格列吡嗪缓释胶囊人体相对生物利用度研究

1、    格列吡嗪缓释胶囊人体相对生物利用度研究        摘要：目的研究格列吡嗪缓释胶囊在正常人体内相对生物利用度。方法采用反相高效液相色谱法测定16名健康男性志愿者单剂量po 10 mg和多剂量po格列吡嗪缓释胶囊及控释片后的血浆药物浓度，计算两制剂的药代动力学参数及相对生物利用度，以cmax，AUC048等指标，利用方差分析、双单侧t检验及(1-2)置信区间分析判定两制剂生物等效性。结果两制剂药-时曲线有双峰，连续服药4 d达稳态，单剂量与多剂量给药主要药代动力学参数

2、经统计分析无显著差异(P0.05)。结论格列吡嗪缓释胶囊与控释片生物等效。关键词：格列吡嗪；缓释；高效液相色谱；生物利用度中分类号：977.1+5文献标识码：A文章编号：1001-2494(2000)09-0610-04Study on the relative bioavailability of glipizide sustained-release capsule in humanQU Fu-jun,SUN Hua,ZHANG Li-xin,GUO Xiao-jun(Clinical Pharmacy and Drug Institute at the Second Hospital o

3、f Harbin Medical University,Harbin 150086)ABSTRACT：OBJECTIVETo study the relative bioavailability of glipizide sustained-release capsule in healthy volunteers.METHODSThe plasma concentrations of gliplzide sustained-release capsule and controlled-realease tablet were determined with HPLC in 16 health

4、y male volunteers after 10 mg orally single dosage and multiple dosage.The pharmacokinetic parameters and relative bioavailability of two drugs were calculated.The cmaxand AUC036 were used to evaluate the bioequivalence of the two drugs with analysis of variance and double single t-test.RESULTSThe c

5、oncentration-time curves of these two drugs had two peaks.The stable phase could be attained after the drugs were taken in consecutive 4 days.The main pharmacokinetic parameters between single dosage and multiple dosage had no singificant difference by statistic analysis.CONCLUSIONThe glipizide sust

6、ained-release capsule was bioequivalent to the glipizide controlled-release tablet.KEYWORDS：glipizide;sustained-release;HPLC;bioavailablity格列吡嗪(glipizide,吡磺环己脲)为第二代口服降糖药，是治疗非胰岛素依赖型(2型)糖尿病较有效且安全的药物1，由于格列吡嗪普通片剂需每天服药34次，给长期服药带来不便和高浓度时可能导致血糖过低等不良反应。本实验选择16名志愿受试者，对格列吡嗪缓释胶囊及控释片的药代动力学及相对生物利用度进行研究，并考查了单剂量给药

7、和多剂量给药后的血药浓度变化，评价了两制剂的生物等效性，为临床用药提供参考。1材料和方法1.1药品与试剂格列吡嗪缓释胶囊(下称A药，哈尔滨市神龙中药药物研究所，10 mg，批号980925)。格列吡嗪控释片(下称B药，辉瑞制药有限公司，5 mg，批号85807008)。格列吡嗪标准对照品(含量99.9%，黑龙江省药品检验所)。水为超纯水，实验所用试剂均为国产色谱纯和分析纯。1.2仪器与材料Waters 2010高效液相色谱仪，717自动进样器，600泵，996PDA检测器，Millenium色谱管理系统，在线脱气机，柱温箱。全自动生化测定仪。XW-80旋涡混合仪。普通离心机。1.3试验对象与试

8、验设计1.3.1试验对象16例健康男性，年龄2225岁，体重6175 kg，身高170179 cm。对志愿受试者进行肝肾功能及心电检查，均正常，无药物过敏史，签定知情同意书后入选。试验前两周未服用过任何药物，受试期间禁烟、酒、茶，进食统一餐。1.3.2单剂量试验设计采用随机自身交叉试验设计方法进行实验。将16名志愿受试者随机分为两组，禁食12 h后，分别po A药与B药10 mg，于服药前与服药后1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12.0，16.0，24.0，36.0，48.0 h采静脉血3 ml，肝素抗凝，离心取血浆。间隔1周后交叉服药，同样时间点静脉采血。服药后4 h进餐。1

