猪圆环病毒2型疫苗研究进展.docx

1、猪圆环病毒2型疫苗研究进展王晓军，王国珍2(1.浙江工业大学化学工程学院，浙江杭州3100142浙江水利水电学院后勤处，浙江杭州310018)摘要：疫苗免疫接种是防控猪圆环病毒2型(Porcinecinrovirustype2.PCV-2)的主要方式.PCV-2疫苗的研究与开发已成为国内外兽医工作者的关注热点。在国际市场上销售的商品化PCV-2疫苗主要包括亚单位疫苗、彼合病毒疫苗和灭活疫苗，其中PCV-2灭活疫苗已在我国规模化猪场中广泛使用。综述了近年来国内外各类PCV-2疫苗研究进展及存在的问题，以期为猪圆环病毒病的防制与PCV-2新型疫苗的研发提供参考。关键词：猪圆环病毒2型；传统疫苗；免

2、疫；基因工程疫苗中图分类号：S855.3；S852.5P文献标识码：A文章编号：1004-874X(2014)23-0106-05Researchprogressonvaccinesofporcinecircovirustype2WANGXiao-junWANGGuo-zhen2(1.CollegeofChemicalEngineering,ZhejiangUniversityofTechnology,Hangzhou310014,China;2.LogisticsDepartment,ZhejiangUniversityofWaterResourcesandElectricPower,Han

3、gzhou310018.China)Abstract:ItisaneffectivewaytocontrolPCV-2infectionbyvaccinationandthestudyonPCV-2vaccinesisoneofthehotresearchareas.SomecommercialPCV-2vaccines,includingsubunitvaccines,chimericvirusvaccinesandinactivatedvaccines,areavailableontheinternationalmarket,andtheinactivatedvaccineshavealr

4、eadybeenwidelyusedinChineseswinefarms.ThispaperreviewsthedevelopmentofPCV-2vaccines,thepotentialproblemsexistinginthestudy.ItmaybecomeausefulcontributortothecontrolmeasuresanddesignofnovelvaccinesforPCV-2.Keywords:porcinecircovirustype2;classicvaccine;immunity;geneengineeringvaccine猪圆环病毒2型(Porcineci

5、rcovirustype2,PCV-2)是圆环病毒科的一种无囊膜、二十面体对称、共价闭合、环状、单股DNA病毒，直径平均为17nm,是目前发现最小的动物病毒叫猪圆环病毒病(Porcinecircoviraldisease,PCVD)是由PCV-2引起的一系列疾病的总称，主要包括猪呼吸道疾病综合征(PorcinerespiratorydiseasecomplextPRDC).猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)、猪皮炎与肾病综合征(Porcinedermatitisandnephrophathysyndrome,PD

6、NS)以及繁殖障碍等疾病。此外，PCV-2跟新生仔猪的先天性震额(Congenitaltremor,CT)、增生性坏死性间质性肺炎(ProliferativeandnecrotizinginterstitialpneumoniatPNP)等有关。同时，PCV-2感染严重破坏易感动物的免疫系统，产生严重的免疫抑制，且易诱发多种细菌及病毒的协同感染或继发感染，给该病的防控带来口大困难。自1991年加收稿日期：2014-07-20基金项目：浙江省水利厅科技计划项目(RC0868)作者简介：王晓军(1989-).男.在读硕上生.E-mail；65397351l通讯作者：王国珍(1965-),女.高级工

7、程师，E-mail：hcgych拿大首次报道PMWS以来，PCV-2迅速在北美洲、南美洲、欧洲、亚洲、大洋洲和非洲各芥猪国家流行，严更威胁生猪养殖业的可持续发展。我国自2001年首次从猪群中分离得到PCV-2以来，山东、浙江、山西、广东、河南等省份相继报道该病发生，由PCV-2引起的PWMS近年在我国相关养猪地区呈暴发流行，对华南及河南北部地区的生猪产业造成巨大损失叫近年来，国内外学者对PCV-2的基因组学及分子流行病学做了大址的基础研究工作17。欧盟猪圆环病毒疾病委员会将PCV-2分为3个基因亚型，即PCV-2a、PCV-2b和PCV-2171。PCV-2a和PCV-2B是主要类型，PCV-

