毛果甘青乌头中生物碱成分的提取和鉴定

1、毛果甘青乌头中生物碱成分的提取和鉴定         11-04-21 13:42:00     作者：林玲 陈东林    编辑：studa20【摘要】  目的：分离纯化鉴定毛果甘青乌头中的生物碱成分。方法：药材室温下自然烘干后，粉粹，用酸提碱沉法提取总生物碱，然后用硅胶柱层析法分离得到单体生物碱，利用化学法和光谱法鉴定其结构。结果：分离鉴定得到了10个化合物的结构，其中有六个内酯型C19二萜生物碱、四个C20二萜生物碱。结论

2、：得到了10个纯的单体生物碱。 【关键词】  毛果甘青乌头;分离;内脂型C19二萜生物碱乌头属(Aconitum)植物属于毛茛科(Ranunculaceae)，主要分布于北温带，全世界约350种，我国约170种1，是该属植物资源最丰富的国家2,主要分布于西南各省。该属植物中,中国药典正式收录作为药用的有两种，川乌(附子)和草乌,但实际作为药用者约40种3,具有镇痛，镇静，祛风湿，治疗跌打损伤，止咳，解热等功效。二萜生物碱是该属植物的主要及特征性化学成分。由于其结构复杂，生理活性显著，因而引起了植物化学工作者极大的兴趣。自上个世纪70年代以来，随着分析技术，特别是核磁共振技术在结构分析

3、鉴定中的广泛应用，二萜生物碱的化学研究也得到了迅速的发展。迄今为止，已对160多种乌头属植物进行了化学研究，所得到的成分多为C19二萜生物碱。二萜生物碱不仅是该属植物的有效成分和毒性成分,而且也被认为是植化分类上的特征性化学成分4。由于其结构复杂,生理活性显著,因而引起了植物化学工作者极大的兴趣。近30年来,由于波谱技术在结构解析中的广泛应用,二萜生物碱的研究得到了迅速的发展。迄今为止,临床药用的二萜生物碱有草乌甲素、高乌甲素和3乙酰乌头碱等。1实验部分1.1仪器、材料及试剂红外光谱用NicoletFTIR 2005XV仪测定，KBr压片;质谱用VGAutospel 3000型和Finigan

4、 LCQ型质谱仪测定;核磁共振谱用BruderACE 200和Varian UNION 400/54 核磁共振仪测定，溶剂为CDCl3，TMS为内标;旋光用Perkin Polarimeter 341型旋光光度仪测定;熔点仪用WRXTS显示热差分析仪测定(未校正)。薄层层析所用吸附剂为硅胶G以5CMC水溶液或5NaOH，5CMC溶液调板，105活化1小时使用，用改良的Dragendorffs试剂和20%的硫酸乙醇显色;常压柱层析所用硅胶均为青岛海洋化工厂制品(10-40)。氯仿为工业氯仿重蒸，石油醚，丙酮，甲醇均为分析纯，成都化学试剂厂生产。原植物2008年8月采自西藏那曲，由西藏食品药品检验

5、所格桑索朗副主任药师鉴定。1.2总生物碱的提取5公斤毛果甘青乌头全草粉末，采用0.05mol·L-1的盐酸75L进行渗漉至渗漉液无生物碱反应。将渗漉液用浓氨水碱化PH大于10，再用乙酸乙酯(30L)萃取3次。合并乙酸乙酯层，减压蒸馏，回收溶剂得总生物碱浸膏30.1克。1.3单体生物碱的分离总生物碱30克，以CHCl3溶解，溶于CHCl3的部分抽干得生物碱(18.7 g)，不溶于CHCl3的部分用甲醇溶解抽干得生物碱(12.0 g)。生物碱，以氯仿溶解，经胶柱层析(硅胶300g，环己烷-丙酮/5：11：1)梯度洗脱。洗脱液经TLC检查合并分为AD四个部分。A部分 (3.1 g)经硅胶柱