9、.3.3多剂量试验设计采用随机自身交叉设计方法进行实验。将16名志愿受试者随机分为2组，均于早8：00时po A药与B药每天10 mg，连续服药7 d，并于第4，5，6，7次服药前和第7次服药后1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12.0，16.0，24.0，36.0，48.0 h采静脉血3 ml，肝素抗凝，离心取血浆。间隔两周后交叉服药，同样时间点采静脉血。1.4血浆中格列吡嗪测定方法1.4.1色谱条件色谱柱：Nova-Pak C18柱(300 mm×4.0 mm,4 m)，C18预柱；流动相：甲醇-0.02 mol.L-1醋酸盐缓冲液(pH3.5，6040)；流速：0

10、.9 ml.min-1；检测波长：225 nm;柱温：25；满量程吸光度：0.02 AUFS。在上述条件下格列吡嗪的保留时间为10.268 min。1.4.2测定方法精密量取血浆样品1.0 ml，置于具塞离心试管中，加入系列的格列吡嗪标准液，使血浆中药物浓度分别为50，200，500，1000，2000 ng.ml-1，然后加入200 l 0.5 mol.L-1盐酸溶液，混匀后加入5 ml乙醚(重蒸)，旋涡振荡90 s，离心吸取乙醚，40水浴下蒸干，残渣加入200 l流动相溶解，吸取20 l在上述色谱条件下进样分离，以格列吡嗪的峰面积(a)对浓度(c)回归，标准曲线方程为c11.16+4.19

11、×10-3a，r=0.9957，P0.01，本法最低检测浓度为50 ng.ml-1，在502000 ng.ml-1内线性良好，格列吡嗪色谱峰处无血浆成分干扰峰。取浓度为50，500，2000 ng.ml-1血浆样品，按前方法进行血浆处理和色谱分析，再以相同浓度的标准溶液进样，单点法求算高、中、低3个浓度的血浆药物浓度，计算溶剂回收率，结果50，500，2000 ng.ml-1血浆样品的溶剂回收率分别为(86.0±5.2)%，(86.5±6.0)%，(90.4±5.7)%(n=5)。另将以上高、中、低3个浓度的血浆样品，通过血浆样品处理和色谱分析，得药物的

12、峰面积，将峰面积代入标准曲线方程得血浆中药物浓度，计算方法回收率。结果50，500，2000 ng.ml-1的血浆样品的方法回收率分别为(98.6±6.2)%，(97.8±5.9)%，(97.3±6.1)%(n5)。以上3个浓度分别做日内RSD和日间RSD，结果50，500，2000 ng.ml-1的血浆样品的日内RSD分别为7.2%，8.1%，8.6%(n=5)，日间RSD分别为7.5%，8.0%，8.8%(n=5)。1.5数据处理1.5.1单剂量数据处理cmax,tmax为实测值。AUC048,AUMC048统计矩法2求算。MRTAUMC048/AUC048。

13、FAUC048(A)/AUC048(B)×100%。1.5.2多剂量数据处理cmax，cmin，tmax为第7次给药后的实测数据读出，其中cmin是指第7次给药后24 h的血药浓度。AUC048，AUMC048统计矩法计算，其中c0是指第7次给药前采静脉血测得的血药浓度，即谷浓度。MRT=AUMC048/AUC048。F=AUC048(A)/AUC048(B)×100%。FI=(cmax-cmin)/cmax×100%。1.5.3统计分析方差分析，双单侧t检验，(1-2)置信区间分析。2结果2.1单剂量相对生物利用度测定结果16名志愿受试者单剂量po 10 mg

