实验九孚尔根（Feulgen）核反应染色法

1、实验九实验九 孚尔根孚尔根（FeulgenFeulgen）核反应染色法核反应染色法o一、实验目的一、实验目的 1 1、学习孚尔根核反应染色法，鉴、学习孚尔根核反应染色法，鉴定染色体、定染色体、DNADNA的存在。的存在。 2 2、探究水解时间及温度对孚尔根、探究水解时间及温度对孚尔根核反应的影响。核反应的影响。 二、实验原理二、实验原理o 碱性品红原呈品红色，当与亚硫酸作用时还原，使碱性品红原呈品红色，当与亚硫酸作用时还原，使醌型结构变为苯型结构，由品红色变为无色透明的醌型结构变为苯型结构，由品红色变为无色透明的亚硫酸品红碱亚硫酸品红碱( (即即SchiffSchiff试剂试剂) )，当它与醛

2、基作用时，当它与醛基作用时，其分子式又恢复为醌型结构，呈现紫红色。其分子式又恢复为醌型结构，呈现紫红色。o 水解时水解时DNADNA中嘌呤碱基与去氧核糖之间的糖苷键打中嘌呤碱基与去氧核糖之间的糖苷键打断，使嘌呤脱下，并使去氧核糖断，使嘌呤脱下，并使去氧核糖C-1C-1位置释放醛基位置释放醛基与席夫试剂反应显紫红色。细胞中只有与席夫试剂反应显紫红色。细胞中只有DNADNA才具有才具有这种专一反应，因此可鉴定这种专一反应，因此可鉴定DNADNA的存在。的存在。 三三 、实验方法和步骤、实验方法和步骤o （一）材料准备（一）材料准备 取一洋葱鳞茎，置于盛满水的小烧杯取一洋葱鳞茎，置于盛满水的小烧杯上

3、使其长出新根。待根尖长上使其长出新根。待根尖长2cm 2cm 时，于时，于上午上午8 8时剪下根尖进行预处理、固定、保时剪下根尖进行预处理、固定、保存（请参考实验一）。存（请参考实验一）。 （二）水解（二）水解 取准备好的洋葱根尖，装到青霉素瓶中，水洗三取准备好的洋葱根尖，装到青霉素瓶中，水洗三次，换次，换1M HCl1M HCl洗一次，倾去，换入预热洗一次，倾去，换入预热6060的的1M 1M HClHCl，覆盖样品即可，放入恒温水浴锅中在，覆盖样品即可，放入恒温水浴锅中在6060下下水解水解1010分钟，然后吸去热分钟，然后吸去热1M HCl1M HCl，换入冷，换入冷1M HCl1M H

4、Cl洗洗一次，再水洗三次。一次，再水洗三次。 水解是本实验成败的关键。重要的是温度和时间。水解是本实验成败的关键。重要的是温度和时间。如果温度过高或时间过长，造成水解过度，核糖与如果温度过高或时间过长，造成水解过度，核糖与醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，不能醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，不能呈现颜色反应。呈现颜色反应。 （三）染色（三）染色 加入适量的加入适量的SchiffSchiff试剂，避光染色试剂，避光染色3030分分钟，然后用漂洗液漂洗钟，然后用漂洗液漂洗2 23 3次，水洗后压片。次，水洗后压片。（四）压片、镜检（四）压片、镜检 取一根尖置于载玻片，切下取一根尖置于载玻片，切下0.3cm0.3cm生长生长区部位，加一滴亮绿液对染一分钟，吸去亮区部位，加一滴亮绿液对染一分钟，吸去亮绿液，加一滴清水或醋酸水溶液压片，镜检，绿液，加一滴清水或醋酸水溶液压片，镜检，观察有丝分裂各个时期的染色体。观察有丝分裂各个时期的染色体。 以小组为单位，探究温度高低与酸水解以小组为单位，探究温度高低与酸水解时间长短对孚尔根核反应的影响。时间长短对孚尔根核反应的影响。 实验结束后，将探究结果报告老师并组实