不同方法检测新型冠状病毒血清抗体与凝血功能的结果探讨.docx

1、.论著.不同方法检测新型冠状病毒血清抗体与凝血功能的结果探讨于超，杨少明，王术，张家军rangeof2.001-4.000,Amongthe4IgMpositivesamples,theSCOratiorangedfrom1.001to1.500于超，杨少明，王术，张家军rangeof2.001-4.000,Amongthe4IgMpositivesamples,theSCOratiorangedfrom1.001to1.500通讯作者(营口市中心医院呼吸内科，营口,115000)摘要：目的通过对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)免疫球蛋白IgM和IgG的检测，对比核酸检测的确诊结果，并检测

2、其部分凝血功能。方法收集了2020年4月13口至2020年4月16口营口地区接收的515例调查对象的检测血样，对标本以胶体金免疫层析法及磁微粒化学发光法进行(SARS-CoV-2)血清抗体IgM和IgG进行检测，得出结果，结合核酸检测结果，对比两种方法的特异度，评估其应用于大规模人群筛检的可行性。并检测其部分凝血功能。结果515例调查对象核酸检测结果均为阴性，抗体检测结果分别为胶体金免疫层析法：IgG特异度9961%(2515),IgM特异度99.03%(5515),双阳性特异度9981%(1515);磁微粒化学发光法：IgG特异度95.34%(24515),IgM特异度99.22%(4515

3、),双阳性特异度100%(0515).磁微粒化学发光法检测【gG阳性的24例标本中，结果sco比值分布于1.0011.500的标本12例(50%),分布于1.5012.000的标本5例(20.83%),介于20014.000的标本4例(16.67%),大于4.001的标本3例(125%);IgM结果阳性的4例标本中，sco比值分布于1.001L500的标本0例(0%),介于1.5012.000的标本1例(25%),大于2001的标本3例(75%).显示凝血功能活化，结论1,单一方法血清抗体检测受试剂质量及其他亚种冠状病毒抗体的影响，导致假阳性率较高，不适用于人群初筛，2,磁微粒化学发光法检测I

4、gG抗体假阳性率较高，可以通过调整其判读标准可能降低假阳性率，3.血消抗体检测具有操作方便，节约成本的优点，采用不同方法联合检测血清抗体，进行大规模的人群筛检是提高效率的重要方法之一。凝血功能活化可作为治疗、预后的参考。关键词：新型冠状病毒，新型冠状病毒肺炎，化学发光法，胶体金免疫层析发，免疫球蛋白。中图分类号R446.1文献标志码A文章编号1009-6213(2020)06-0903-04StudyontheResultsofDifferentMethodsfortheDetectionofSars-Cov-2SerumAntibodyYUChao,YANGShao-ming,WANGShu

5、,ZHANGJia-jun*(DepartmentofRespiratoryMedicine,TheCentralHospitalofYingkou,Yingkou,115000,China)Abstract:ObjectiveTodetectnovelcoronavirus(SARS-CoV-2)immunoglobulinIgMandIgG,pa)nntherestsirif'nucleididrficction,explorethecharacter!stiesofdifferentdetectionmethods,anditwpthefeasiilibytandcostfola

6、rge-scalescreeningbydifferentmethods.Methods515totalofbloodmpleswerecoleltedfromYi即koufromApril13,2020toApril16,2020TheserumantibodyIgMofsars-0v-2wasdefectedbycolloida1go'dimmunochromatographyandmagneticparticlechemiluminescenceAnd4Gdetection,gettheresults,combinedwiththenucleicaciddetectionresu

7、Its,comparethespecificityoftheiromethods,evaluatethefeasibilityofitsappjeationinlarge-scalepopulationscrewing,ResultsThenucleicacidtestresultsof515caseswereallnegative.Theresultsofantibodydetectionwerecolloidalgoldimmunochromatography:IgGspecificity99.61%(2/515),IgMspecificity99.03%(5I515),doublepos

8、itivespecificity99.81%(1515);magneticparticlechemiluminescence:IgGspecificity95.34%(24515),IgMspecificity99.22%(4/515),doublepositivespecificity100%(0/515).Amongthe24IgGpositivesamplesdetectedbymagneticparticlechemiluminescencemethod,12(50%)sampleswerefoundwithS/COratiointherangeof1.001-1.500,5(20.8

9、3%)intherangeof1.501-2.000,and4(1667%)in(he(0%),from1.501to2.000(25%),andfrom2.001to2.001(75%).Conclusion1.Thesinglemethodofserumantibodydetectionisaffectedbyreagentqualityandothersubspeciesofcoronavirusantibody,resultinginahighfalse-positiverate,whichisnotsuitableforthepreliminaryscreeningofthepopu

