十八味诃子利尿丸质量标准研究

1、十八味诃子利尿丸质量标准的研究韩秀兰（青海省海西州食品药品检验所 青海德令哈817000）摘 要 目的：建立十八味诃子利尿丸质量控制方法。方法：采用TLC法同时鉴别制剂中红花、山矾叶、小檗皮，采用HPLC方法测定制剂中没食子酸的含量。色谱柱：Agilent-C18柱（250mm×4.6mm，5µm）。甲醇-水-磷酸（10：90:0.01）为流动相。流速为1.0ml·min-1，检测波长273nm，柱温：25.结果：没食子酸在0.04-0.21µg范围内线性关系良好，r=0.9998，平均回收率为99.7%，RSD为0.8%。结论：该方法灵敏、准确、分离效

2、果好，可用于该制剂的质量评价。关键词 TLC； 没食子酸；十八味诃子利尿丸；HPLC中图分类号：R927.2 Quality standards of the 18 taste myrobalan diuretic pillHAN Xiu-lan （Qinghai Instititute Haixi Food and Drug Control Qinghaidelingha 817000）Abstract Objective: To establish the method of quality control of 18 taste myrobalan diuretic pill. Meth

3、ods: TLC at the same time to identify agents in safflower, Symplocos leaves, the Lithospermum Velvet Berberis skin, using an HPLC method for the determination of the content of the preparation of gallic acid. Column: Agilent-C18 column (250mm × 4.6mm, 5m). Methanol - water - phosphoric acid (10

4、:90:0.01) as the mobile phase. Flow rate of 1.0ml min-1, and the detection wavelength was 273 nm, column temperature: 25 ° C. Results: gallic acid 0.04-0.21g range a good linear relationship (r = 0.9998), the average recovery was 99.7%, RSD 0.8%. Conclusion: This method is sensitive, accurate,

5、good separation results can be used for the quality evaluation.Keywords TLC; gallic acid; 18 taste myrobalan diuretic pill; HPLC十八味诃子利尿丸为我州柴达木高科技药业有限公司的制剂产品，由诃子、红花、豆蔻、山矾叶、紫草茸、余甘子、小檗皮等十八味药制成，具有益肾固精，利尿。临床上用于肾病，腰肾疼痛，尿频，小便混浊，糖尿病，遗精等症。原标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准藏药第一册，其检验项目为丸剂的常规项，为了进一步控制制剂质量，本文对该制的质量控制方法进行了实验研究

6、，建立了处方中中红花、山矾叶、小檗皮的薄层鉴别方法，同时采用HPLC法对诃子中没食子酸的含量测定研究，取得了良好的效果。1 仪器与试药作者简介：韩秀兰，女，主管药师。学科及研究方向：药品检验。Tel：（0977）8225624， 美国Agilent1260高效液相色谱仪，美国Agilent1260紫外检测器，Agilent1260汉字色谱工作站，甲醇为色谱纯，水为新制重蒸馏水，没食子酸对照品（中国生物制品检定所，批号：110736-200732），十八味诃子利尿丸（柴达木高科技药业有限公司，批号：20110405，20110902，20111001）。2 方法与结果2.1薄层色谱红花的薄层鉴别

7、 取本品细粉2g，研细，加甲醇15ml，加热回流30分钟，冷却，滤过，滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取红花对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲酸（15:3:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，结果见图12.1.2山矾叶的薄层鉴别取本品细粉2g，研细，加甲醇15ml，加热回流30分钟，冷却，滤过，滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取山矾叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法中国药典2

8、010年版一部附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60-90）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，结果见图22.1.3小檗皮的薄层鉴别 取本品细粉7.5g，加水30ml、盐酸2ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液加氯仿振摇提取2次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。另取小檗皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶

9、液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7:1:2）为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，结果见图32.2含量测定色谱条件1色谱柱：Agilent-C18柱（250mm×4.6mm，5µm）。流动相：甲醇-水-磷酸（10：90:0.01）为流动相。流速为1.0ml·min-1，检测波长273nm，柱温：25.理论板数按没食子酸峰计算不得少于2500。2.2.2线性关

10、系考察22.2.2.1对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品8.24mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，精密吸取1.0ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，为对照品溶液。.2 线性关系测定 精密吸取贮备液0.5，1，1.5，2.0，2.5ml置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20µl进样，按上述色谱条件测定峰面积，以没食子酸峰面积积分值（X）为横坐标，以进样量（µg）（Y）为纵坐标，经线性回归，回归方程为Y=2.05×106X7.86×103,r=0.9998，线性范围为1µg。2.2.

11、3 精密度试验取对照品溶液，重复进样5次，没食子酸峰面积均值为181459，RSD为0.9%，精密度良好。重复性试验精密称取同批样品5份，按样品含量测定方法测定含量为112µg·g-1，RSD为1.1%，重复性良好。稳定性试验取同一批样品溶液，按上述色谱条件，分别在放置0，2，4，6，8，10，12h后，依法测定没食子酸峰面积均值为176321，RSD为1.4%，说明样品溶液12h内稳定性良好。回收率试验精密称取已知含量112.4µg·ml-1的样品5份，分别精密加入对照品溶液（41.2µg·ml-1）1ml，按样品溶液制备方法，制备

12、供试液，照样品含量测定方法测定，结果见表1表1 加样回收率测定结果（n=5）样品 取样量 样品含量 加入对照品 测得量 回收率 平均回收率 RSD (g) （µg） （µg） （µg） （%） （%） （%）1 0.56321 63.3 41.2 103.5 99.042 0.54624 61.4 41.2 101.9 99.32 3 0.54426 61.2 41.2 103.2 99.81 99.79 0.54 0.57837 65.0 41.2 106.4 100.195 0.52489 59.0 41.2 100.8 100.602.2.7 样品溶液制备取

13、本品适量，研细取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液转移至25ml量瓶中，用甲醇洗涤残渣与滤纸，洗液滤入同一量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45um）滤过，取滤液，即得。 阴性对照溶液的制备除诃子外，按处方比例称取其他各药材，按工艺制成不含诃子制剂，照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，即得。2.2.9 专属性考察分别精密吸取对照品溶液，样品溶液及阴性对照溶液各10µl注入色谱仪，记录色谱图，见图1。 A B CA。对照品 B.样品 C.阴性对照品图1 HPLC图从图1可见，阴性对照品溶液对测定无干扰。2.2.10样品测定 取3个批号样品，按样品溶液的制备方法制备，同法制备对照品溶液，分别进样10µl，记录色谱图，按外标法计算，结果见表2。表2 样品中没食子酸含量测定结果 批号 没食子酸含量µg·g-120110405 20110902 115.620111001 113.83讨论3.1 流动相的选择我们采用不同的流动相乙腈：水（13：87），乙腈：0.1%磷酸溶液(14:86),甲醇-