8、2b在当前自然感染中流行，被认为有较强的致病性。PCV-2c仅在丹麦有过报道.目前包括在丹麦无临床症状猪群中分离得到3个毒株同。近年来有关研究证明,PCV-2在西班牙等国家已发生基因亚型由PCV-2a向PCV-2b的转换性分子流行病学调查表明，19972003年瑞士等国猪场以PCV2a亚型为主，2004年后PCV-2b则越来越普遍，-般认为PCV-2B的毒力更强，是造成当前PCVD广泛流行的主要毒株网。目前，对于PCV-2造成的猪圆环病毒病尚无有效的治疗措施，而且圆环病毒对外界抵抗力强.猪场难将其净化，防控该病的主要手段是采用疫苗对易感动物进行预防接种。各国兽医研究人员及生物疫苗公司不断对PC

9、V-2进行深入研究，在研制安全有效的PCV-2疫苗方面取得了许多重要成果，为PCV-2引起的猪圆环相关疾病的防控起到了重要的作用。近年来，国内外研制成功并上市的PCV-2疫苗有1。多种(表1)叶勺这些疫苗的推广应用，为有效防控PCV-2感染发挥了重要作用。表1国内外PCV-2商品化疫苗及其特征疫苗名称公司抗原成分免疫猪群Circovac®Merial灭活PCV-2a病毒母猪及3周龄以上仔猪IngelvacCircoFLEX®BoehringerIngelheimCap蛋白3周龄以上仔猪Circumvent®Intervet(Merck)Cap蛋白3周龄以上仔猪Po

10、rcilis®PCVSchering-Plough(Merck)Cap蛋白3日龄以上FosteraPCVPfizer灭活P(：Vl-2a嵌合病毒3周龄以上仔猪(formerlySuvaxyn®PCV2OneDose)圆环病毒灭活疫苗哈尔滨维科PCV-2aLG株灭活全毒3周於以上仔猪圆力佳成都夭邦PCV-2BDBNSX-07株灭活全毒仔猪圆克清南农商科PCV-2bSH株灭活全毒母猪及3周龄以上仔猪圆克消洛阳普莱克PCV-2bSH株灭活全毒繁殖母猪及3周龄以上仔猪WI必净上海海利PCV_2aLG株灭活全毒繁殖母猪及3周龄以上仔猪1传统疫苗灭活疫苗和减毒活疫苗是传统疫苗的主要品种

11、，传统疫苗的开发研究和规模化生产主要是通过在不同种类易感动物、细胞系上传代使病原微生物减毒，或改变病原微生物培养条件，或通过理化方法将其灭活来完成的。1.1灭活疫苗PCV-2灭活疫苗是把含有PCV-2的组织或培养物通过物理、化学方法灭活，同时乂保持其免疫原性，然后加入佐剂乳化制备而成，是目前具有良好体液免疫效果并且技术上简单易行的一类疫苗。由于灭活疫苗具有便于贮存和运输、生物安全性好、基本不存在病毒散布风险、不对母源抗体产生显著干扰作用等特点，目前大规模研究开发及使用的一般是PCV-2全病毒灭活疫苗。例如法国梅里亚(Merial)公司开发的PCV-2全病毒灭活疫苗(Circovac®

12、),适用于繁殖母猪及3周龄以上仔猪的免疫，也就是通过获得母源抗体来预防仔猪发生PCV-2早期感染，在5周内能有效抵抗PCV-2野毒感染。Circovac®已于2006年在法国、德国、丹麦、英国和加拿大注册上市，并且经过在法国进行的免疫效力田间试验表明，经该疫苗免疫能够提高生猪的生产性能，有效降低育肥猪与保育仔猪的死亡率，同时可显著减少淋巴损伤叶气此外，刘长明等凹和姜平等网也进行了PCV-2灭活疫苗的研究与开发，大量田间试验表明，这些灭活疫苗具有良好的免疫保护效力与生物安全性，并且二者商品化疫苗已经上市，给养猪业带来巨大的经济效益C1.2减毒活疫苗减毒活疫苗又称弱毒疫苗，是通过连续传代

13、等方法减弱或去除野毒毒力而保留病原微生物免疫原性与增殖能力的一种疫苗形式。2004年Fenaux等皿将PCV-2分离株在PK-15细胞上传至120代(PCV-2VP120),PCV-2VP120比第1代PCV-2的滴度高。将PCV-2VP120接种猪后，发现接种猪只体内组织损伤显著减弱，病毒血症时间、血清中的病毒拷贝数都有明显下降。全基因组测序分析结果表明，PCV-2VP120基因组上有两处变异，而且两处变异全部位于ORF2上，表明两处变异能够提高PCV-2增殖能力的同时减弱病毒毒力，该结果对PCV-2减毒活疫苗的研究开发具有一定启发意义。国内外对PCV2弱毒疫苗研究的报道较少，目前还没有PC

