固定液，然后将整个可从气管、支气管或肺动脉注入固定液，然后将整个肺叶投入固定液，肺叶投入固定液，6-12小时后再分切。小时后再分切。 眼球眼球-从眼后房或颈动脉注入从眼后房或颈动脉注入 肝、肾肝、肾-经肝动脉或肾动脉注入经肝动脉或肾动脉注入 脑脑-动物麻醉暴露颈动脉用注射针向着头部的方向注入动物麻醉暴露颈动脉用注射针向着头部的方向注入特殊固定方法特殊固定方法全身灌注固定全身灌注固定 多数为满足原位杂交方法取材的要求使用。 对较大的动物如兔、

23、猫、狗、猴等采用输液的方法，将固定液从一侧颈总动脉或股动脉输入，将另一侧颈静脉切开放血。 对较小的动物如鼠，可在乙醚麻醉的情况下打开胸腔，纵向切开心包膜，用注射器从左心室向主动脉方向注射（结扎紧），同时右心房开孔放血，一般在注射固定液前先用与该动物等量的生理盐水注入血管冲洗，流出的液体不见血时，再将固定液注入。蒸汽固定法蒸汽固定法 多用于比较细小而薄的组织，可用锇酸或甲醛蒸汽固定，主要用于如血液、细胞涂片或薄的组织固定。4.组织固定的注意事项组织固定的注意事项1.组织必须新鲜，组织块不易过大，一般以厚度组织必须新鲜，组织块不易过大，一般以厚度5mm，长宽，长宽 不超过不超过1515mm；2.防

24、止材料因固定剂的作用而发生变形：对柔嫩而薄的材防止材料因固定剂的作用而发生变形：对柔嫩而薄的材 料可先摊于吸水纸上再投入固定剂；料可先摊于吸水纸上再投入固定剂；3.固定所用固定液以新配的为好，防止过久失效；固定所用固定液以新配的为好，防止过久失效；4.固定剂的用量：保证组织有足够的固定剂；固定剂的用量：保证组织有足够的固定剂；5.固定的时间：参考组织的种类、性质、大小、固定剂种固定的时间：参考组织的种类、性质、大小、固定剂种 类性质、渗透力强弱，固定的温度等；类性质、渗透力强弱，固定的温度等；6.其他：定期摇动组织或容器可有利于固定液的渗入，对其他：定期摇动组织或容器可有利于固定液的渗入，对

25、长期固定的标本可经常更换固定液。长期固定的标本可经常更换固定液。5.固定液的性质和条件固定液的性质和条件1.迅速渗入组织，使解剖的组织细胞形态短期内不至迅速渗入组织，使解剖的组织细胞形态短期内不至 于有较大变化；于有较大变化；2.固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相 等，可使组织内外完全固定；等，可使组织内外完全固定；3.使组织细胞不至于因固定而引起人为的改变。使组织细胞不至于因固定而引起人为的改变。 用于固定组织的化学试剂溶液称固定液。分单一、混合固定用于固定组织的化学试剂溶液称固定液。分单一、混合固定液两类。液两类。1、单一固定液、单一固

26、定液 甲醛、酒精、冰醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯甲醛、酒精、冰醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯 化汞、碘、锇酸等。化汞、碘、锇酸等。2、 混和固定液混和固定液 Zenken氏液、氏液、 Bouin氏液、氏液、 Carnoy氏液等。氏液等。 较好的固定液必须具备以下条件较好的固定液必须具备以下条件：具有强的渗透力；不会使组织过具有强的渗透力；不会使组织过度收缩或膨胀，并能使组织内易于观察的成分凝固为不溶性物质；使组织达到度收缩或膨胀，并能使组织内易于观察的成分凝固为不溶性物质；使组织达到一定硬度，获得较佳的折光率和对染料具有较强的亲和力。一定硬度，获得较佳的折光率和对染料具有较强的亲和力。5

27、.固定液固定液单一固定液的种类、性质及其应用单一固定液的种类、性质及其应用 酒精酒精、甲醛甲醛、冰醋酸冰醋酸、苦味酸苦味酸、铬酸铬酸、重铬酸重铬酸钾钾、氯化汞氯化汞、碘碘、锇酸锇酸 混和固定液的种类、性质及其应用混和固定液的种类、性质及其应用 ZenkenZenken氏液、氏液、 BouinBouin氏液、氏液、 CarnoyCarnoy氏液等等氏液等等固定液的类型固定液的类型1、乙、乙 醇醇 组织保存剂，制片时的固定剂。50%以上的乙醇都有固定作用，固定浓度以80-95%为好。 固定的特点：杀死快,渗透力强，可使材料变硬。用纯酒精固定时间不宜太长，否则会使材料发脆，但70%的酒精可较久的保存

