核酸分离纯化技术

1、基因诊断基因诊断(gene diagnosis)是利用分子生物学及利用分子生物学及分子遗传的技术和原理，在分子遗传的技术和原理，在DNA水平分析基因的存水平分析基因的存在、鉴定疾病所涉及基因的置换、缺失或插入等突在、鉴定疾病所涉及基因的置换、缺失或插入等突变，以诊断各种感染性疾病和遗传性疾病，进行肿变，以诊断各种感染性疾病和遗传性疾病，进行肿瘤分子水平的研究。瘤分子水平的研究。主要技术及过程主要技术及过程区分或鉴定区分或鉴定DNADNA的异常的异常分离、扩增待测的分离、扩增待测的DNADNA片断片断基因探针的制备和标记基因探针的制备和标记n（一）核酸分子杂交（一）核酸分子杂交n（二）聚合酶链反

2、应（二）聚合酶链反应（PCR）n（三）单链构象多态性检测（三）单链构象多态性检测n（四）限制酶酶谱分析（四）限制酶酶谱分析n（五）（五）DNA序列测定序列测定n（六）（六）DNA芯片技术芯片技术要求：要求：1.不能存在对核酸结构功能有影响的物质不能存在对核酸结构功能有影响的物质2.降低蛋白、多糖、脂类分子污染降低蛋白、多糖、脂类分子污染，避免酸碱对核酸的磷酸二脂键的破，避免酸碱对核酸的磷酸二脂键的破坏坏.破碎.核酸核酸的紫的紫外吸外吸收曲收曲线线 n 50A260样本样本稀释倍数稀释倍数1000双链双链DNAug/uln 40A260样本样本稀释倍数稀释倍数1000单链单链DNARNA ug/

3、uln 33A260样本样本稀释倍数稀释倍数1000单链单链寡聚核苷酸寡聚核苷酸ug/ulDNA离心机离心机 水浴锅水浴锅EPEP管管微量移液器微量移液器仪器用具仪器用具琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶电泳电泳仪器仪器 电泳仪电泳仪 电泳槽电泳槽 灌胶模具等灌胶模具等Tris-硼酸（硼酸（TBE） Tris-乙酸（乙酸（TAE） Tris-磷酸（磷酸（TPE）常用电泳缓冲液常用电泳缓冲液 上样缓冲液上样缓冲液核酸染色剂核酸染色剂注意事项：注意事项：EBEB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。DNADNA分子量标准分子量标准不同种类不同种类DNA Marker

4、1.1.凝胶制备凝胶制备 制备制备1%1%琼脂糖凝胶。称取适量琼脂糖加入琼脂糖凝胶。称取适量琼脂糖加入 20mL 0.520mL 0.5TBETBE，加热至琼脂糖全部熔化，冷却至，加热至琼脂糖全部熔化，冷却至50-50-60 60 时，加入时，加入 EB EB 至终浓度至终浓度 0.50.5g/mLg/mL。缓慢倒入胶板，。缓慢倒入胶板，待胶凝固后拔出梳子。待胶凝固后拔出梳子。2.2.加样加样 取取1010l DNAl DNA样液与样液与 2 2l l 上样上样 buffer buffer 混匀，混匀，用微量移液器小心加入样品槽。用微量移液器小心加入样品槽。3.3.电泳电泳 接通电源，切记靠近加样孔的一端为负，电压接通电源，切记靠近加样孔的一端为负，电压为为15V/cm15V/cm（长度以两个电极之间的距离计算）（长度以两个电极之间的