MYL1基因mRNA选择性剪切体的鉴定及其在不同发育时期的蓝塘与长白猪骨骼肌中的

1、12广东农业科学2010年第1期MYL1基因mRNA选择性剪切体的鉴定及其在不同发育时期的蓝塘与长白猪骨骼肌中的表达凌飞1，方伟2，杜红丽1，陈瑶生2（1.华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006；2.中山大学生命科学学院，广东广州510006）摘要：肌球蛋白轻链1基因（MYL1）的2个剪切体MLC1f及MLC3f在骨骼肌不同发育时期中发挥着重要作用。为进一步了解MYL1基因在猪骨骼肌发育过程中的重要作用，通过电子克隆、RT-PCR扩增及实时定量PCR方法克隆和鉴定了猪MYL1基因mRNA5个选择性剪切体（MLC1f、MLC3f、MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C）。其

2、中MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C是在猪背最长肌中鉴定到的MYL1基因的3个新转录本，目前在人、鼠等其它物种尚无这三种转录本的报道。结果表明，剪切体MLC3f在180日龄长白猪中的表达量最高，而剪切体MLC1f则是在90日龄蓝塘猪的表达量最高；剪切体MLC5f-A在蓝塘与长白猪中各发育时期的表达量都很低；除了剪切体MLC1f外，其余转录本的表达量均为随个体体重的增加而逐步增加。通过对MYL1基因不同选择性剪切体的鉴定，为其在骨骼肌不同发育阶段或组织类型特异性表达调控研究奠定了基础，为该基因功能的研究提供重要线索。关键词：猪肌球蛋白轻链1基因；选择性剪接体；RT-PCR；Real-

3、timePCR中图分类号：S828文献标识码：A文章编号：1004-874X（2010）01-0012-06IdentificationoftranscriptsfromtheporcineMYL1geneanditsexpressiononthedevelopmentofskeletonmuscleinLanTangandLandracepigLINGFei1,FANGWei2,DUHong-Li1,CHENYao-Sheng2（1.SchoolofBioscienceandBioengineering,SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou51

4、0640,China；2.SchoolofLifeScience,SunYat-SenUniversity,Guangzhou510006,China）Abstract:Thefastskeletalalkalimyosinlightpolypeptide1(MYL1)geneencodestwoisoforms,1fand3fplayedakeyroleduringskeletalmuscledevelopment.TounderstandtheregulationofMYL1geneexpressioninpig,MLC1f,MLC3fandthreeadditionalisoforms(

5、MLC5f-A,-B,-C)ofporcineMYL1wereidentifiedbyreversetranscriptase-PCRandreal-timePCR,ofwhichMLC5fshadnotbeenreportedinhumanandmouseasyet.TheresultssuggestedthatexpressionofMLC3fwasthehighestat180daysinLandracepigs,andexpressionofMLC1fwasthehighestat90daysinLanTangpigs.ExpressionsofMLC5f-Awerelowbothin

6、LanTangpigsandLandracepigsduringtheirindividualdevelopment.ExceptMLC1f,expressionofothertranscriptssteadilyincreasedalongwithincreaseofindividualbodyweights.TheirexpressioninindividualdevelopmentandidentificationofisformsfromtheporcineMYL1geneprovidesimportantmoleculargeneticknowledgeconcerningthisg

7、ene.Keywords:MYL1;alternativesplicing;RT-PCR;Real-timePCR可变剪接是真核细胞的一种重要的mRNA转录后加工机制，由此而产生多种相应的mRNA转录本（transcripts）或异构体(isoform)，使1个基因可以翻译收稿日期：2009-10-21基金项目：科技部“973”项目（2006CB102101）作者简介：凌飞（1972-），女，博士，讲师，E-mail：505569452为多种多肽序列，是基因表达多样性的重要表现形式。通过大量的EST数据以及最近所获得的微阵列数据，对人类基因组的分析表明，目前80%的基因在表达过程中可通过选择性