28、材料 具有固定、硬化、脱水等作用 无水酒精固定时穿透速度快，宜做糖原固定。但取材薄时才能固定好，也容易变脆，收缩 染色不如甲醛 渗透力差 即福尔马林，浓度为即福尔马林，浓度为40%，实际只有，实际只有4%甲醛，固定蛋甲醛，固定蛋 白质最好。白质最好。 特点特点：非沉淀性固定剂，不能使白蛋白和核蛋白沉淀，但：非沉淀性固定剂，不能使白蛋白和核蛋白沉淀，但 可与蛋白质化合可与蛋白质化合; 渗透力均匀，对组织收缩较少，能固定大块组织渗透力均匀，对组织收缩较少，能固定大块组织; 对小块组织固定数小时即可，时间长没有关系；对小块组织固定数小时即可，时间长没有关系； 用福尔马林固定的材料，有利于核的染色，特

29、别是用福尔马林固定的材料，有利于核的染色，特别是 对动物组织的固定效果更佳对动物组织的固定效果更佳; 对长期固定的标本，制备切片时须流水冲洗对长期固定的标本，制备切片时须流水冲洗24小时小时 甚至甚至48小时。小时。2、甲、甲 醛醛3 3、醋、醋 酸酸* 醋酸又称乙酸，常在16.6以下凝成冰状固体故名冰醋 酸 。* 用 1%-5%的醋酸作固定液，渗透力极强，对一般组织短时间内就可产生固定作用。* 醋酸可沉淀核蛋白，所以对染色质或染色体的固定和染色都很好，但它不能固定类脂物。* 醋酸可使细胞膨胀和防止收缩；同时由于它不能凝固细胞质中的蛋白质，组织不会硬化，因此可与引起组织收缩的液体相混合，起到相

30、互平衡的作用。4、苦味酸(三硝基苯酚） 苦味酸是极毒的黄色结晶，极易爆炸，常配成饱和水溶液贮存，它在水中的溶解度为0.9%-1.4%，亦可溶于酒精、氯仿等。 可沉淀一切蛋白质，对类脂物无作用，也不能固定碳水化合物。渗透速度较慢。固定后细胞收缩明显，收缩率达50%以上，但不使组织硬化。 苦味酸的固定时间不宜过 长，否则会影响苏木精等碱性染料的染色。 苦味酸固定组织的黄色，在以70%酒精脱水时加入少许碳酸锂饱和水溶液即可除去。5 5、升汞（氯化汞）、升汞（氯化汞） 是一种毒性很强的化合物，渗透力仅比醋酸弱。 几乎可沉淀所有蛋白质，升汞能充分固定细胞质和细胞核，并可增加对酸 性 染料的亲和力，升汞能

31、使组织收缩，但硬化作用不强，多与冰醋酸、铬酸盐及甲醛混合使用。 升汞固定的材料中常存有沉 淀或结晶，因此固定后用 0.5%的碘酒（70%酒精洗涤，以提出升汞；然后再用70%酒精洗涤，将碘 去掉；最后还要用0.2%-0.5%硫代硫酸钠溶液洗涤，彻底去掉碘黄色。6、重铬酸钾 为橙红色结晶，性毒，为一种强氧化剂，不能与酒精、甲醛混合。同时为一种强硬化剂,渗透力差，很少单独使用。 与醋酸混合后，pH在4.6时可以固定染色体，以及对细胞质和染色体产生网状沉淀作用。在未与醋酸混合pH大于5.2时，对类脂体具有良好的作用，可以固定高尔基体和线粒体，但此时对染色体不利，不能用作核的固定。 常用浓度1%-3%，

