γ-氨基丁酸A受体在大鼠急性脑缺血中的变化

1、-氨基丁酸A受体在大鼠急性脑缺血中的变化         11-01-16 16:07:00     编辑：studa20                        作者：孙智敏张茂林张俊清薛继娇【摘要】  目的：观察大鼠大脑皮质-氨基

2、丁酸A受体(-aminobutyric acid A receptors,GABAAR)在脑缺血不同时段的表达及其动态变化的规律，探讨其在急性脑缺血中变化的意义。方法：65只雄性Wistar大鼠随机分为对照组，脑缺血6 h组、12 h组、24 h组、3 d组、7 d组、14 d组(均为手术组)，假手术组;采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，至规定时间点取大脑组织，行HE染色，用光学显微镜观察神经元损伤程度;用免疫组织化学技术判断神经元阳性表达的强弱;用形态分析系统检测各组GABAAR表达的阳性细胞数。结果：各手术组GABAAR表达均低于假手术组及对照组，与对照组相比，缺血6 h其表达既有降

3、低，至12 h降至最低。而假手术组与对照组相比无统计学意义。结论：急性脑缺血可引起GABAAR表达下调，致使其对兴奋性氨基酸毒性的抑制作用减弱，这种下调和减弱程度与脑缺血的严重程度相一致，提示GABAAR在缺血性脑损伤中有神经保护作用,可能减缓了缺血性脑血管病的进程，同时GABAAR作为脑内最主要的一种抑制性氨基酸神经递质受体,除通过其配体门控性Cl-通道介导的效应对抗“兴奋毒性”作用外,GABAAR本身也因缺血所致理化因素的改变而发生变化。 【关键词】  脑缺血;-氨基丁酸A受体;大鼠AbstractObjecive: To observe the expression of GA

4、BAAR and the dynamic regulation in the cortex of rats with focal cerebral ischemia in different phases and to investigate its significance in acute ischemia. Methods: Forty-eight male Wistar rats were randomly divided into 13 groups: The normal control, sham operation and ischemic operation group(su

5、bdivided into 6,12,24 hour and 3,7,14 days) by middle cerebral artery occlusion model. Brain specimens of the rats from each group were obtained for HE staining to observe the damage of neurons with light microscope and to judge the positive expression of neurons in immunohistochemistry technique, a

6、nd then to determine the positive cell number expressed by GABAAR in each group with morphologic analysis system. Results: Compared with the normal control group and the sham operation group, the expression of GABAAR in each ischemia operation group was decreased 6h after ischemia and reached the bo

7、ttom within 12 hours after ischemia. However, there was no significant difference between the normal control group and sham operation group. Conclusion: Acute cerebral ischemia can cause down-regulated expression of GABAAR and weaken its inhibitory action on glutamate excitotoxicity, which is accord

8、ant with the degree of cerebral ischemia injury, which suggests that GABAAR plays a role of nerve protection in cerebral ischemia injury and may slow down the progression of ischemic cerebrovascular disease, and that GABAAR, a major inhibitory neurotransmitter receptor of glutamate, undergoes some c

9、hanges because of the physicochemical factors brought about by ischemia as it inhibits excitotoxicity through the action mediated by ligand gated chloride channel.Key wordsCerebral ischemia; Gamma-aminobutyric acid A receptors; Rats脑缺血时,由于各类氨基酸大量释放,兴奋性氨基(exicitatoryamino acids,EAA)与抑制性氨基酸(inhibitory

10、 amino acids,IAA)间平衡被破坏,是导致神经元急性和迟发性“兴奋性毒性”损伤的关键因素。GABAA受体(GABAAR)作为脑内最主要的一种抑制性氨基酸神经递质受体,除通过其配体门控性Cl-通道介导的效应,对抗兴奋性氨基酸的兴奋性毒作用外,GABAAR本身也因缺血所致理化因素的改变而发生变化。为了研究GABAA受体在脑缺血中的作用机制，我们在MCAO模型基础上，动态研究GABAAR在缺血性脑血管病中表达的变化，期待从分子水平揭示GABAAR在脑缺血中的作用机制。1材料与方法1.1实验动物及材料健康Wistar雄性大鼠65只，体重260310 g,由内蒙古大学动物试验中心提供。鼠抗兔

11、GABAAR多克隆抗体购于美国麦莎公司;即用型SABC免疫组化染色试剂盒、抗体稀释液、DAB显色试剂盒、PBS缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、中性树胶均购于武汉博士德公司。1.2实验方法1.3图像分析采用江苏省捷达科技公司的形态分析系统进行图像分析，每张切片随机选出10个单位面积，测量免疫组化染色的阳性细胞数。1.4统计学分析采用SPSS 10.0统计软件，各组数据均以均数±标准差(x±s)表示，两组间数据比较采用t检验，并进行方差齐性检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1神经细胞病理形态学改变光镜观察对照组、假手术组神经细胞形态结构正常、核圆淡染、核仁明显，未见组织坏死，见图1;手术组缺血灶内可见血管和神经元周围胶质成分肿胀，神经元呈三角形或杆状，胞核偏位并深染，有的甚至裂解、消失，见图2;脑缺血时间越长，细胞变化越明显，缺血重的组织内甚至可见液化性坏死灶，灶内神经元残存较少甚至缺失。2.2免疫组化结果免疫组化阳性细胞信号呈棕黄色，在正常组织内GABAAR主要位于细胞膜和胞浆内，见图3;缺血后大脑皮质内GABAAR阳性神经元显著减少，有些神经元胞浆内着色亦变淡，见图4。与相应时间点HE染色结果比较，发现GABAAR阳性神经细胞减少以缺血灶及其周围部位最为显著，在一些缺血严重的神经组织内看