8、剪切，产生多种形式的mRNA，有的基因甚至能够产生几万种不同形式的mRNA。选择性剪切在细胞信号传导、发育阶段与组织类型特异性调控中起着重要作用。因此，研究基因的选择性剪切对了解基因功能有重要意义。肌球蛋白是肌纤维的主要组成成分之一，是一种通讯作者：陈瑶生（1962-），男，博士，教授，E-mail：chyaoshe13多功能的马达蛋白，为肌肉收缩提供动力。肌球蛋白是一个超级家族，由2条重链（MyosinHeavyChain，前）、90、150和180日龄屠宰测定的同时对同窝全部猪只进行生产性能的测定。在1、27（断奶前）、90、150、180日龄，每品种选取体重接近平均体重的试验猪各6头（公

9、母各3头），称重后颈静脉采血，屠宰，取肝脏、脂肪和肌肉样，迅速保存到液氮中。宰前绝食12h，仅供饮水。MHC）和2条轻链组成（MyosinLightChain，MLC），其中轻链由必需轻链（AlkaliLightChain，ELC）与调节轻链（RegulatoryLightChain，RLC）组成。动物个体在不同的生长时期生理需求、选择性剪接和其他转录后加工等机制作用下，肌球蛋白轻链和重链是以不同的异构体形式存在于肌肉中。在成年哺乳动物的骨骼肌中，肌球蛋白必需轻链主要是由2个快肌型异构体（MLC1f、MLC3f）和1个慢肌型异构体（MLC-1s/v）组成。在脊椎动物的心肌、平滑肌和其它背肌的快

10、肌纤维中主要存在肌球蛋白轻链1基因（fastskeletalmyosinlightpolypeptide1,MYL1)的MLC1f和MLC3f2种异构体1-2，这2种异构体分别包含第1、4、59外显子和第2、3、59外显子，两者之间的不同仅在于N-末端的1.21.2.1试验方法生物信息学分析利用GenBank数据库的Blast检索，搜索nr数据库和EST数据库，得到MYL1基因全长cDNA序列后，再以该cDNA序列在NCBI网站的BLAST程序中搜索人高通量基因组序列数据库（HTG），通过比对得到cDNA序列与相应的人基因组序列，结合GU-AG剪切方式对猪MYL1基因的内含子、外显子边界进行分

11、析、确定。1.2.2基因组DNA及各组织总RNA的提取参考上海生工生物工程有限公司的基因组DNA提取试剂盒方法，自配试剂，抽提猪耳组织基因组DNA。严格按照TIANGENTissue总RNA提取试剂盒的使用说明书，抽提猪背最长肌组织中的总RNA并反转录成41个氨基酸3-7。骨骼肌中的MLC1f和MLC3f异构体出现在胚胎形成的不同时期中：在小鼠中，MLC1f转录体是从胚胎骨骼肌的分化时期（E9）开始积累，而MLC3f转录体从胚胎骨骼肌E13.5E15时期开始大量积累8-9。在小鼠的胚胎肌肉发育阶段，MLC1f、MLC3f表达方式是相互独立的，即在胚胎发育不同时期出现1。骨骼肌及其不同肌纤维的发

12、育在猪肉质研究中起着至关重要的作用。Fontanesi等10将MYL1基因定位于猪15号染色体上，发现在猪骨骼肌中MYL1基因主要有2种选择性剪接体（MLC1f、MLC3f）。本课题组在构建蓝塘猪背最长肌组织cDNA噬菌体文库时发现至少存在5种MYL1mRNA转录本(数据尚未发表)。为了证实我们的猜测，本文通过电子克隆、RT-PCR扩增及Real-cDNA，-20°C保存备用。1.2.3RT-PCR以1.2.2中进过验证的反转录产物为模板，根据各剪切体可能存在的特殊位置，分别以不同选择性剪接体特异引物进行RT-PCR扩增，鉴定选择性剪切体的存在（引物见表1）。PCR反应体积以及扩增条

13、件依据PCRTaqMix（广州盈信公司）使用说明书进行。1.2.4实时荧光定量PCR本试验采用SYBRGreenRealtimePCRMix（Takara）的方法。用于检测MYL1基因各mRNA转录本表达的荧光定量PCR的引物见表timePCR方法，鉴定和分析了猪MYL1基因mRNA5个选择性剪切体（MLC1f、MLC3f、MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C）及其在不同发育时期的蓝塘与长白猪骨骼肌的表达。对MYL1基因各种选择性剪接体的鉴定，以期为深入了解和阐明该基因的表达调控研究提供重要的依据。2，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。分别以不同个体肌肉组织的cDNA样为模板，