32、它固定的材料，一般不收缩，有的反而稍膨胀，但经酒精处理后可继续收缩，固定后可充分用水洗涤。性质：灰黄色结晶，强氧化剂，性质：灰黄色结晶，强氧化剂，剧毒剧毒优点：目前最好的固定剂之一，脂类物质唯一的固定剂优点：目前最好的固定剂之一，脂类物质唯一的固定剂缺点：渗透力弱，组织固定不均匀，价格昂贵缺点：渗透力弱，组织固定不均匀，价格昂贵 * *取材较小，固定后用过氧化氢漂洗取材较小，固定后用过氧化氢漂洗7 7、锇、锇 酸酸性质：三氧化铬的水溶液。三氧化铬是红棕色结晶体，易潮解 ，强氧化剂，配好后必须立即使用。优点：可使蛋白质、核蛋白、核酸等产生良好的固定不溶解。 缺点：渗透力弱，容易使组织收缩且过度硬

33、化。 8 8、铬、铬 酸酸1、FAA固定液(万能固定液) 配方：50%或70%酒精90ml + 福尔马林5ml + 冰醋 酸5ml。 此液可用于一般植物组织的固定，一般薄嫩的组织用50%酒精，厚硬的组织用70%酒精，醋酸穿透力强，可缩短固定时间，有利于固定质量。一般固定5-20小时，超过时间也无妨，固定的材料不用水洗，可直接从70%酒精开始脱水。2.卡诺固定液(Carnoys) 无水乙醇3份+冰醋酸 1份 无水乙醇6份+氯仿3份+冰醋酸 1份 此液可固定细胞质和细胞核, 对于花粉母细胞、胚胎以 及染色体的固定均可收到良好的效果。 此液由于有较多醋酸，所以固定速度很快，不同的组织固定的时间也不相

34、同，如根尖固定15分钟；花药固定1小时；动物组织因1.5-3小时，固定无需水洗，要用纯酒精浸洗数次。3、秦克氏液（Zenker s) 细胞学中最常用的一种固定液 对动物细胞质、细胞核的固定效果最佳，并有利于染色。 固定时间约为18-24小时，固定后水洗12小时，以除去 组织中的重铬酸钾。当酒精分级脱水至70%酒精时，可加少许碘，以提出留于组织中的汞。 配方：重铬酸钾2.5g +升汞5g +硫酸钠1g +冰醋酸5ml +蒸馏水100ml 先将升汞放在蒸馏水中加热溶解，然后加重铬酸钾和硫酸钠，溶后放置，同时用少量的冰醋酸调节pH至2.3。 配方：福尔马林25ml +冰醋酸5ml +苦味酸饱和水溶液

35、75ml 常用的改良液： 1%酸铬50ml+福尔马林10ml+10%冰醋酸20ml +苦味酸饱和水溶液20ml 1%酸铬50ml+福尔马林10ml+冰醋酸5ml +苦味酸饱和水溶液35ml 应用范围较广，如植物组织、花粉母细胞、胚囊细胞以及动物的一些柔软组织。此液有较多醋酸，渗透力强，固定速度快。薄软组织1-3小时，较大的组织块，12-24小时，固定后直接由50%酒精逐级脱水。5、纳瓦兴(Navaschjns)固定液 改良液 :材料较柔嫩，含水量较多，可用配方I、；材料较坚硬，含水量较少，可用、V 配方。分别配成甲、乙两种基液，用时临时等量配合。固定时间为12-24小时，固定后用70酒精洗涤数

36、次。 冲洗冲洗：用洗涤剂渗透到组织间隙中去，把固定剂洗掉。 冲洗的目的冲洗的目的：以免妨碍染色或使材料在后续处理中变质。 常用洗涤剂：水、低浓度的酒精。冲洗的原则:1.固定剂为酒精，或酒精混合物，一般不要求冲洗，如有必要，必须采用与固定剂中的酒精浓度相同或相近的酒精。2.凡是含有铬酸、重铬酸钾、锇酸的固定剂，必须用流水冲洗，冲洗时间应等于或多于固定时间。3.如固定液中含有氯化汞，应根据溶液的性质用水或酒精冲洗，冲洗完毕必须在70%酒精中加碘液去汞 。4.含有苦味酸的固定剂，宜选用70%的酒精进行洗涤。苦味酸的黄色在70%酒精中能自行脱去,或加入碳酸钾饱和水溶液除去。 第三节第三节 冲洗与脱水冲

