鳖甲复方针剂对Con A在Balbc雄性小鼠中诱导肝纤维化的预防和治

1、鳖甲复方针剂对Con A在Balb/c雄性小鼠中诱导肝纤维化的预防和治         作者：罗川，陈竹平，陈浩，张春笋，杨志荣，孙群 【摘要】 目的 探讨鳖甲复方中药针剂对Con A (concanavalin A)在Balb/c雄性小鼠中诱导肝纤维化的预防和治疗作用。方法采用Con A诱导肝纤维化，造模期间及造模成功后均用复方中药针剂干预药剂组，比较组间各项血液生化            &#

2、160;                作者：罗川，陈竹平，陈浩，张春笋，杨志荣，孙群【摘要】  目的 探讨鳖甲复方中药针剂对Con A (concanavalin A)在Balb/c雄性小鼠中诱导肝纤维化的预防和治疗作用。方法采用Con A诱导肝纤维化，造模期间及造模成功后均用复方中药针剂干预药剂组，比较组间各项血液生化指标和肝脏组织学方面的差异，以探讨针剂对肝纤维化的预防和治疗作用。结果复方针剂以3.3 ml/kg和6.6 ml/k

3、g的剂量皮下注射均能显著降低血清中丙氨酸氨基转氨酶（ALT ）(P< 0.05)、门冬氨酸转氨酶（AST ）(P< 0.05)、球蛋白（G） (P<0.01)，升高A/G (P< 0.01)，透明质酸（HA）则在治疗过程中呈下降趋势。肝组织病理观察结果显示复方针剂能缓解肝纤维化的发生和发展，并可加快降解增生的纤维组织。结论鳖甲复方针剂对Con A在Balb/c雄性小鼠中诱导肝纤维化有一定预防和治疗作用。 【关键词】  肝纤维化；Con A；鳖甲复方针剂；血液生化指标；肝组织病理Abstract:ObjectiveTo study the protective

4、and therapeutic effects of the extract of Retinervus luffae fructus and Carapax trionyei on Con A-induced hepatic fibrosis in Balb/c rats.MethodsThe hepatic fibrosis in rats was first induced by intravenous injection of concanavalin A (Con A), the treatment in both protective and therapeutic stage w

5、as performed by subcutaneous injection of the extract. Albumin (A), globin (G), the ratio of albumin to globin (A/G), alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), and hyaluronidase (HA), as well as the pathological change of liver were measured in each group.ResultsIt was shown

6、that the treatment at both low dosage of 3.3 ml/kg and high dosage of 6.6 ml/kg could significantly decreased ALT (P< 0.05), AST (P< 0.05), and G (P< 0.01), but increased A/G (P< 0.01), also HA showed the trend of decrease during the therapeutic period. The pathological changes of liver

7、were also improved in the treatment group.ConclusionIt implies that the extract of Retinervus luffae fructus and Carapax trionyei is beneficial for the prevention and treatment of hepatic fibrosis in Balb/c rats.Key words:Hepatic fibrosis;  Concanavalin A;  Retinervus luffae fructus; 

8、 Carapax trionyei;  Biochemical indexes of blood;  Pathological changes in liver    肝炎是我国目前最突出的公共卫生问题之一。2005年病毒性肝炎首次与艾滋病、肺结核、血吸虫病并列，成为中国危害最严重的四大传染病之一。肝纤维化是慢性病毒性肝病向肝硬化发展的主要病理变化,是各种慢性肝病发展至肝硬化的中间必经阶段，也是肝硬化之前最后一个逆转的良机。因此,能否阻断肝纤维化的发生和发展，是治疗慢性病毒性肝病的关键所在。   Con A (concana

9、valin A)是从刀豆中提取的一种对肝细胞有特异性毒性作用的植物凝集素 13，其诱导的肝损害是T细胞具有依赖性的，与人类病毒性肝炎和自身免疫性肝病的病理过程非常相似。这种免疫性肝损伤模型是一个对人类病毒性肝炎和自身免疫性肝病进行抗肝损伤药物筛选的理想模型48。    鳖甲来源为鳖科动物中华鳖(Trionyx sinensis Wiegmann) 的背甲9，具有滋阴潜阳、软坚散结、退热除蒸等功能。丝瓜络(Retinervus luffae fructus,RLF)性味甘凉，归肝胃肺经，甘而平，有祛风通络，引血清热之功。据验方经反复试制，我们将丝瓜络、炙鳖甲经特殊工

10、艺浓缩而成鳖甲复方针剂，并将其使用于Con A诱导的小鼠免疫性肝损伤模型中，以期寻求作用温和、毒副作用相对较小、价格低廉的有效抗肝纤维化的中成药。1  器材与方法1.1  动物与分组SPF级Balb/c雄性小鼠48只，8周龄，体重(20±2)g，购于四川省医学科学院医学实验动物中心。实验分为预防和治疗两个阶段。预防阶段，将健康小鼠随机分为4组：模型组24只，阴性对照组、大剂量组、小剂量组各8只。治疗阶段，将预防阶段模型组抽样后剩余的肝纤维化模型小鼠随机分为阴性对照组和药物治疗组，每组各8只。1.2  试剂与药物Con A 规格为25 mg/支，购自Sig

11、ma 公司。实验时溶于医用生理盐水配成2.5 mg/ml 的溶液。白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)测定试剂盒由北京中生北控生物科技股份有限公司提供；丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转氨酶(AST)由南京建成生物工程研究所提供；透明质酸(HA)测定试剂盒，由上海森雄科技实业有限公司提供。由特殊工艺加工而成的丝瓜络、炙鳖甲复方针剂。1.3  仪器680酶标仪；JAUAS离心机；DK-98-1电子恒温水浴锅；UV-2450分光光度计。1.4  方法预防阶段，阴性对照组小鼠按12.5 mg/ kg的剂量尾静脉注射生理盐水，其余各组等剂量尾静脉注射Con A溶液。每周1次，持

12、续9周。同时，鳖甲复方针剂按大（6.6 ml/kg）、小（3.3 ml/kg）剂量组皮下注射给药。阴性对照组和模型组则按6.6 ml/kg的剂量皮下注射生理盐水，1次/3 d，持续9周。9周后抽样6只模型组小鼠，摘除眼球取血，室温放置30 min后以4 000 r/min离心10 min，取血清测定各指标，观察肝脏外表，切取肝大叶，10%福尔马林固定，石蜡包埋，常规切片，HE染色，光镜下观察肝组织病理学变化。    确认造模成功后，立即以同样药物处理阴性对照、大、小剂量各组小鼠。治疗阶段，阴性对照组小鼠按6.6 ml/kg的剂量皮下注射生理盐水，药物治疗组小鼠按6.6 ml/kg的剂量皮下注射鳖甲复方针剂，持续31 d。在此期间每周每组抽样6只小鼠做毛细管穿刺眼眶静脉丛取血，制备血清，测定各项指标，动态观测小鼠的治疗情况。1.5  血清指标预防阶段检测了ALT