14、每个样品用特定引物扩增，3次重复；同时采用-actin作为阳性对照，3次重复。反应体系、反应程序详见产品说明书。具体操作步骤详见Takara公司提供的本试剂盒说明书。数据分析统计采用Ct法来度量长白猪和蓝塘猪肌肉表达的发育性变化。具体做法是将每个样品的11.1材料与方法试验材料各mRNA选择性剪切体的RT-PCR鉴定所用的Ct平均值减去对应样品的-actin平均Ct值得到各个组织的Ct值，即Ct=样品目的基因Ct均值-样品-actinCt均值，最后用公式2-Ct计算。cDNA均来自广东省板岭原种猪场纯种蓝塘猪耳组织和背最长肌的组织样品，采集的个体均为达到体成熟的健康猪。2.1结果与分析MYL1

15、基因结构分析（外显子与内含子边界的确通过Blast检索GenBank数据库中的nr数据库和Real-timePCR试验选用广东省东莞市板岭原种猪场同期怀孕的6头蓝塘母猪和6头长白母猪所产仔猪定）及cDNA序列的获得36头。饲养试验期为从初生至180日龄。在1、27（断奶14表1各选择性剪切体鉴定引物名称引物序列产物MLC1fMLC3fMLC5f-AMLC5f-BMLC5f-CMLC5V-actinF：5'GCTCCTCTTTTAACCCATCCTTTG3'(exon1)R：5'GTGGTGCTTGGATTTGAGATTGTC3'（exon9）F：5'GC

16、CCTCAACTCACTCTTCAGCTTC3'(exon2)R：5'AGTGGTGCTTGGATTTGAGATTGT3'(exon9)F：5'TCAGCCCTCAACTCACTCTT3'(exon2)R：5'CATCCTGCTGTTCCTTAGAGA3'(exon4)F：5'CCAGATTGCTGAACAGGCGAAT3'（exon3-5）R：5'TGGTGCTTGGATTTGAGATTGT3'（exon9）F：5'CCAGATTGCTGGCGAATGCAAG3'（exon3-5）R：5&

17、#39;GTGGTGCTTGGATTTGAGATTGTC3'（exon9）F：5'GCCCAGCAGTTTCATCATGTCC3'（exon2-exon3）R：5'GCTTCCCTGGTCCTTGTTGTTG3'(exon5-exon6)F：5'ATGTACGTGGCCATCCAGGC3'R：5'CGTAGCACAGCTTCTCCTTGAT3'表2各选择性剪切体实时定量PCR引物860bp760bp110bp659bp654bp4个产物（268、296、237、232bp）262bp转录本名称引物产物大小MLC1fMLC3

18、fMLC5f-AMLC5f-CF:R:F:R:F:R:F:R:5'-GCCCCACCCAAAGAAGAAAA-3'(exon1)5'-GCCCGAAGGACATCACCAAC-3'(exon5)5'-GGATCAGCCCTCAACTCACTCT-3'(exon2)5'-CTCCTTGAATTCAGCAATCTGG-3'(exon3-5)5'-AGCCCTCAACTCACTCTTCAG-3'(exon2)5'-CATCCTGCTGTTCCTTAGAGA-3'(exon4)5'-CAGATTGC

19、TGGCGAATGCAA-3'(exon3-5)5'-TCCCTGGTCCTTGTTGTTGG-3'(exon5-6pbpbpbpEST数据库，得到MYL1基因全长cDNA序列（DQ629158、NM214374、DY843587），然后以获得的31bp，不同的是这2条EST（BX668300、DQ629161）都比MLC3f3端少了234bp，而序列（AY864616）3端与cDNA序列在NCBI网站的BLAST程序中搜索人高通量基因组序列数据库（HTG），通过比对得到cDNA序列与相应的人基因组序列（AC097525），并结合GU-MLC3