14、A药与B药的不同时间血药浓度药时曲线见1，从1可知，A药、B药体内过程均出现双吸收峰，A药tmax为3.0 h，cmax为194219 ng.ml-1，B药tmax为12.0 h，cmax为231242 ng.ml-1。第1个峰与第2个峰浓度波动很小，达到缓释效果。药代动力学参数结果见表1。方差分析结果表明，两制剂因素间cmax,tmax，AUC048,MRT无显著差异(P0.05)。双单侧t检验及(12)置信区间结果见表2，从表2可知以上4个参数的t11.74，t21.74，且A药均在B药的(12)置信区间内。A药的相对生物利用度为(99.5±5.5)%，均在80%120%范围内，

15、综合判定单剂量给药两制剂生物等效。116名受试者po单剂量10 mg格列吡嗪后平均血药浓度-时间曲线曲线-缓释胶囊；-控释片表116名受试者单剂量po A药与B药的药代动力学参数.±s,n=16药代动力学参数A药B药cmax/ng.ml-1287±44274±52tmax/h10.8±2.810.3±2.9AUC048/ng.h.ml-16444±3346488±431AUMC048/ng.h2.ml-1121341±9514125788±10374MRT/h18.8±1.019.0±

16、1.0F/%99.5±5.5表2单剂量po 10 mg A药与B药药代动力学参数双单侧t检验及(12)置信区间参数XTXRt1t290%置信区间cmax2872744.72.9247301tmax10.810.35.12.09.011.0AUC0486444648811.110.454377021MRT18.819.02.71.916.920.52.2多剂量稳态时相对生物利用度测定结果16名志愿受试者连续服药4 d达稳态浓度，平均谷浓度A药为(139±9) ng.ml-1，B药为(140±10) ng.ml-1。由第7天给药计时，16名受试者A药与B药的血药浓度平

17、均药时曲线见2，从2可知，连续给药，于第7次给药后体内药物浓度仍具有双吸收峰，A药tmax1为3.0 h，cmax1为229243 ng.ml-1，B药tmax2为12.0 h，cmax2为283297 ng.ml-1。第1个吸收峰与第2个吸收峰波动小，达到缓释效果。药代动力学参数结果见表3。将药代动力学参数cmax,cmin,tmax,AUC048,MRT,FI进行方差分析，结果两制剂因素间无显著差异(P0.05)。进一步用双单侧t检验及(12)置信区间分析，结果表明，所分析参数t11.74，t21.74，A药的参数值均在B药12置信区间内，见表4。多剂量稳态时A药相对生物利用度为(98.9

18、±7.9)%，均在80%120%范围内。进一步判定两制剂生物等效。216名受试者po多剂量格列吡嗪后血药浓度-时间曲线-缓释胶囊；-控释片表316名受试者多剂量po A药与B药的药代动力学参数.±s,n=16药代动力学参数A药B药tmax/t10±2.110±2.0cmax/ng.ml-1311±55328±58cmin/ng.ml-1137±10139±11AUC048/ng.h.ml-17429±4907561±855AUMC048/ng.h2.ml-1136216±8326139

19、354±13658MRT/h18.4±0.918.5±0.6FI/%54.4±9.956.1±7.8F/%98.9±7.9表4多剂量po A药与B药后药代动力学参数双单侧t检验及(12)置信区间参数XTXRt1t290%置信区间tmax10106.156.158.611.4cmax3113282.844.83292363cmin1371398.8910.28116162AUC048742975615.607.3568349896MRT18.418.514.314.715.820.6FI/%54.456.13.54.750.080.23讨论3.1据报道3，血浆中格列吡嗪采用苯提取，由于苯毒性较大，沸点高，在实验时对实验人员伤害较大又不易挥干。所以我们用重蒸乙醚提取，避免了以上的缺点，同时达到了分析要求，得到了很好的分离效果，专属性强，灵敏度高，重现性好，溶剂回收率达到86.0%，方法回收率达到97.3%。在色谱分离时流动相的pH值对格列吡嗪的保留时间影响较大，pH在3.403.50范围内较好。3.2有资料报道45普通片剂正常人po 5 mg，cmax为200 ng.ml-1，po 10 mg，cmax为632 ng.ml-1。我们研究的A药与B药的cmax既高于普通片po 5 mg，又低于普通片po 10 mg