抗重金属锌单克隆抗体的制备

1、抗重金属锌单克隆抗体的制备    英文题名 Preparation of Anti-Zinc Monoclonal Antibodies  关键词 重金属离子; 锌; 人工抗原; 单克隆抗体; 酶联免疫吸附分析; 英文关键词 heavy metal ions; zinc; Artificial-antigen; McAb; ELISA; 中文摘要 农畜产品中残留的重金属离子已对人类安全构成严重威胁,急需快速、高效的重金属残留检测方法。重金属离子免疫检测是一种新型的检测方法,与传统检测方法相比,具有省时、省力、费用低廉、便于携带、易于操作等优点。

2、重金属离子的免疫检测有多克隆抗体免疫检测和单克隆抗体免疫检测,主要的检测手段包括荧光偏振免疫检测、间接竞争性ELISA、一步法竞争性免疫检测和KinExA仪器检测。 本论文的研究目的是合成并鉴定重金属锌螯合物抗原、制备重金属锌螯合物抗原特异性的单克隆抗体,为建立快速检测方法奠定基础。 本论文以锌离子通过双功能团金属螯合剂DTPA与KLH的偶联物作为免疫原免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤技术建立抗重金属锌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过BALB/c鼠体内收集腹水和体外扩增法大量制备单克隆抗体,经盐析、亲和层析获得纯化的单克隆抗体。本研究获得了以下主要研究结果: 1.利用BCA法检测得分离纯化后的Zn

3、-DTPA-OVA、Zn-DTPA-KLH、DTPA-OVA、DTPA-KLH中蛋白实际浓度依次为:25.155±0.038、4.195±0.014、9.242±0.015、6.609±0.025 m. 英文摘要 Heavy metal residues on farm and stock products have become a big threat to human health. It is necessary to develop some fast and efficient detection methods. Heavy metal i

4、mmunoassays are new methods for detection of heavy metal ions. Comparing to the traditional chemical methods, immunoassays are not only fast, cheap, simple, but also reasonably portable, highly sensitive and selective. It can be used as preliminary screening for rapid determination of heavy metal io

5、ns. There are two prototype  摘要 7-8 Abstract 8-9 英文缩略词 10-11 第一章 文献综述 11-30     1 重金属形态及分布特征 11-12         1.1 重金属在土壤中的形态及分布特征 11-12         1.2 重金属在水体中的形态及分布特征 12         1.3

6、 重金属在农作物的形态及分布特征 12     2 重金属污染来源 12-15         2.1 农药、化肥和塑料薄膜的使用 12-13         2.2 大气中重金属沉降 13         2.3 污水灌溉 13-14         2.4 污泥施肥 14  

7、       2.5 含重金属废弃物堆积 14         2.6 金属矿山酸性废水污染 14-15     3 重金属的危害 15-18         3.1 汞的危害 15-16         3.2 铅的危害 16       

8、;  3.3 镉的危害 16-17         3.4 锌的危害 17-18         3.5 砷的危害 18     4 重金属污染的危害及治理 18-21         4.1 重金属污染的危害 18-19         4.2 重金属污染的治理 19-21 &

9、#160;   5 重金属残留分析技术 21-27         5.1 重金属离子的传统检测方法 21         5.2 生物化学传感器方法 21-22         5.3 重金属免疫学检测方法 22-26         5.4 免疫胶体金快速诊断 26-27   

10、;  6 单克隆抗体 27-29         6.1 单克隆抗体技术 27         6.2 McAb的特点 27-28         6.3 McAb 技术的应用 28-29     7 本论文研究的目的和意义 29-30 第二章 抗重金属锌单克隆抗体的制备 30-61     1 材料 30-32 &#

11、160;       1.1 主要试剂材料 30-31         1.2 主要仪器和材料 31-32     2 方法 32-46         2.1 抗原的合成 32-33         2.2 抗原的鉴定 33-35      

12、60;  2.3 单克隆抗体的制备 35-41         2.4 杂交瘤阳性克隆的筛选 41-42         2.5 杂交瘤细胞的克隆化培养 42-43         2.6 杂交瘤细胞的冻存和复苏 43-44         2.7 杂交瘤细胞染色体计数 44-45   &

