载脂蛋白E基因启动子多态性与年龄相关性黄斑变性的关系

1、载脂蛋白E基因启动子多态性与年龄相关性黄斑变性的关系                        【摘要】  目的：探讨载脂蛋白E(APOE)基因启动子(_219G/T)多态性与年龄相关性黄斑变性(AMD)发病危险性的关系。方法：用聚合酶链反应_限制性片断长度多态性分析法对AMD组(50例)和对照组(95例)的APOE _219G/T基因型做出鉴

2、定。结果：两组间不存在_219G/T基因型频率分布的差异(P>039)。结论：APOE基因_219G/T多态性与AMD发病危险性无关。 【关键词】  年龄相关性黄斑变性 载脂蛋白E 多态性    Relationship between the Apolipoprotein E Promoter Polymorphisms and the Risk of Age_related Macular DegenerationSHAO Yun_liang1，QIN Yan_li1，YI Xiao_guang1，SONG Yue1，YAN Yi_nong2（

3、1STU/CUHK Joint Shantou International Eye Center，Shantou 515041，China;2Zhanjiang ALLAD Eye Center， Zhanjiang 524043，China）    AbstractObjective: To study the relationship between apolipoprotein E(APOE)promoter(_219G/T)polymorphisms and the risk of age_related macular degeneration(AMD)

4、. Methods: APOE _219G/T genetype in AMD group(50 cases)and control group(95 persons)was identified by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism genotyping technique. Results: No significant difference was found between two groups on the distribution of APOE _219G/Tgenoty

5、pe. Conclusion: The APOE _219G/T polymorphisms do not contribute to AMD risk.    Key Wordsage_related macular degeneration；apolipoprotein E；polymorphism    在西方发达国家，年龄相关性黄斑变性(AMD)是导致老年人视力严重损害甚至失明的一种常见疾病，病理学研究发现它的发生与异常脂肪代谢及转运相关。遗传学的研究证实它的发生与载脂蛋白E(APOE)基因密切相关1，2。APOE蛋白是神经系

6、统重要的转运蛋白，APOE基因及基因启动子(_219G/T)具有多态性,启动子的突变显著降低APOE基因的表达并进而影响APOE蛋白的功能3，4。目前还未见有关APOE基因启动子多态性与AMD发病危险性关系的报道，本研究旨在用聚合酶链反应_限制性片段长度多态性(PCR_RFLP)分析法探讨APOE基因启动子多态性与AMD发生危险性的关系。    1资料与方法    11一般资料根据AMD诊断标准5选取AMD 50例(AMD组，男性22例，女性28例。年龄最小55岁，最大78岁，平均65岁)和对照组95例(来自排除眼底病的白内障患者及其

7、他眼科患者。男性45例，女性50例。 年龄最小58岁， 最大82岁， 平均68岁)。    12 方法抽两组空腹静脉血3mL，-80冻存。用DNA试剂盒(QIAamp DNA mini kits)从200L血中提取DNA。用引物(正向：5_AGAATGGAGGAGGGTGTCCG_3，反向：5_ACTTGTCCAATTATAGGGCTCC_3)扩增包括_219G/T位点的目标DNA片段，PCR反应条件：变性温度94，40s，退火温度58，60s，延伸温度72，40s共35个循环。用Nad酶对包含_219G/T位点碱基片段进行酶切，温度37，时间3h。用质

8、量分数12%的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)对酶切产物进行电泳，电压250mV，时间40min。溴乙啶染色凝胶5min，紫外线灯下观察并拍照。    2 结果   两组间不存在APOE基因 _219G/T基因型频率分布的差异(2=185，df=2，P>039)(表1)。两组PCR_RFLP检测结果见图1。表1两组APOE基因 _219G/T多态性分布                 &

9、#160;              3 讨论    AMD是涉及视细胞、视网膜色素上皮细胞、脉络膜的一种疾病。弥散性drusen、软性drusen、脉络膜新生血管、盘状瘢痕是AMD的4个病理特征6。临床上Drusen被看作是AMD发展的一种风险因子，用组织化学的方法也证实drusen中有磷脂和中性脂肪的存在。APOE基因位于19q132，含4个外显子和3个内含子，共有3个(2、3和4)等位基因，并由此产生6种基因型。APOE是含有29

10、9个氨基酸的磷脂糖蛋白,是组成脂蛋白的重要成分，其在调节脂质代谢、维持胆固醇平衡方面起着重要作用，同时也参与神经系统的正常生长和损伤后的修复过程。研究显示，不同APOE基因型与AMD发生危险性之间密切相关，APOE基因的2对AMD发生有促进作用,而4对AMD发生有保护作用1，2。研究还发现APOE基因启动子的3个(_491A/T,_427T/C,_219G/T)位点具有多态性，而APOE基因启动子碱基的突变可显著降低APOE基因的转录,进而影响APOE蛋白的功能3_4。本文探讨了APOE基因 _219G/T位点多态性与AMD发生危险性，结果提示无论GG、GT还是TT，两组间均无统计学意义，AP

11、OE基因的启动子区域_219G/T多态性可能并不参与构成AMD的发病风险，_219G/T的多态性对AMD的发生可能无关。这与APOE基因启动子的多态性在老年性痴呆症发生、发展中起不同作用7，同时我们的结果也间接印证了Haddad等8的观点，即APOE基因可能在AMD的发病机制中起次要作用。AMD的发生与环境因素(吸烟，饮食习惯、慢性光损害)及遗传因素(APOE,ABCR和ARMD1基因)有关。最近的研究也证实补体因子H、PLEK_HA1/LOC387715、BF/C2区域可能是导致AMD发生的主要区域810，未来我们将就这些新发现的基因及位点在AMD发病机制中的作用作进一步的探讨。 

12、【参考文献】  1Klaver CC， Kliffen M， van Duijn CM， et al. Genetic association of apolipoprotein E with age_related macular degenerationJ. Am J Hum Genet， 1998， 63(1)： 200-206.2Souied EH， Benlian P， Amouyel P， et al. The epsilon4 allele of the apolipoprotein E gene as a potential protective factor for

13、 exudative age_related macular degenerationJ. Am J Ophthalmol， 1998， 125(3)： 353-359.3Ramos MC， Matias S， Artiga MJ， et al. Neuronal specific regulatory elements in apolipoprotein E gene proximal promoterJ. Neuroreport， 2005， 16(9)： 1027-1030.4Green WR. Histopathology of age_related macular degenera

14、tionJ. Mol Vis， 1999， 5： 27.5张承芬. 眼底病学M. 北京： 人民卫生出版社， 1998. 331-348.6Artiga MJ， Bullido MJ， Sastre I， et al. Allelic polymorphisms in the transcriptional regulatory region of apolipoprotein E geneJ. FEBS Lett， 1998， 421(2)： 105-108.7Parra BG， Arboleda G， Yunis J， et al. Haplogroup analysis of the ri

15、sk associated with APOE promoter polymorphisms(_219T/G， _491A/T and _427T/C)in Colombian Alzheimers disease patientsJ. Neurosci Lett， 2003， 349(3)： 159-162.8Haddad S， Chen CA， Santangelo SL， et al. The genetics of age_related macular degeneration：a review of progress to dateJ. Surv Ophthalmol， 2006， 51(4)： 316-363.9Postel EA， Agarwal A， Caldwell J， et al. Complement factor H increases risk for atrophic age_related macular degeneration