37、洗与脱水 脱水脱水：用一种药剂把材料中的水分全部去除干净。：用一种药剂把材料中的水分全部去除干净。 脱水的目的脱水的目的：使组织中的水分完全去除，并使组织变硬。：使组织中的水分完全去除，并使组织变硬。 常用的脱水剂常用的脱水剂：酒精、丙酮、甘油、正丁醇、叔丁醇、：酒精、丙酮、甘油、正丁醇、叔丁醇、 酒精脱水，如需过夜，应停留在酒精脱水，如需过夜，应停留在7070酒精中酒精中丙酮脱水力和收缩作用都较酒精强丙酮脱水力和收缩作用都较酒精强甘油常用于藻类、菌类和柔弱材料脱水，特别在整体制片甘油常用于藻类、菌类和柔弱材料脱水，特别在整体制片法中应用广泛法中应用广泛正丁醇、叔丁醇均为石蜡溶剂，用其脱水后的

38、材料不需要正丁醇、叔丁醇均为石蜡溶剂，用其脱水后的材料不需要透明，可直接浸蜡透明，可直接浸蜡透明透明：采用苯类有机溶剂，将组织或切片中的水溶剂：采用苯类有机溶剂，将组织或切片中的水溶剂 取代，并且达到透明的目的。取代，并且达到透明的目的。目的：目的：1、包埋前透明、包埋前透明使组织中的酒精或者丙酮被透明剂替使组织中的酒精或者丙酮被透明剂替 代，使石蜡可以顺利的进入组织中，增强组织的代，使石蜡可以顺利的进入组织中，增强组织的 折光系数折光系数 2、封藏前透明、封藏前透明，增加透明度，溶解封藏剂使封片均，增加透明度，溶解封藏剂使封片均 匀紧密。匀紧密。透明剂透明剂：二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油、

39、：二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油、丁香油。丁香油。第四节第四节 透明与透明剂透明与透明剂常用透明剂的种类和使用方法常用透明剂的种类和使用方法1.二甲苯二甲苯 为最常用透明剂。无色透明液体为最常用透明剂。无色透明液体 ，长期接触可刺激呼吸，长期接触可刺激呼吸道粘膜。道粘膜。 透明组织块时所用镊子必须干燥，不得将水滴混入二甲透明组织块时所用镊子必须干燥，不得将水滴混入二甲苯，为减少组织变形和收缩，可先经纯酒精与二甲苯或苯的苯，为减少组织变形和收缩，可先经纯酒精与二甲苯或苯的混合液（混合液（1:1）。）。如脱水不净，用二甲苯透明后，将出现下列不良后果：如脱水不净，用二甲苯透明后，将出现下列不良后果：

40、1、如材料内仍留有微量水分，二甲苯就进不去，因此石蜡液不能透入，、如材料内仍留有微量水分，二甲苯就进不去，因此石蜡液不能透入，切片后将在蜡片上出现空洞，影响结果；切片后将在蜡片上出现空洞，影响结果；2、切片内留微量水分，封藏后会发生乳白色云雾状，在显微镜下观察时、切片内留微量水分，封藏后会发生乳白色云雾状，在显微镜下观察时可见许多密集水珠把组织掩盖，切片作废。可见许多密集水珠把组织掩盖，切片作废。3.甲苯甲苯 性质同二甲苯，但透明较慢性质同二甲苯，但透明较慢4.氯仿（三氯甲烷）氯仿（三氯甲烷） 透明能力比二甲苯和苯差，透明时间至少透明能力比二甲苯和苯差，透明时间至少24小小时，多用于大块组织透

41、明。时，多用于大块组织透明。5.香柏油香柏油 作为透明剂效果较好，但透明时间长，至少作为透明剂效果较好，但透明时间长，至少24小时，与石蜡不易融合，不适用于透明组织。小时，与石蜡不易融合，不适用于透明组织。2.苯苯 用途与二甲苯相似，对组织收缩小，但因吸入用途与二甲苯相似，对组织收缩小，但因吸入毒性大，较少使用。毒性大，较少使用。6.苯甲酸甲酯苯甲酸甲酯 难溶于水，溶于乙醚，组织块脱水至难溶于水，溶于乙醚，组织块脱水至95%酒精后酒精后可直接转入苯甲酸甲酯透明，透明时间可直接转入苯甲酸甲酯透明，透明时间12-24小时，对小时，对组织块收缩和硬化很弱，可用于火棉胶切片。组织块收缩和硬化很弱，可用