14、V-2弱毒疫苗上市，主要原因可能与病毒毒力易返强、致弱毒株毒力评价困难等因素有关。2基因工程疫苗新型疫苗使用DNA重组或分子克隆技术，对致病微生物的基因进行人工改造，在降低其致病能力的同时，保留免疫原性，或者选择一个或多个致病微生物基因组中的目的基因克隆到适当的载体上，制成基因工程疫苗免疫易感动物，最终达到预防或控制动物疫病的目的。由于PCV-2在体外增殖病毒滴度较低，用常规方法难以培养，开发新型基因工程疫苗对于PCV-2的防控具有重要意义。目前，众多国内外兽医工作者正在从事PCV-2的基因工程疫苗的研究与开发，并有已经有若干新型疫苗产品成功注册上市。2.1活载体疫苗活载体疫苗免疫动物后可以同

15、时表达自身和插入的外源基因，产生针对自身和目的病原的保护性抗原，进而诱导机体产生对多个病原的抵抗力，从而实现一种疫苗预防多个疾病的目的。目前研究的PCV2病毒活载体疫苗有腺病毒载体疫苗羽、伪狂犬病毒载体疫苗翎、假杆状病毒载体疫苗闵、猪呼吸与繁殖综合症载体疫苗、噬菌体载体疫苗以及博德特氏菌载体疫苗等。钞安军等将PCV-2-ORF2基因插入到猪PRV弱毒株HB98中，成功构建了重组病毒PGO,并用该甫组病毒免疫6周龄雄性小鼠并检测分析了PGO的免疫原性.结果表明，该重组病毒能有效诱导小鼠产生针对PCV-2的特异性淋巴细胞增殖反应。Ju等将PCV-2ORF1基因和ORF2基因克隆入减毒伪狂犬病毒Ea

16、株(PRVTK-/gE-/LacZ-)成功得到重组活载体疫苗(PRV-PCV-2),经攻毒保护试验证明，该重组活载体疫苗能够有效诱导小鼠和猪产生针对PCV-2和PRV的抗体.并且免疫小鼠能够抵抗PRVEa株的致死性攻击。Liu等成功构建了融合表达PCV2ORF2基因与猪IFN-7基因的重组腺病毒rAd-ORF2-IFN-7，并证实rAd-ORF2-IFN-7在小鼠体内诱导产生PCV2特异性抗体的能力比单独表达Cap蛋白的rAd-ORF2强，表明猪IFN-7作为细胞因子佐剂可以显著增强Cap的免疫原性。邓晓辉等使用PPVVP2基因和PCV2Cap基因，成功获得重组病毒rPRV-V2C-AgE和r

17、PRV-AgEo结果证明，重组病毒rPRV-V2C-AgE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异，表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖。PCV2的活载体疫苗大量研究表明，PCV2活载体疫苗能够刺激机体产生特异性抗体，有效减少宿主病毒载量，如果能避免其所用活载体存在的生物学安全问题,PCV2的活载体疫苗在控制PCV2病毒感染上前景可观。2.2重组嵌合病毒疫苗猪圆环病毒重组嵌合病毒疫苗的基本原理是利用分子克隆技术，将具有PCV-2ORF2基因克隆于无致病性的PCV-1基因组中，也就是用具有致病性PCV-2ORF2基因置换无致病性的PCV-1ORF2基因，从而构建嵌合型PCV1-

18、2感染性DNA克隆，最后将其灭活制备成重组嵌合病毒疫苗。Liu等时将PCV-2ORF2基因克隆到缺失PCV-1ORF2的pSK-PCVlAORF2中，形成嵌合病谨(PCV1-2)分子克隆(pSK-sPCVl-2),经不完全酶切将PCV1-2嵌合体全基因组串联入pSK载体中，得到含串联双拷贝的嵌合型PCV1-2感染性DNA克隆.接种Balb/c小鼠14d后即有部分小鼠产生了针对PCV-2Cap蛋白的特异性抗体，表明该感染性分子克隆能够对易感动物产生良好的免疫保护。汪正亮等皿略成功构建的重组pSKdPCVl-2质粒转染Dulac细胞，传代培养后获得具有稳定感染细胞的重组嵌合型猪圆环病毒PCV1-2