10、lation.2.ThefalsepositiverateofIgGantibodydetectedbymagneticparticlechemiluminescencemethodishigh,whichcanbereducedbyadjustingitsinterpretationstandard.3.Thedetectionofserumantibodyhasrheadvantagesofconvenientoperationandcostsaving.Itisoneoftheimportantmethodstoimprovetheefficiencybyusingdifferentme

11、thodstodetectscrumantibodyandlarge-scalepopulationscreening.Keywords:Novelcoronavirus,NovelcoronavirusPneumonia,Chemiluminescence,Colloidalgo：dImrnunochromatography,Immunoglobulin新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是人畜共患的正单链RNA病毒，有包膜，属冠状病毒。该科分为。、B、R了四个属,SARS-CoV-2属于6族，被列为第7类冠状病毒，可引起新型冠状病毒肺炎(COVID-19)1,严重者可导致死亡。COVID-

12、19主耍通过呼吸道飞沫和密切接触传播，无症状感染者及SARS-CoV-2患者均为传染源，且人群普遍易感故早发小岫早皿"效控制皿°心"关淀。目前，明确的确诊标准包括：1.实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性；2.病毒基因测序，与已知的的新型冠状病毒高度同源；3.血清新型冠状病毒特异性IgG抗规和IgM抗体阳性；血清新型冠状病毒特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期较急，|生期4倍以卜升高"L研究表明，冠狄州Si至少饷码'种炫构夜白包拈勃夹安白spikeprotein.S坂白).小包B5精赏白(envekipeprotein.E白白>、

13、膜近线白(membranepTO-tein.Mifil3)以及核衣壳ifi臼N2HA).抗体检测的将异性主耍与抗隙位点.的迭肝有关,N步白和S策在是COVID-19怜测的主要抗炼位点.利用体待异性堵合的晾理.W通过抗嗯检测抗体的存在【5】，共果用的核洌方$去主妥有胶体金法和化学发光法.就止到6月4几全球输诊韧例己超过六百万例，对全球各国的政治，经济等方力面面产生了尸或的影响.我国夜情控刮己经进入内反弹的阶段.从武汉开始，各个城市开始道行大规模的人群播检，本文诂含抗体校测诂果，对于大埋模人群券检的使用方注进行讨论.1资料与方法1.1标本来源收集2020年4月13日至2020年4JJ16日营口地区

14、接收的515例调查对象的515份血清标本。1.2试剂胶体金免疫层析法为新型冠状病毒2019-nCoV抗体检测试剂盒(英诺特生物技术有限公司)，磁微粒化学发光法为新型冠状病毒(2019-nCoV)IgM抗体检测试剂盒(奥博赛斯生物科技有限公司)及新型冠状病毒(2019-nCoV)IgG抗体检测试剂盒(奥博赛斯生物科技有限公司)。1 3统计学处理采用SPSS210统计软件，计数资料用(%)表示，用软小检验，计量资料用"矿表示，用，检验，P<0.05示差异有统计学意义，2结果2 1515例调查对象不同检测方法抗体阳性结果(表1)515例调查对象均进行了核酸检测，结果均为阴性，抗体检测

15、结果分别为胶体金免疫层析法：IgG阳性2例，特异度9961%(2I515),IgM阳性5例，特异度9903%(5515),其中包括IgG及IgM均阳性1例，性特异度99.81%(1/515);磁微粒化学发光法：IgG阳性24例，特异度95.34%(241515),IgM阳性4例,特异度99.22%(4/515),无IgG及IgM均阳性对象，双阳性特异度100%(0/515)0两种方法均出现阳性结果的调查对象0例。表1515例调查对象不同检测方法抗体阳性结果胶体金免疫层析法磁微粒化学发光法IgGIgM双阳IgGIgM双阳例数1412440特异度(%)99.619903998195.3499221

16、00'2磁微粒化学发光法检测IgG抗体与IgM抗体阳性对象及结果(表2)其中IgG阳性的24例标本中,结果sl'co比值分布于1.001L500的标本12例(50%),分布于1.501、2.000的标本5例(20.83%),介于20014.000的标本4例(16.67%),大于4.001的标本3例(12.5%);IgM结果阳性的4例标本中,s/co比值分布于1.0011.500的标木0例(0%),介于1,5012.000的标本1例(25%),大于2.001的标本3例(75%).表2磁微粒化学发光法检测IgG抗体与IgM抗体阳性对象及结果IgG标本编号37465789115sco