13、#160;     2.8 抗锌单克隆抗体的类型鉴定 45         2.9 单克隆抗体的大量制备及纯化 45-46         2.10 单克隆抗体分泌抗体稳定性分析 46     3 结果 46-54         3.1 抗原的鉴定 46-50     

14、0;   3.2 小鼠免疫与筛选 50-51         3.3 杂交瘤细胞的克隆与筛选 51-52         3.4 杂交瘤细胞株的冻存及复苏 52         3.5 杂交瘤细胞染色体分析 52         3.6 单克隆抗体类型及亚型鉴定 52-53   

15、      3.7 抗体效价测定 53         3.8 杂交瘤细胞株稳定性鉴定 53-54     4 讨论 54-59         4.1 重金属锌免疫抗原的制备与鉴定 54-55         4.2 动物免疫与筛选 55-59      &

16、#160;  4.4 单克隆抗体的大量制备 59     5 结论及展望 59-61         5.1 结论 59-60         5.2 展望 60-61 参考文献 61-68 致谢 68-69         5.2 生物化学传感器方法 21-22        

17、 5.3 重金属免疫学检测方法 22-26         5.4 免疫胶体金快速诊断 26-27     6 单克隆抗体 27-29         6.1 单克隆抗体技术 27         6.2 McAb的特点 27-28         6.3 McAb 技术的应用 28-29

18、     7 本论文研究的目的和意义 29-30 第二章 抗重金属锌单克隆抗体的制备 30-61     1 材料 30-32         1.1 主要试剂材料 30-31         1.2 主要仪器和材料 31-32     2 方法 32-46         2.1 抗原的合成 32

19、-33         2.2 抗原的鉴定 33-35         2.3 单克隆抗体的制备 35-41         2.4 杂交瘤阳性克隆的筛选 41-42         2.5 杂交瘤细胞的克隆化培养 42-43         2.6

20、 杂交瘤细胞的冻存和复苏 43-44         2.7 杂交瘤细胞染色体计数 44-45         2.8 抗锌单克隆抗体的类型鉴定 45         2.9 单克隆抗体的大量制备及纯化 45-46         2.10 单克隆抗体分泌抗体稳定性分析 46     3

21、结果 46-54         3.1 抗原的鉴定 46-50         3.2 小鼠免疫与筛选 50-51         3.3 杂交瘤细胞的克隆与筛选 51-52         3.4 杂交瘤细胞株的冻存及复苏 52        

22、3.5 杂交瘤细胞染色体分析 52         3.6 单克隆抗体类型及亚型鉴定 52-53         3.7 抗体效价测定 53         3.8 杂交瘤细胞株稳定性鉴定 53-54     4 讨论 54-59         4.1 重金属锌免疫抗原的制备与鉴定 54

23、-55         4.2 动物免疫与筛选 55-59         4.4 单克隆抗体的大量制备 59     5 结论及展望 59-61         5.1 结论 59-60         5.2 展望 60-61 参考文献 61-68 致谢 68-69  

24、60;      5.2 生物化学传感器方法 21-22         5.3 重金属免疫学检测方法 22-26         5.4 免疫胶体金快速诊断 26-27     6 单克隆抗体 27-29         6.1 单克隆抗体技术 27     

25、0;   6.2 McAb的特点 27-28         6.3 McAb 技术的应用 28-29     7 本论文研究的目的和意义 29-30 第二章 抗重金属锌单克隆抗体的制备 30-61     1 材料 30-32         1.1 主要试剂材料 30-31         1.2 主要仪

26、器和材料 31-32     2 方法 32-46         2.1 抗原的合成 32-33         2.2 抗原的鉴定 33-35         2.3 单克隆抗体的制备 35-41         2.4 杂交瘤阳性克隆的筛选 41-42   

27、60;     2.5 杂交瘤细胞的克隆化培养 42-43         2.6 杂交瘤细胞的冻存和复苏 43-44         2.7 杂交瘤细胞染色体计数 44-45         2.8 抗锌单克隆抗体的类型鉴定 45         2.9 单克隆抗体的大量制备及纯化 45-46         2.10 单克隆抗体分泌抗体稳定性分析 46