42、于火棉胶切片。7.苯胺油苯胺油 又名安尼林油，微溶于水，能与醚、醇、苯等混合，又名安尼林油，微溶于水，能与醚、醇、苯等混合，暴露于日光很快变为棕色，应避光保存。暴露于日光很快变为棕色，应避光保存。 包埋：包埋：将融化的包埋剂连同浸透包埋剂的材料一同倾将融化的包埋剂连同浸透包埋剂的材料一同倾 倒于特制的容器内的过程。倒于特制的容器内的过程。 组织包埋前，常利用石蜡将透明剂去除，使石蜡完全组织包埋前，常利用石蜡将透明剂去除，使石蜡完全浸入细胞的每个部分，使石蜡与材料成为一个整体而浸入细胞的每个部分，使石蜡与材料成为一个整体而便于切片，称为组织浸蜡。便于切片，称为组织浸蜡。 第五节第五节 包埋与包埋

43、剂包埋与包埋剂浸蜡的目的和方法浸蜡的目的和方法 组织组织经透明后，在溶化的石蜡内浸渍的过组织组织经透明后，在溶化的石蜡内浸渍的过程称程称浸蜡浸蜡，目的是用石蜡代替组织中的透明剂，并，目的是用石蜡代替组织中的透明剂，并渗入组织内部使软组织变为适当硬度，以利于切片渗入组织内部使软组织变为适当硬度，以利于切片和观察。和观察。 石蜡分为软蜡和硬蜡。石蜡分为软蜡和硬蜡。 由于石蜡冷凝后脆性较大，可加入一定的黄蜂蜡增加韧由于石蜡冷凝后脆性较大，可加入一定的黄蜂蜡增加韧性（蜂蜡与石蜡的比例为性（蜂蜡与石蜡的比例为1:5）。）。 一般用于浸蜡的石蜡熔点为一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56，在夏天较热时一般，在

44、夏天较热时一般用高熔点石蜡，在冬天气温较低时用低熔点石蜡，主要是有用高熔点石蜡，在冬天气温较低时用低熔点石蜡，主要是有利于切片的制作。利于切片的制作。 新蜡应多次熔化，使其中所含的挥发性物质蒸发，以免新蜡应多次熔化，使其中所含的挥发性物质蒸发，以免包埋时出现蜡花。包埋时出现蜡花。 浸蜡时必须经过数次纯石蜡，使其中剩余的透明剂完全浸蜡时必须经过数次纯石蜡，使其中剩余的透明剂完全去尽。去尽。 在组织更换蜡杯时要间隔一定时间，尽量减少组织中含在组织更换蜡杯时要间隔一定时间，尽量减少组织中含有的二甲苯被带入最后的纯蜡杯中，而影响浸蜡的程度。有的二甲苯被带入最后的纯蜡杯中，而影响浸蜡的程度。浸蜡剂的种类

45、浸蜡剂的种类1.石蜡：最适合的包埋石蜡熔点为石蜡：最适合的包埋石蜡熔点为54-68 2.火棉胶：为三硝基纤维素，由浓硝酸和浓硫酸作用火棉胶：为三硝基纤维素，由浓硝酸和浓硫酸作用于脱脂棉而得，适用于大块组织和眼球等。于脱脂棉而得，适用于大块组织和眼球等。3.碳蜡：多乙烯醇，为水溶性油蜡。碳蜡：多乙烯醇，为水溶性油蜡。组织包埋组织包埋石蜡包埋法石蜡包埋法快速石蜡包埋法快速石蜡包埋法火棉胶包埋法火棉胶包埋法石蜡包埋法石蜡包埋法 石蜡是动植物和人体组织制片技术中极重要且应用最石蜡是动植物和人体组织制片技术中极重要且应用最广的包埋剂。包埋蜡须在温箱内经多次熔化，用新蜡和旧广的包埋剂。包埋蜡须在温箱内经多

