蜂蜜酶值快速检测的研究 - 标准参考比色板法-

1、提出的是,太湖猪和欧美猪种的繁殖力在经过同样比较后也存在这种现象,因而更有可能是后一方面的原因。也就是说妊娠早期胚胎死亡率较低的有可能妊娠后期胚胎死亡率较高,但目前还没有这方面的研究报道,因此有必要就妊娠后期胚胎死亡率是否也存在猪种差异进行研究。参考文献:1许振英.中国地方猪种种质特性M.杭州:浙江科学技术出版社,1989.2张照.中国太湖猪M.上海:上海科学技术出版社,1991.3T ergui M,et al.Chinese Pig Sym posiumM.France:1992,19-32.4赵尚吉,等.J.畜牧兽医学报,1988,19(1:30-34.5Xu shiqing.The h

2、ighly prolific characteristics and phisiological蜂蜜酶值快速检测的研究标准参考比色板法黄金林,王秉栋(扬州大学畜牧兽医学院,江苏扬州225009摘要:蜂蜜中淀粉酶活性值(酶值DN是评定蜂蜜质量的一项重要指标,新鲜的蜂蜜其酶值较高,营养价值好。本文在传统检测方法,试管碘反应目测法和分光光度比色法的基础上,结合两者的优点,采用标准参考比色板法,该方法具有方便、易行、快速可靠等优点。关键词:蜂蜜;淀粉酶值(DN;检测中图分类号:S896.1;S852文献标识码:B文章编号:0258-7033(200106-0033-03蜂蜜中含有少量的淀粉酶及自身的转

3、化酶,其中淀粉酶活性值(酶值DN是评定蜂密质量的一项重要指标,酶值的高低反映了蜂蜜的新鲜程度及其营养价值,新鲜的蜂蜜其酶值较高,营养价值好。但蜂蜜往往由于加工不当、贮存不良而破坏酶的活性或因人为地掺假等降低了酶的活性,致使蜂蜜品质下降。为了保证蜂蜜的品质,国际上规定普通蜂蜜中的淀粉酶值在8.0以上,我国规定出口蜂蜜的酶值在8.3以上,而所用的检测方法目前有二种:一是我国商业部标准规定的试管碘反应目测法;二是AOAC规定的分光光度比色法。此法也是国际上通用的方法。但是,就我国目前的检测条件,尤其对于基层收购和加工生产单位的检测条件而言,上述两法因存在诸多条件限制而未能广泛应用。第一种方法因操作繁

4、琐,工作量大,所用试剂多,检测费时(1h以上而难以使用。第二种方法因许多基层单位缺乏仪器及专门技术人员而不能普遍开展。因此,在实际工作中,蜂蜜的质量检测大多数还仅仅停留在感观检查上,这就使我国蜂蜜的品质长期得不到控制,也给一些人以可乘之机,给国家、人民造成巨大经济损失,同时,也影响了我国蜂密投放国际市场。为了加强我国蜂蜜质量的控制,做到方便、易行、快速可靠,我们查阅了有关资料,旨在AOAC法的基础上将上述两法结合起来,扬长避短,经我们的试验证明采用标准参考比色板法是可行和可信的。1原理蜂蜜中的淀粉酶在一定状态下酶解淀粉,一定时间后剩余的淀粉与碘络合成有色化合物,颜色由蓝色蓝紫色红紫色黄色,吸光

5、度在660nm波长下由高到低,其中吸光度0.235所对应颜色为红紫色,此时从达到0.235吸光度的时间得出相对应的酶植。为此,以0.235吸光度的管作为标准管(颜色为红紫色,结合碘目测法,只要记录到与标准管颜色一致所需的时间,便可得到蜜样的淀粉酶的估测值。2仪器与试剂(1721分光光度计;(250ml具塞试管、100ml容量瓶、吸管等;(3碘贮存溶液:称取K12.2g溶于4ml 水中,取0.88g碘溶于KI液中,并用水稀释定容到100ml;(40.0007m ol/L碘液:称取KI20g于烧杯中,加水40ml、溶解,加碘贮存液5.0ml混匀,转移至500ml容量瓶中定容,每隔两天重配;(51.

