化学发光免疫法测定胰岛素的实验研究

1、化学发光免疫法测定胰岛素的实验研究 【摘要】 目的 探讨测定胰岛素（IRI）的可靠 方法 。方法 采空腹血不抗凝，离心分离成血清，直接上机测定。结果 线性范围在0335.0mIU/L；灵敏度：0mIU/L的IRI，其平均光量子数为3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子数为30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子数为357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子数为684567。特异性：测定质控血清时，测定值在靶值的95%105%范围内。精密度：N=60 CV5%。结论 化学发光免疫法测定胰岛素（IRI），灵敏度高，特异性好，精密度高，是一种可靠而稳定的检测方

2、法。 【关键词】 胰岛素（IRI）；光量子数；前胰岛素原；胰岛素原；化学发光免疫法【Abstract】 Objective To explore a reliable method for the determination of insulin.Methods Gather fasting agglutinating blood, centrifugalize them respectively to get the serum, which were directly set on instrument to determine.Results Linear rang: 0335.0mIU

3、/L，senitivity: the mean quantum of 0mIU/L IRI,10.1mIU/L IRI, 152.0mIU/L IRI and 335.0 mIU/L IRI were 3808,30350,357399 and 684567.Specificity: when the control serum was determined,the measure vlalue was within the standard deviation （SD）,95%-105%.Precision:N=60 CV5%.Conclusion Chemiluminescence is

4、a reliable,stable measurement method for determination of insulin with high sensitivity,precision and specificity. 【Key words】 insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence 胰岛素（IRI）是一种蛋白质激素，这是由胰岛中的细胞所合成、储存和分泌的。IRI的功能是调节血液中葡萄糖的浓度水平。IRI初期是在细胞中，以一种大分子量（分子量为1200）前胰岛素原的形式存在。前胰岛素原是一条由110氨基酸组成

5、的单链前体。前胰岛素原被切除掉24个氨基酸序列后形成胰岛素原（分子量为9000），胰岛素原是胰岛素和C-肽的前体1。IRI是由两条氨基酸链组成的。最初，IRI A链是由21个氨基酸组成，B链是由30个氨基酸组成；而C-肽是由31个氨基酸组成。IRI是随餐后血液中葡萄糖的浓度高低而产生应答的。 IRI水平虽然不是糖尿病患者常规诊断方法，但是IRI水平的检测对于空腹低血糖患者、普通人群中的胰岛素耐受患者、细胞分泌功能异常患者的意义非常大2，3。 1 材料与方法 1.1 原理 IRI的测定是一种直接化学发光技术和双抗体两点夹心免疫 分析 法相结合的测定方法。第一种抗体称为标识抗体，是由单克隆抗胰岛素

6、抗体标记吖啶酯形成的；第二种抗体称为固相化抗体，是由单克隆抗胰岛素抗体以共价键的方式与顺磁性颗粒相结合形成的。血清中的胰岛素与相应抗体发生免疫反应后产生光量子，其光量子数的多少与血清中胰岛素的浓度成正比，经标准曲线 计算 即可求得血清IRI的浓度水平。 1.2 仪器与试剂 仪器：BAER ACS-180型全自动化学发光免疫分析仪。试剂（双试剂）及标准液由广州宝迪有限公司提供。 1.3 方法 取血清于样品杯中，置全自动化学发光免疫分析仪上，调整好检测参数：血清25l+第一试剂50l于37孵育5min，加第二试剂250l于37孵育2.5min，用蒸馏水对反应杯进行分离、抽吸、清洗，最后分别加300

7、l酸试剂和碱试剂到反应系统中进行反应发光，读取光量子数，再根据标准曲线，计算出结果。 1.4 标准曲线制备 采用两点定标法，将标准血清0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于仪器的定标位置上，编入测定程序，上机测定自动打印出标准曲线。 2 结果 2.1 精密度 取混合血清分成两份，一份当天测定60次，结果IRI的值为220.8mIU/L，其对应的CV值为1.8%；另一份做批间试验，测定10次，测定值为211.2mIU/L，其对应的CV值为2.8%。 2.2 灵敏度 0mIU/L的IRI，其平均光量子数为3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子数为30350，152.0mIU/L的

8、IRI，其平均光量子数为357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子数为684567。IRI测定的范围为0335.0mIU/L。 2.3 回收试验 在IRI为25mIU/L的血清中分别加入浓度为1mg/L的胰岛素原、浓度为500g/L的C-肽、浓度为1mg/L的胃泌素、浓度为1mg/L的胰高血糖素、浓度为1mg/L的胰泌素进行回收试验,分别测得其回收率为:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。 2.4 线性 分析 对一份定值血清稀释不同浓度，观察测定体系光量子数的变化量，即为IRI与光量子数的关系。结果显示：IRI在本法的测定范围是0335.0mIU/L

9、。当IRI大于335.0mIU/L时，开始偏离线性。因此对浓度高的标本必须先进行适当的稀释，然后测定。 2.5 干扰试验 当溶血（Hb5g/L）、黄疸（胆红素0.2g/L）时,对结果干扰甚微。 2.6 正常 参考 值 取100份经我院体检合格者的血清，其中男50份，女50份，年龄1955岁，平均37岁。检测结果IRI：20.517.5mIU/L。男女之间差异无显着性（P0.05）。 3 讨论 目前 定量测定IRI的 方法 不多，过去一般用放射免疫法，该法测定步骤繁琐，为半自动化操作，测定时间长达3天，测定范围窄，且使用试剂具有放射性，对操作人员造成身体伤害及对周围形成污染。现在基本已被化学发光

10、免疫法所代替，该法测定步骤简单，为全自动化操作，测定时间短，全过程最短为半小时即可完成，而它使用的试剂安全无放射性，为一般化学试剂，对操作人员无伤害，对周围环境污染甚微。不过它也有缺点：其试剂为抗体试剂，有效期短，容易失效，定标周期短，一般为2周。在试剂的有效期内和定标周期内，对血清标本进行测定，其结果非常准确可靠。综上所述，化学发光免疫法测定胰岛素（IRI）是目前首选的方法。【参考 文献 】 1 康格非,巫向前.生物化学和生物化学检验，第2版.北京:人民卫生出版社,2001，256.2 Chevenne D,Trivin F,Porquet D.Insulin assays and reference values.Diab