20、f3端相同。从初步分析结果来看，推测MYL1基因可能至少存在5种选择性剪接体。2.2AG剪切方式对猪MYL1基因的内含子、外显子边界进行分析，初步推测出MYL1基因的外显子与内含子的连接区，参考其他物种的基因结构后，确定MYL1基因是由9个外显子与8个内含子组成。分析发现，猪MYL1基因常见的选择性剪接体RT-PCR扩增结果为了确认MYL1基因可能存在的多种选择性剪接体，本研究采用猪背最长肌组织总RNA经反转录合成cDNA，以MLC1f、MLC3f、MLC5f-A和MLC5V特异引物进行RT-PCR扩增。MLC1f引物得到大约为860bp的特异扩增产物；MLC3f引物得到大约为760bp的特异

21、扩增产物；MLC1f、MLC3f产物克隆测序得到序列长度分别为865bp和762bp（图1）。MLC1f克隆测序序列包含了第1、4和59外显子在内的CDS序列，与已报道的MLC1fcDNA同源性达到100；MLC3f克隆测序序列包含了第2、3和59外显子在内的CDS序列，同源性也达到MLC3f存在6条猪EST（NM214374、DY843587、CF359232、EB684323、EB424025、DY419197）；选择性剪接体MLC1f存在5条猪EST（DQ629158、DN109784、DN119281、DR083367、DY417097）。同时发现至少存在两种以上新的选择性剪接体，其中

22、这2条EST（BX666768、BX672580）和另一条EST（DQ629160）都在MLC3f的第90到100个碱基处插入了28bp，而且3端比MLC3f少了234bp，另外3条EST（AY864616、BX668300、DQ629161）在MLC3f的同一位置都缺失了100。引物MLC5f扩增后得到大约为110bp的特异扩增产物（图1）；经克隆测序和序列分析后，确定该序列长112bp，包含了第2、3、4外显子。用MLC5V引物15进行RT-PCR扩增，由于扩增产物中部分产物的表达量很低，琼脂糖凝胶电泳无法看到多条特异带。经扩增产物经12%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后，可得大小和亮度不一致

23、的3条特异扩增产物（图2）。MLC5V产物回收纯化、进行转化克隆，在5个培养平板上随机挑取大约200个菌落进行培养，进行菌液PCR鉴定，经1.2%的琼脂糖凝胶电泳，最后选符合预期长度的样品进行测序。测序结果发现有4种存在差异的序列（MLC5f-A，MLC3f，MLC5f-B和MLC5f-C），而这4种存在差异的序列占总挑取菌比例分别是1.5%、81.5%、配；而MLC5f-B和MLC5f-C序列长度分别为237bp和232bp，与前面得到cDNA序列（AY864616、BX668300、DQ629161）相匹配，它们都和MLC3f序列一样出现外显子4缺失，只包含了第3外显子和第5外显子部分序列

24、，即在外显子5序列的开始端分别出现缺失了31bp和36bp。另外，剪接位点分析结果发现它们都符合GT/AG规则，并且共同的隐含剪接结合位点都是AG。为了进一步确认MLC5f-B与MLC5f-C剪切体的存在，针对MLC5f-B（外显子5的5端缺31bp）与1%、0.5%。经序列比对发现该产物有4种剪接形式（图3）。图3中MLC3f序列长度为268bp，包含了第3、5外显子序列，与已报道的常见MLC3f序列相匹配；而MLC5f-C（外显子5的5端缺36bp）剪切体的可能结构，本研究分别设计了2对引物。MLC5f-B与MLC5f-C作为特异性引物用于MLC5f-B与MLC5f-C这2个转录本的鉴定。

25、通过RT-PCR扩增，MLC5f-B和MLC5f-A序列长296bp，包含了第3、4、5外显子序列，比MLC3f序列多了28bp的外显子4序列，同时也和前面得到cDNA序列（BX666768、DQ629160）相匹MLC5f-C引物分别得到659bp和654bp的特异扩增产物（图1）。从左到右依次为MLC1f、MLC3f、MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C，Lane1分别是各剪切体的PCR特异性产物，Lane2是maker。图1MYL1各剪切体RT-PCR电泳结果。图2MLC5V的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果图3MLC5V引物RT-PCR产物克隆测序得到的差异序列2.3MYL1基因