19、,该重组病毒灭活后与ISA206VG佐剂乳化制成灭活苗，最后通过免疫效力试验来评价该疫苗的免疫保护效力。结果表明，该重组嵌合型PCV1-2灭活疫苗能够有效诱导宿主的体液免疫反应，能够对猪产生较好的保护效果°美国富道公司将致病性PCV2的ORF2克隆人PCV-1,替换PCV-1的()RF2,构建了PCV1-2嵌合病毒，灭活后制成疫苗，免疫后猪群的临床症状明显减轻，血液和淋巴组织中PCV2的病毒载虽、免疫猪死亡率以及发生PMWS的儿率下降，并且在母源抗体存在的情况下也可以达到很好的保护效果，目前在美国、加掌大、丹麦、墨西册等国家已注册使用吐刈。2.3核酸疫苗核酸疫苗又称DNA疫苗，是指将

20、编码抗原蛋白的外源基因与质粒载体重组，再用基因枪轰击或肌肉注射等方式接种，通过宿主细胞表达抗原蛋白，有效诱导易感动物产生体液及细胞免疫应答，以达到防控动物疫病的目的的一类疫苗形式。Aravindaram等网用构建的含PCV2ORF1、ORF2、ORF3的3种重组质粒单独或联合免疫小鼠,2周后加强免疫，结果发现ORF2/3与ORFI/2/3这2种质粒组合免疫后PCV2病毒载量显著减少,诱导产生的IFN-)、TNF-a、GM-CSF以及PCV2抗体水平均高于其他免疫组，小鼠的肺部病变也明显减轻。史小红等凶将PCV-2的Rep蛋白基因和Cap蛋白基因定向克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克

21、隆位点上，成功构建出其核表达质粒peDNA-ORFl-ORF2,并用该重组质粒免疫小鼠,2周后加强免疫，同时设置pcDNA-ORFl、pcDNA-ORF2、pcDNA3.1-(+)、PCV2全毒疫苗和PBS对照。结果表明，该重组质粒诱导产生PCV-2抗体水平与其他试验组相比差异显著。闫若潜等网分别用猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2/猪白介素-2(PoIL-2)嵌合重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PolL-2)、PCV2ORF2基因原核表达的rCap蛋白免疫10日龄健康仔猪，结果发现rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒对猪体的免疫和免疫保护效果

22、显著优于其他免疫组。核酸疫苗具有生物安全性好、能有效诱导易感动物产生持久特异性好的体液免疫和细胞免疫反应、T艺简单、同种异株交又保护等优点，但是目前还存在外源基因在体内的表达及其在体细胞中的转移可能会产生意外的免疫反应等诸多问题，目前DNA疫苗的研究还处在实验室阶段。2.4亚单位疫苗OFR2基因是PCV-2的主要抗原基因，它编码的PCV-2衣壳蛋白（Cap）被认为是病毒主要结构蛋白与免疫原性蛋由，并且PCV-2Cap蛋白可有效诱导易感动物产生体液免疫应答。目前国内外研究地比较多的是利用杆状病毒在真核表达系统中表达的PCV-2Cap,经自组装成类病毒粒子，最终制备得到PCV-2亚单位疫萌。国外已

23、有3种PCV2亚单位疫苗注册上市，分别是勃林格公司研制的IngelvacCircoFLEX®,Intervet公司研制的Circumvent*以及先灵葆雅公司研制的Porcilis®PCV”气Fort等研究了单剂量Porcilis智PCV对不同基因亚型、不同地区PCV-2感染的免疫保护效力，结果表明该疫苗对不同基因亚型、不同地区PCV-2感染均能提供较好的免疫保护，能够有效诱导免疫仔猪产生特异性体液免疫与细胞免疫，能有效降低病毒血症发生率与病毒载量，减轻对淋巴组织的损伤，同时鼻腔分泌物中PCV-2的排出量也显著减少。由于PCV-2亚单位疫苗研发成本较高，国内在该领域投入较少

