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文档简介

专题整合专题整合克隆技术1.克隆技术的含义和克隆的条件(1)克隆技术的含义:包括分子克隆、细胞克隆和个体克隆三个水平。当用于分子、细胞水平描述时,指从众多的基因或细胞群体中通过无性繁殖和选择获得目的基因或特定类型细胞的技术操作,如PCR技术扩增DNA、细胞培养。当用于个体水平描述时,克隆就是一种通过单个细胞,特别是来自特定个体的单个体细胞进行无性繁殖,从而产生新个体的过程或技术,如植物组织培养、克隆动物。(2)克隆动物的条件具有包含物种完整基因组的细胞核的活细胞。具有能有效调控细胞核发育的细胞质物质。具备完成胚胎发育的必要的环境条件。2.分子克隆PCR技术扩增DNA(1)原理:DNA复制。(2)条件:DNA模板、引物、热稳定DNA聚合酶和4种脱氧核苷酸等。(3)扩增过程:模板DNA受热解旋为单链(变性)、冷却后,引物结合到互补DNA链上(复性)、在热稳定DNA聚合酶作用下,从引物开始进行互补链的合成(延伸)。3.细胞克隆(克隆培养法)动物细胞的培养(1)概念:把单个细胞从群体中分离出来单独培养,使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。(2)最基本要求:保证所建成的克隆来源于单个细胞。(3)过程(4)提高细胞克隆形成率的措施选择适宜的培养基;添加血清;以滋养细胞支持生长;激素刺激;用CO2调节pH。4.个体克隆(1)植

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