46、次熔化，用新蜡和旧蜡混合熔化后沉淀的干净蜡。蜡混合熔化后沉淀的干净蜡。1.浸蜡时间浸蜡时间 一般厚一般厚5mm的实质性器官（肝、脾、肾）总浸蜡时的实质性器官（肝、脾、肾）总浸蜡时间为间为2-3小时。小时。 小胚胎可缩短为小胚胎可缩短为30min。 组织浸蜡时，可在温箱中放置组织浸蜡时，可在温箱中放置3-4个蜡杯，按软蜡个蜡杯，按软蜡1、软蜡软蜡2、硬蜡的顺序浸蜡，间隔一定时间更换一个蜡杯，、硬蜡的顺序浸蜡，间隔一定时间更换一个蜡杯，可使石蜡充分渗入组织。可使石蜡充分渗入组织。组织名称组织名称浸浸 蜡蜡 时时 间（分间（分 钟）钟）10*10*2-3mm10*10*4-5mm软蜡软蜡I软蜡软蜡I

47、I 硬蜡硬蜡软蜡软蜡I软蜡软蜡II硬蜡硬蜡肝、肾肝、肾102040152050肌肉组织肌肉组织101030101535消化管消化管101520152045胰腺胰腺101025101530淋巴器官淋巴器官101535151540血管血管10155152040肺肺152055203055膀胱、子宫膀胱、子宫151540152045神经组织神经组织101535102540皮肤皮肤202050202060垂体垂体101520101535血液骨髓血液骨髓51020101025组织体积大小、浸蜡时间参考表组织体积大小、浸蜡时间参考表石蜡包埋过程石蜡包埋过程1.装好金属包埋框，或折好纸盒装好金属包埋框，或折

48、好纸盒2.点燃酒精灯，准备好镊子，需要标记的写好标签点燃酒精灯，准备好镊子，需要标记的写好标签3.将已熔化的包埋石蜡，倾入包埋框或纸盒中，倒满即可将已熔化的包埋石蜡，倾入包埋框或纸盒中，倒满即可4. 组织置入包埋框时，首先应明确组织的方位，将组织块平组织置入包埋框时，首先应明确组织的方位，将组织块平 置入框底。将标签放置蜡块上置入框底。将标签放置蜡块上5.包埋框内的蜡逐渐凝固后，若表面已凝结为固体状，即可包埋框内的蜡逐渐凝固后，若表面已凝结为固体状，即可 放在冷台上冷却，加速其凝固，但不能过早放入放在冷台上冷却，加速其凝固，但不能过早放入6.蜡块完全凝固后即可取出。蜡块完全凝固后即可取出。石蜡

49、包埋注意事项石蜡包埋注意事项1.镊子要随用随烤热，以免石蜡凝结在镊子上，造成蜡块凝镊子要随用随烤热，以免石蜡凝结在镊子上，造成蜡块凝 固不均匀；固不均匀；2.包埋过程要迅速，组织取出的时间要尽量缩短包埋过程要迅速，组织取出的时间要尽量缩短3.包埋后的蜡块应呈均质半透明状，如出现白色浑浊，应考包埋后的蜡块应呈均质半透明状，如出现白色浑浊，应考 虑：脱水不彻底；包埋蜡温度低，过早凝固；石蜡不纯虑：脱水不彻底；包埋蜡温度低，过早凝固；石蜡不纯4.包埋箱的温度必须保持恒定包埋箱的温度必须保持恒定5.包埋不理想应重新将蜡块熔化，重新浸蜡和包埋包埋不理想应重新将蜡块熔化，重新浸蜡和包埋6.尤其在用纸盒包埋

50、时，蜡块表面冷却后必须放入冷水或冷尤其在用纸盒包埋时，蜡块表面冷却后必须放入冷水或冷 却台使其迅速凝结为蜡块。却台使其迅速凝结为蜡块。快速石蜡包埋法快速石蜡包埋法 适用于快速诊断，且组织块太小或太碎，无适用于快速诊断，且组织块太小或太碎，无法使用冰冻切片方法制片时法使用冰冻切片方法制片时1.将组织块投入将组织块投入40%甲醛甲醛10ml，95%乙醇乙醇85ml， 冰醋酸冰醋酸5ml的混合液，固定兼脱水的混合液，固定兼脱水2min2.纯丙酮纯丙酮3min3.纯丙酮纯丙酮3min4.苯苯2min5.浸蜡浸蜡5min 快速包埋组织后进行冷却切片，烤片、脱蜡、快速包埋组织后进行冷却切片，烤片、脱蜡、染