24、，截止目前还没有PCV-2亚单位疫苗注册上市。刘丹等阿以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep、-rRep'和-rCap蛋白制备亚单位疫苗及PCV2灭活苗，分组免疫BALB/c鼠测定其抗体、中和抗体。结果表明，PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗能够提供良好的免疫保护效果，能够有效诱导小鼠产生明显的体液免疫应答，可以与PCV2野毒感染猪产生的抗Rep蛋白抗体相鉴别，具有较好的应用前景。亚单位疫苗不含核酸，避免病原扩散、基因重组、免疫抑制等的潜在危害，为解决由PCV-2疫苗研制产生的生物安全问题带来了希望；但是目前上市的亚单位疫苗均是使用杆状病毒表达系统生产抗原，该系统表达的Cap蛋白分泌到培养

25、基中可是实现蛋白在体外的正确折叠，并自我组装成VLP,具有较好的免疫效果，但是杆状病毒表达系统生产低效昂贵，所以寻找一套高效表达的表达系统将是实现该类疫苗大规模应用的关健。3展望随着对PCV-2研究的不断深入，PCV-2疫苗研究总体呈现出良好的发展态势，PCV-2全病毒灭活疫苗、PCV1-2嵌合病毒疫苗及基因工程亚单位疫苗相继上市实现商品化生产，对当前PCV-2感染起到一定控制作用。随着基因重组、细胞工程、分子克隆等现代分子生物学技术的发展，以活载体疫苗、DNA疫苗和亚单位疫苗为代表的PCV-2新型疫苗展现出巨大的应用潜力。但是PCV-2疫苗研制依然面临着诸多制约因素，如普遍使用的真核表达系统

26、低效昂贵；目前广泛使用的传统灭活疫苗，用繁殖能力低的PCV-2全病毒制备，其病毒滴度难以提高；活载体疫苗与核酸疫苗则存在外源基因污染的生物安全问题等。因此在现有的研究基础上，开发高效低廉、不存在生物安全风险、能够充分诱导体液免疫与细胞免疫的PCV-2新型基因工程疫苗是目前研究的趋势与方向。预测随着PCV-2新型疫苗的广泛使用及其佐剂的深入研究，相关快速诊断、鉴别诊断技术的快速发展，猪圆环病毒病将会得到有效防控。参考文献：I TischerI,GelderblomH,VettermannW,etal.Averysmallporcineviruswithcircularsingle-strande

27、dDNA(J|.Nature,1982,295:64-66.|2SegallsJ,AllanGM,DomingoM.PorcinecircovirusdiseaseJ.AnimHealthResKev,2005,6(2):119-142.3 李任峰，陈金山，赵坤，等.河南豫北地区猪“高热病”流行特征及病原学研究J广东农业科学,2011.38(15):92-95.4 NawagitgulP,MorozovI,BolinSR.etal.Openreadingframe2ofporcinecircovirustype2encodesamajorcapsidproteinJ.JGenVirol,200

28、0,81(9):2281-2287.5 KaruppannanAK,KwangJ.ORF3ofporcinecircovirus2enhancestheinvitroandinvivospreadoftheofthevirusUJ.Virology,2011,410(1):248-256.6 RamamoorthyS,MengXJ.Porcinecircoviruses:aminusculeyetmammothparadox|J,AnimHealthResRev,2009.10(1):1-20.7 SegallsJ,OlveraA,Grau-RomaL,etal.PCV-2genotypede

29、finitionandnomenclature/.VetRec,2008,162(26):867.8 DupontK,NielsenE0,BaekboP,etal.GenomicanalysisofPCV2isolatesfromDanisharchivesandacurrentPMWScase-controlstudysupportsashiftingenotypeswithtimeJ.VetMicrobiol,2008,128(1):56-64.9 CorteyM,PileriE,SibilaM,etal.Genotypicshiftofporcinecircovirustype2from

30、PCV-2atoPCV-2binSpainfrom1985to2OO8|J.VetJ,2011,187(3):363-368.10 WiederkehrDD,SydlerT,BuergiE,etal.AnewemerginggenotypesubgroupwithinPCV-2bdominatesthePMWSepizootyinSwitzerland.VetMicrobiol,2009,136(1):27-35.II ChaeC.Commercialporcinecircovirustype2vaccines:Efficacyandclinicalapplication(J.VetJ,201