6、59m ol/L乙酸缓冲液(pH5.3:称取乙酸钠(CH3C OONa3H2O87g于400ml 水中,加冰乙酸10.5ml,可用pH计或精密pH试纸以乙酸钠或乙酸调整pH为5.3,以水定容量到500ml;(60.5m ol/LNaCl溶液:称取NaCl14.5g溶于煮沸过的水中,并定溶至500ml;(72%淀粉溶液:称取马铃薯淀33经验交流粉2.000g 于锥形瓶中加水90ml ,煮沸,不断搅拌,沸腾3min ,冷却,转移到100ml 容量瓶中,40水浴并定容。3分析方法3.12%淀粉溶液的标定取40时2%淀粉液5ml于盛有10ml 水的试管中混匀,再吸取此液1ml 于盛有10m10.000

7、7m ol/L 碘液及40ml 水的锥形瓶中,立即混匀,再以波长660nm ,杯径1cm ,水调零比色,吸光度要求在0.76+/-0.020之间,如达不到该值,可略微调整用水量。3.2标准参考比色板的制备称取蜂蜜10.0g 于50ml 具塞试管中,加1.59m ol/L 乙酸缓冲液5ml ,混匀,加0.5m ol/NaCl 液3ml ,混匀,加水定容至刻度。取上述10ml 待测液于试管中,置 40水浴15min ,加40保温的淀粉液5ml ,混匀记时,每隔5min ,吸1ml 上述酶解液于盛有10ml 碘液及40ml 水的锥形瓶中,混匀,于波长660nm ,杯径1cm ,以水调零比色,记下吸光

8、度A ,将吸光度A 为0.235的显色液倒入试管中,以此作为标准管,拍成彩色照片,制成标准参考比色板。3.3样品的测定称取20g 样品,处理及测定步骤同前,在吸取1ml 酶解液于盛有10ml 碘液、40ml 水的锥形瓶中混匀显色后,将显色液注入同样规格的试管中,其颜色与标准参考比色板比较,记录两者颜色达到一致或相近所需酶解的时间。3.4计算酶值(DN =150/t其中:t 为达到与标准参考双色板颜色一致或相近,酶解所需要的时间。4结果与讨论4.1条件选择样其他条件一致的情况下,分别称取不同量的蜜样(M 1进行酶浓度对酶解反应速度的影响试验,结果见表1。表1不同酶浓度对反应速度的影响蜜样(g 吸

9、光度达0.235所需时间(m in 样1样2样3样4样5 -18-表1表明520g 蜜样中的酶浓度与反应速度基本上成M 3t =常数的关系,与AOAC 法比较有M 0t 0/M 1t 1=1, 淀粉酶值=300M 0/M 1t 1,为加快检测速度,本法中选定取样20.0g ,则酶值可表示为:酶值(DN =300/2t 1。一处理,于不同水浴温度下测定吸光度A 达0.235所需时间(t 的试验,其结果见图1:图1不同水溶温度对酶活力的影响表明,在55以下,随着温度的升高酶的活力随图2不同pH 缓冲液对酶活力的影响表明,在pH4.56.5时酶的活性最大,且较稳定,43中国畜牧杂志2001年第37卷第6期验,其结果见下表:表2两种方法测定结果的比较样品分光光度法标准参考比色板法9.410.0表明:使用本法基本上能反映真实酶值,具有较好的可靠性。4.3在生产实际中的应用后,可由公式计算,酶值(DN =300/2t ,得出具体酶值的高低。断,酶值降低的原因是由于加工不良、贮存不当或掺假等。正常新鲜蜂蜜中一旦掺假,不论掺了何种物质,其酶值均将有所下降,甚至大幅度下降,详见表3。表3蜂蜜中掺入不同物质的酶值变化掺入物质饴糖糊精淀粉羧甲基纤维素钠酶值800表4蜂蜜中掺入蔗糖后酶值与还原糖的变化序号蜂蜜蔗糖酶值还原糖(%备注110%90%-感观不良22