26、各mRNA转录本在不同发育时期蓝塘从各剪切体在蓝塘与长白猪骨骼肌不同发育时期的表达量（表3）的结果可以看出以下几个规律：（1）与长白猪骨骼肌中的表达结果MYL1基因各选择性剪切体在同一猪种同一时期的表达量差异很大；（2）在成年长白猪中，MLC3f剪切体的16表达量是最高的，该剪切体可能是MYL1基因的主要转录形式；（3）MLC5f-A这种剪切体在蓝塘与长白猪中各发育时期的表达量很低；（4）在90日龄的蓝塘猪中，MLC1f剪切体的表达量较高；（5）除了MLC3f剪切体在90日龄的蓝塘猪及27日龄的长白猪表达量就达到最高外，其余转录本的表达量都是随着个体体重的增加而逐步增加，到成年时表达量是迅速增

27、到最高。表3各剪切体在蓝塘与长白猪骨骼肌不同发育时期的表达量（平均值±标准误差）日龄品种基），前者与GenBank数据库cDNA序列（AY864616、DQ629161）一样都出现外显子4缺失，只包含了第3外显子和第5外显子部分序列，即在外显子5的开始端分别出现31bp的缺失，即MLC5f-B转录本整个序列包含了第2、3、6、7、8外显子、第5外显子3端113个碱基以及第9外显子前端107个碱基。最后一种序列为首次发现，它同样出现外显子4缺失，只包含了第3外显子和第5外显子部分序列，但在外显子5序列的开始端出现36bp的缺失，比前者多缺失5个碱基，和MLC1f、MLC3f有共同的终止

28、信号polyA，整个序列MLC5f-CMLC1fMLC3fMLC5f-A包含了第2、3、6、7、8、9外显子和第5外显子3端113个碱基。本研究将这个新发现的转录本暂命名为12790蓝塘（LT）16.59±0.137.84±0.140.02±0.00长白（LD）蓝塘（LT）长白（LD）蓝塘（LT）长白（LD）180蓝塘（LT）长白（）1.82±0.144.68±0.092.77±0.040.02±0.001.22±0.0120.06±0.5320.1±0.140.12±0.014.44

29、±0.6423.62±0.4810.7±0.350.03±0.016.51±0.0769.98±6.0842.6±0.850.12±0.0015.86±1.440.76±0.0619.4±0.270.10±0.055.34±0.489.25±2.3157.25±6.320.16±0.0120.39±3.001.52±0.01528.9±18.190.36±0.01195.17±12.26

30、MLC5f-C。对本研究鉴定的几种选择性剪接体的剪接形式分析发现，它们主要有以下几种剪接类型：（1）出现常见的外显子跳跃。如MLC1f出现第2、第3外显子跳跃，而MLC3f和其它选择剪接体出现第4外显子跳跃。（2）相邻的外显子相互排斥。如MLC1f和MLC3f两者之间的出现第3和第4外显子相互排斥。（3）选择3'端的剪接位点允许个别外显子或缩短。如几种选择剪接体都选择不同的3'端的剪接位点，即在第5外显子前端不同位点进行剪切，使得外显子5序列缩短。（4）选择不同的转录起始位点形成不同的选择性剪接体。如MLC1f从第1外显子开始转录，而其它选择剪接体从第2外显子开始转录。（5）选

31、择不同的poly（A）位点形成不同的选择性剪接体。如MLC1f、MLC3f、3结论与讨论本研究通过RT-PCR扩增及实时定量PCR方法克隆和鉴定了猪MYL1基因mRNA5个选择性剪切体（MLC1f、MLC3f、MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C）。将这些转录本与GenBank数据库进行同源性比较发现，我们在猪背最长肌中鉴定到猪MYL1基因3个新的转录本：MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C。各转录本都能在GenBank数据库中找到相应的mRNA序列或MLC5f-B和MLC5f-C都选择在外显子9后端出现poly（A）位点，而MLC5f-A选择在外显子9前端107碱基处出现

32、poly（A）位点。对猪MYL1基因的选择性剪接体蛋白序列与人类、黄牛、家兔、黑猩猩、大家鼠、小家鼠、鸡等十几个物种的选择性剪接体蛋白序列进行同源性比较发现，在物种间MYL1基因的MLC1f、MLC3f选择性剪接体蛋白序列同源性很高，特别是哺乳动物间蛋白序列高度同源，推测它们之间也具有相似的蛋白质结构。而EST。其中，MLC1fcDNA序列包含了第1、4和5、6、7、8、9外显子，即MYL1基因前mRNA出现第2和第3外显子跳跃后形成的剪接体。剪切体MLC3fcDNA序列包含了第2、3和5、6、7、8、9外显子，即MYL1基因前mRNA选择第2外显子为开始转录起点和出现第4外显子跳跃后形成的剪