51、色及封固。染色及封固。 火棉胶包埋法火棉胶包埋法 适用于大块组织和眼球等，可避免纤维组织和肌肉适用于大块组织和眼球等，可避免纤维组织和肌肉组织过度硬化，减少纤维组织的收缩和扭转，有利于保组织过度硬化，减少纤维组织的收缩和扭转，有利于保持组织的原有结构。持组织的原有结构。 其缺点是操作过程过长，不适于病理和尸检制片，其缺点是操作过程过长，不适于病理和尸检制片，对神经组织和眼球较好。对神经组织和眼球较好。1.将组织块固定、水洗后投入将组织块固定、水洗后投入70%乙醇中乙醇中6-24小时小时2.浸入浸入80%乙醇中乙醇中6-24小时小时3.浸入浸入90%乙醇中乙醇中6-24小时小时4.浸入浸入95%

52、乙醇中乙醇中12-24小时小时5.浸入浸入100%乙醇中乙醇中12-24小时小时6.浸入乙醚和纯乙醇等量混合液中浸入乙醚和纯乙醇等量混合液中24小时小时7.浸入浸入2%火棉胶（火棉胶（2g火棉胶溶解于火棉胶溶解于50ml纯乙醇和纯乙醇和50ml乙醚混合液）中乙醚混合液）中24-48小时。小时。火棉胶包埋法参考步骤火棉胶包埋法参考步骤8.浸入浸入4%（4g火棉胶溶解于火棉胶溶解于50ml纯乙醇和纯乙醇和50ml乙醚混合乙醚混合液）中液）中24小时至数周小时至数周9.浸入浸入8%（8g火棉胶溶解于火棉胶溶解于50ml纯乙醇和纯乙醇和50ml乙醚混合乙醚混合液）中液）中24小时至数周小时至数周10.

53、浸入浸入16%（16g火棉胶溶解于火棉胶溶解于50ml纯乙醇和纯乙醇和50ml乙醚混乙醚混合液）中合液）中1周周11.包埋时，以包埋时，以16%火棉胶液倒入平底玻璃皿内，将组织火棉胶液倒入平底玻璃皿内，将组织平放埋入其中，上面盖好。溶液慢慢蒸发，直到用手指轻平放埋入其中，上面盖好。溶液慢慢蒸发，直到用手指轻压火棉胶不再出现指纹时，即达到合适的硬度。压火棉胶不再出现指纹时，即达到合适的硬度。已经包埋好的火棉胶组织块可存放于已经包埋好的火棉胶组织块可存放于70%乙醇中备用。乙醇中备用。一、一、 蜡块的修整与固着蜡块的修整与固着 二、切片过程二、切片过程 （一）切片机：旋转切片机（一）切片机：旋转切

54、片机 （二）切片刀（二）切片刀 通常分为平凹型、双平型、双凹型。通常分为平凹型、双平型、双凹型。 切片刀的角度，一般以切片刀的角度，一般以5 58 8度为宜。度为宜。三、石蜡切片时常见问题、原因及补救三、石蜡切片时常见问题、原因及补救第六节第六节 切片与粘片切片与粘片1.载玻片的处理载玻片的处理 清洁液浸泡清洁液浸泡5-12小时小时 清洁液配制方法：重铬酸钾清洁液配制方法：重铬酸钾300g溶于溶于3000ml蒸馏水，蒸馏水，缓缓加入浓硫酸缓缓加入浓硫酸300ml1. 切片前的准备工作切片前的准备工作2.流水冲洗流水冲洗12-24小时，蒸馏水冲洗小时，蒸馏水冲洗3-5遍遍3. 95%酒精浸泡酒精

55、浸泡2小时，擦洗，晾干备用小时，擦洗，晾干备用2. 粘片剂的选择粘片剂的选择1.蛋白甘油蛋白甘油 取鸡蛋一个，取出蛋白混入等量纯甘油，混合溶解取鸡蛋一个，取出蛋白混入等量纯甘油，混合溶解后过滤，于冰箱中保存，为长期存放可加入麝香草酚后过滤，于冰箱中保存，为长期存放可加入麝香草酚2.铬钒明胶液铬钒明胶液 500-800ml蒸馏水加温溶解蒸馏水加温溶解5g明胶，完全溶解后加入明胶，完全溶解后加入铬钒铬钒0.5g，定容至，定容至1000ml。若有残渣要过滤。若有残渣要过滤3.氨丙基三乙氧硅烷（氨丙基三乙氧硅烷（APES） 干净载玻片干净载玻片 APES（按（按1:50比例用丙酮稀释）比例用丙酮稀释）