17、值1.4921.1765.3463.1551.1442.741标本编号148154163216261275sco值1.7811.5831.6931.3471.2281.303标本编号281332333356359373sco值1.9381.2641.1091.7143.7171.454标本编号379400419423494515sco值1.0531.2791.0314.3212.0773.316IgM标本编号74155190238sco值24.0771.8643.1563.8441调查对象凝血功能相关指标筛检结果及例数(表3)本研充同时对调查结果的凝血功能进行了筛查，包括部分凝血活酶时间(aP

18、TT)，凝血酶原时间(PT),国际标准化比值(INR)及纤维蛋白原(Fbg),检测采用sysmexCA-1500全自动血凝仪器进行检验,国内有报导证实了不同一起的测定结果具有较好的相关，性12.结果显示.所有祯黄对皱;血功能均存在源戳倾向.表3调查对象凝血功能相关指标筛检结果及例数aPTTPTEbgINR结果范围n结果范围n结果范围n结果范围n>37.00s0313.00s034.00g'L300>12002300-37.00s515900-13.00s5152.00-4.00gL2150.80-1.20215W23.00s0W9.00s0W2.00gL0WO803003讨

19、论2种不同方法进行的抗体检测，特异度均在95%以上，另有国内研究表明，对46例新型冠状病毒肺炎确诊病例进行抗体检测，IgG及IgM均阴性患者为0例，由此可见，将血清抗体结果作为COVID-19感染诊断的重要辅助手段是切实可行的。但两种方法均存在较多的假阳性结果，其原因可能由于目前批准的抗体（IgG及IgM）检测试剂盒多为应急审批，未经过严格的特异性（与其他冠状病毒的交叉反应）测试，也未经过临床验证;此外,类风湿因子、嗜异性抗体、补体以及外源性干扰等因素也可能造成试验结果的假阳，性5J.另有大M研究表毗不同神冠状向毒Nfits滨H存任免疫交板应.11冠状病毒的N溯形贺1*1的免疫交又反应不仅弁在

20、亚磷内，也#在于不同亚剧何，WitCOVID19抗体检溺可受It他冲类抵状麻存的彩响.可能死有一定的停串性率6.蜂上所建，单一万法杭体校Ml的段III性率较高，W能受检Ml试制本身性质及其他亚种冠状心毒抗修的影响.故将某一单一方法用于无徒状人制的大舰模都检.用机次眼方法的姑果作为N定株准，诃能造或较多的状判,从而增加疾病筛查及管控的负担。值得一提的是，胶体金免疫层析法检测的IgG抗体，IgM抗体检测及磁微粒化学发光法检测的IgM抗体检测结果的特异度均在99%以上，而磁微粒化学发光法检测的IgG抗体阳性标本数远高于其他项目，且由表2可见，其s/co比值小于1.5的标本占阳性结果的50,小于2.0

21、00的标本占70.83%o而同一标本采用胶体免疫层析法检测IgG抗体结果提示阴性。针对这一结果，推测可能的原因1.调查对象确实存在IgG抗体阳性，但胶体金层析法提示其结果均为阴性，故考虑其中存在部分或大量假阳性标本，2.假阳性标本可能由于不同批号试剂本身及操作上的差别所致，由于本文中的标本均未用同种方法复测，故其结果暂不能断言。3.对于磁微粒化学发光法结果判读的标准，本文中阳性判读标准为s/co比值大于1.000,但表2可见大部分IgG抗体阳性的标本，其sico比值均相对较小，sco比值大于2.()01的仅7例(29.17%),大于4.001的标本3例(12.5%)。如调整阳性判读值为大于2.

22、001或4.001,则其特异度分别提升为98.64%及9961%。所以，本文建议可以通过调整判定标准，从而降低假阳性率，提高特异度。本文结果中的515例标本，分别均采用2种检查方法，其中存在单一方法阳性的标本，但两种方法阳性的标本之间无相互重叠。由此可见不同方法对于血清抗体的检测，可以有效的排除假阳性标本。调查对象经呼吸道咽拭子核酸检测确证均无COVID-19感染，也证实了这一设想。此外，血清抗体检测相比呼吸道咽拭子抗体检测，具有标本采集易标准化，操作简便，节约时间，且检测快速等优点。那么，可以将两种不同方法联合检测血清抗体，作为人群COVID-19感染的筛查手段，从而有效控制人群大规模筛检的成本。参考文献WORLDHEALTHORGANIZATION.ClinicalmanagementofsevereacuterespiratoryinfectionwhenMiddleEastrespiratorysyndromecoronavirus(MERS-CoV)infectionissuspected:interimguidanceJ.2015.1 中华预防医学会新型冠状