33、接体。剪切体MLC5f-A序列除了比MLC3f多28bp的外显子序列外，在外显子9的前端的107碱基处出现提前终止信号polyA，整个序列包含了第2、3、4、5、6、7、8外显子和第9外显子前端MLC5f-A、MLC5f-B及MLC5f-C编码蛋白序列在其它物种没有找到相关的同源蛋白序列，这可能是因为其它物种目前还没有发现这几种选择性剪接体或是在其它的物种中没有存在这几种选择性剪接体。对猪107个碱基。此外，本研究采用生物信息学方法初步分析发现选择性剪接区域是在第35外显子之间，通过设计特异引物进行RT-PCR扩增，克隆得到4种差异序列。经序列比对后发现，其中一序列为MLC3f序列，它包含了第

34、3、5外显子序列；另一序列为MLC5f-A序列则包含第3、4、5外显子；另外2个差异序列长度分别为237bp和232bp（两者仅在外显子5上相差5个碱MLC1f蛋白序列进行功能位点分析发现其编码氨基酸残基包含3个结合钙蛋白质功能域，MLC3f蛋白的编码氨基酸残基中也包含3个结合钙蛋白质功能域，而MLC5f-A、MLC5f-B及MLC5f-C蛋白的编码氨基酸残基只包含2个结合钙蛋白质功能域。通过此结果，推测17MYL1基因与钙离子结合密切相关，是一种钙结合蛋白。同时，发现MLC1f和MLC3f蛋白比其他几种选择性剪接体编码蛋白多一个结合钙蛋白质功能域，这种差异结合钙蛋白质功能域有可能影响到它们之

35、间的蛋白表达水平和蛋白功能出现差异，需要在蛋白水平上进一步证实和深入研究。多个MYL1转录变异体的存在揭示了该基因转录调控机制的复杂性和其功能重要性，复杂的调控机制确保了该基因的表达水平及其相应的生物学功能得以在生物体内得到精确的调控。分析发现，MLC1f和543PhysiologicalReviews,1996,76:371-423.PeriasamyM,StrehlerE,Garfinkel,etal.Fastskeletalmusclemyosinlightchains1and3areproducedfromasinglegenebyacombinedprocessofdifferent

36、ialRNAtranscriptionandsplicingJ.JBiolChem,1984,259:13595-13604.RobertB,DaubasP,Akimenko,etal.Asinglelocusinthemouseencodesbothmyosinlightchains1and3,asecondlocuscorrespondstoarelatedpseudogeneJ.Cell,1984,39:129-140.NabeshimaY,Fujii-KuriyamaY,MuramatsuM,etal.Alternativetranscriptionandtwomodesofsplic

37、ingresultintwomyosinlightchainsfromonegeneJ.Nature,1984,308:333-338.6HollandLZ,PaceDA,BlinkML,etal.Sequenceandexpressionofamphioxusalkalimyosinlightchain（AmphiMLC-alk）throughoutdevelopment:implicationsforMLC3f蛋白比MLC5f-A、MLC5f-B及MLC5f-C选择性剪接体编码蛋白多一个结合钙蛋白质功能域。同时，不同组织RT-PCR结果表明，MLC1f和MLC3f在骨骼肌与心肌中表达，ML

38、C5f-A、MLC5f-B及MLC5f-C只在骨骼肌中表达（数据尚未发表），表明心肌与骨骼肌中该基因产物有关钙结合的功能可能存在差异，因此不同剪切体在不同肌肉类型中的差异表达可能与不同肌肉的发育、功能特点相关。推测5种剪切体的共有区域可能是该基因产物所必需的基本功能域，而可变区的转录表达取决于肌肉类型，这需要做进一步证实和深入研究，为该基因对猪肌肉类型形成的影响机制的研究奠定基础。参考文献：vertebratemyogenesisJ.DevBiol,1995,171(2):665-676.7ChavesLD,OstroskiBJ,ReedKM.MyosinlightchaingenesintheturkeyJ.CytogeneticandGenomeResearch,2003