31、2,194(2):151-157.12 BeachNM,MengXJ.Efficacyandfutureprospectsofcommerciallyavailableandexperimentalvaccinesagainstporcinecircovirustype2(PCV2)J.VirusRes,2012,164(1):33-42.13 OpriessnigT,PattersonAR,MadsonDM,etal.Comparisonoftheeffectivenessofpassive(dam)versusactive(piglet)immunizationagainstporcine

32、circovirustype2(PCV2)andimpactofpassivelyinducedimmunityonvaccination142(3):177-183.KumiannJ,SydlerT,Brugneradamsincreasesantibodytiter(PCV2)andimpactofpassivelyinducedimmunityonvaccination142(3):177-183.KumiannJ,SydlerT,BrugneradamsincreasesantibodytiterderivedPCV2vaccine-U.VetMicrobiol,2010,E,etal

33、.Vaccinationofandimprovesgrowthparametersinfinisherpigssubclinicallyinfectedwithporcinecircovirustype2(JJ.ClinVaccineImmunol,201i,18(10):1644-1649.刘长明.危艳武,陆月华，等.猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)的研制与应用J布牧兽医科技信息,2010(9):29-30.萤信田.李玉峰.姜平，等.猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究J.富牧兽医学报,2008,39(5):639-644.FenauxM,OpriessnigT,HalburPG,et

34、al.Twoaminoacidmutationsinthecapsidproteinoftype2porcinecircovirus(PCV2)enhancedPCV2replicationinvitroandattenuatedthevirusinvivoJ.JVirol,2004.78(24):13440-13446.WangX,JiangW,JiangP,etal.Constmctionandimmunogenicityofrecombinantadenovirusexpressingthecapsidproteinofporcinecircovirus2(PCV2)inmiceJ.Va

35、ccine,2006,24(16):3374-3380.官婷，张守峰，刘晔，等.表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组笈制缺陷型人5型腺病毒的构建及小鼠免疫试验J.病毒学报,2013:7.RoquesE,GiraniA,GagnonCA,etal.Antibodyresponsesinducedinmiceimmunizedwithrecombinantadenovectorsexpressingchimericproteinsofvariousporcinepathogens(JJ.Vaccine.2013,31(24):2698-2704.ChiJN,WuCY,ChienMS,etal.Thep

36、reparationofporcinecircovirustype2(PCV2)virus-likeparticlesusingarecombinantpseudorabiesvirusanditsapplicationtovaccinedevelopmentJ.JBiotechnol,2014,181:12-19.ChenY,GuoW,XuZ,ctal.AnovelrecombinantpReudorabiesvirusexpressingpanovinisVP2gene:ImmunogenicityandprotectiveefficacyinswineJ.VetJ,2011,8(1):1

37、-8.FanH,PanY,FangLetal.Constructionandimmunogenicityofrecombinantpseudotypebaculovinisexpressingthecapsidproteinofporcinecircovirustype2inmiceJJ.JVirolMethods,2008,150(1)：21-26.PeiY,HodginsDC,WuJ,eta).Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusasavector:immunogenicityofgreenfluorescentproteinandp

38、orcinecircovirustype2capsidexpressedfromdedicatedsubgenomicRNAs(JJ.Virology.2009.389(1):91-99.GacJ,WangY,UuZ,etal.PhagedisplayanditsapplicationinvaccinedesignJ.AnnMicrobiol,2010.60(1):13-19.KimT,ToanNT,SeoJ,etal.BordetellabronchisepticaaroAmutantasalivevaccinevehicleforheterologousporcinecircovirust

39、ype2majorcapsidproteinexpression|J.VetMicrobiol,2009,138(3):318-324.27 钞安军，付朋飞，郭晓庆，等.表达猪圆环病毒U型ORF2基因的页组猪伪狂犬病病在的免疫原性J.微生物学报,2014,54(2):211-217.28 JuC,FanH,TanY,etal.ImmunogenicityofarecombinantpseudorabicsvirusexpressingORF1-ORF2fusionproteinofporcinecircovirustype2JJ.VetMicrobiol,2005,109(3):179-190.|29LiuG,LuoM,ChenR,etal.ConstructionandimmunogenicityofrecombinantadenovirusexpressingORF2ofPCV2andporcineIFNgammafj.Vaccine,2011,29(47):8677-8682.|30邓晓辉.陈柳，叶伟成，等.共表达猪细小病毒VP2蛋白和猫圆环病毒2型Cap蚩白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定J.中国预防件医学报,2012,34(4):251-256.(311LiuX,WangX,SongY,etal.