56、10s 丙酮冲洗丙酮冲洗10s 蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗20s 晾干备用晾干备用3. 修块修块将包埋的组织周围过多的石蜡切去，四周留约将包埋的组织周围过多的石蜡切去，四周留约1.5-2mm的边，上下边要平行的边，上下边要平行4. 磨刀磨刀一般使用自动磨刀机进行，可在显微镜下检查切片刀，一般使用自动磨刀机进行，可在显微镜下检查切片刀，主要观察刀口是否平整、有无缺口主要观察刀口是否平整、有无缺口5. 捞片、展片机的准备捞片、展片机的准备1.将预先冷却的组织蜡块装在切片机固定器上，再装切片刀将预先冷却的组织蜡块装在切片机固定器上，再装切片刀2.调整切片刀与组织块平面的倾角关系，一般为调整切片刀与组织块平

57、面的倾角关系，一般为10-15度角度角3.左手持毛笔，右手转动切片机把，切片带出来后，用毛笔左手持毛笔，右手转动切片机把，切片带出来后，用毛笔 轻轻托起，再用镊子轻摄蜡片，以正面放入展片箱中，待轻轻托起，再用镊子轻摄蜡片，以正面放入展片箱中，待 摊平后捞片摊平后捞片4.左手持清洁好的载玻片一端投入水中附贴切片，右手用镊左手持清洁好的载玻片一端投入水中附贴切片，右手用镊 子辅助推动切片移至载玻片上子辅助推动切片移至载玻片上5.在空气中稍晾干即可烤片。烤片时间一般在在空气中稍晾干即可烤片。烤片时间一般在45几小时至几小时至 过夜。过夜。6. 切片：石蜡切片法制作过程切片：石蜡切片法制作过程 任何石

58、蜡切片、冰冻切片等，如果不经过染色，任何石蜡切片、冰冻切片等，如果不经过染色，在显微镜下只能看到细胞及其他组织的轮廓，即使在显微镜下只能看到细胞及其他组织的轮廓，即使由于组织内部各种物质的折光系数不同，从光线的由于组织内部各种物质的折光系数不同，从光线的明暗上能观察到一些结构，但远不能满足观察和诊明暗上能观察到一些结构，但远不能满足观察和诊断等目的。断等目的。 染色的目的染色的目的就是将染料配制成溶液，将组织烤就是将染料配制成溶液，将组织烤片浸入染色剂内，经过一定的时间，使组织或细胞片浸入染色剂内，经过一定的时间，使组织或细胞及其他异常的成分被染上不同深浅的颜色，产生不及其他异常的成分被染上不

59、同深浅的颜色，产生不同的折光率，便于在光镜下进行观察。同的折光率，便于在光镜下进行观察。第七节 染色原理与染色剂 染色是染色剂与组织细胞的结合过程，其原理尚染色是染色剂与组织细胞的结合过程，其原理尚不完全清楚，有不同的学说，一般认为是化学和物理不完全清楚，有不同的学说，一般认为是化学和物理反应。反应。1.染色的化学反应染色的化学反应 用于染色的染料有酸性、碱性和中性，碱性染料用于染色的染料有酸性、碱性和中性，碱性染料具有碱性助色团氨基，酸性染料具有酸性助色团羟基具有碱性助色团氨基，酸性染料具有酸性助色团羟基和羧基。和羧基。染色原理与染色剂染色原理与染色剂 组织细胞内蛋白质性质也不同，有酸性物质

60、和碱性组织细胞内蛋白质性质也不同，有酸性物质和碱性物质，酸性物质能与溶液中的阳离子结合，碱性物质能物质，酸性物质能与溶液中的阳离子结合，碱性物质能与溶液中的阴离子结合。细胞核尤其是核内染色质一般与溶液中的阴离子结合。细胞核尤其是核内染色质一般由酸性物质组成，故与碱性染料亲和力强，以苏木素为由酸性物质组成，故与碱性染料亲和力强，以苏木素为代表的碱性染料中有染色主要的阳离子。细胞浆主要是代表的碱性染料中有染色主要的阳离子。细胞浆主要是由碱性物质组成，与酸性染料有较强的亲和力，以伊红由碱性物质组成，与酸性染料有较强的亲和力，以伊红为代表的酸性染料中有染色作用的阴离子。为代表的酸性染料中有染色作用的阴