6、层析 (硅胶20g，环己烷-丙酮/5：1)洗脱得单体6benzoylheteratisine (15 mg)、A1和A2。A1经反复胶柱层析 (环己烷-丙酮4：1)洗脱得6acetylheteratisine (36 mg)，A2经胶柱层析 (环己烷-丙酮/5：13：1)梯度洗脱得6benzoylheteratisine (0.24 g) 和heteratisine (1.09 g)。B部分 (2.9 g)经胶柱层析 (石油醚-乙酸乙酯/3：11.5：1)梯度洗脱得B1、B2 和B3。B1部分经胶柱层析先用 (环己烷-丙酮/3：1)为洗脱剂再用(氯仿-甲醇-二乙胺/99：1：1)为洗脱剂洗脱得

7、dehydroheteratisine (0.82 g)。同样洗脱剂处理B2部分，得dehydroheteratisine (19 mg)。B3 经硅胶柱层析 (环己烷-丙酮/4：1)洗脱得dihydrogeyerine (10 mg)。C部分 (2.6 g)经胶柱层析 (环己烷-丙酮/4：13：1)梯度洗脱得C1和C2。C1部分经胶柱层析 (环己烷-丙酮/5：13：1)梯度洗脱得tongolinine (27 mg)以及tongolinine和venulol 的混合物，经反复胶柱层析(环己烷-丙酮/4：1)得venulol (18 mg), C2部分经胶柱层析 (氯仿-甲醇-二乙胺/98：1

8、：0.5)得heterophylline (11 mg),以及heterophylline和dihydrogeyerine混合物，经制备薄层层析得dihydrogeyerine (8 mg)。D部分 (2.0 g)经反复胶柱层析(氯仿-甲醇/95：5)得heteratisine (14 mg) 和guanfu base Z (14 mg)。生物碱 (12.0 g)未分离得到单体生物碱。1.4单体生物碱的结构测定毛果甘青乌头(Aconitum tanguticum(Maxim.)Stapf var.trichocarpum Hand.-Mazz)是甘青乌头的一个变种，属于乌头属(Aconitum

9、)植物5-6。对其化学成分的研究尚属于首次。从西藏那曲产的毛果甘青乌头中分得10个化合物。其中有六个内酯型C19二萜生物碱、以及四个C20二萜生物碱7，并应用IR、MS、HRMS、1HNMR、13CNMR、DEPT等光谱法和化学法鉴定了其化合物的结构为：6acetylheteratisine(1)8, 6benzoylheteratisine(2)8, dehydroheteratisine(3)9, heteratisine(4)8, heterophyllidine(5)10, heterophylline(6)10，dihydrogeyerine(7)11, guanfu base Z(

10、8)12, tongolinine(9)13, and venulol(10)14。(见表1)白色无定形粉末; ESIMS m/z： 434M+H+，分子式为C24H35NO6; 1HNMR (400 MHz，CDCl3)， ?: 0.87 (3H, s, H318)，1.04 (3H, t, J = 7.2 Hz, NCH2CH3)，2.08 (3H, s, OAc), 3.15(1H, t， J = 9.6 Hz), 3.23 (1H, d， J = 8.2 Hz), 3.32 (3H, s, OCH3), 3.58 (1H, d， J = 3.6 Hz, H17) 3.82 (1H, d

11、, J = 12.4 Hz ), 4.74 (1H, m), 5.32 (1H, d, J = 6.8 Hz), 13CNMR数据见表2。将该化合物的理化性质和波谱数据与文献8对照，可确定其结构。表1 甘青乌头中生物碱结构及分子式白色无定形粉末，ESIMS m/z：496 M+H+，分子式为C29H37NO6; 1HNMR (400 MHz，CDCl3) ?: 0.92 (3H, s, H318)，1.07 (3H, t, J = 7.2 Hz, NCH2CH3)，3.29 (3H, s, OCH3)，3.48 (1H, q， J = 10.4 Hz)，7.48 (2H, t， J = 7.2

12、 Hz，Bz), 7.56 (1H, m，Bz), 8.09 (2H, m， J = 4 Hz，Bz)13CNMR数据见表2。将该化合物的理化性质和波谱数据与文献8对照，可确定其结构。白色无定形粉末; ESIMS m/z：390 M+H+，分子式为C22H31NO5;1HNMR (400 MHz，CDCl3)， ?: 0.93 (3H, s, H318)，1.08 (3H, t, J = 6.8 Hz, NCH2CH3)，3.18 (1H, d, J = 13.2 Hz), 3.32(3H, s, OCH3), 3.74 (1H, s, H17), 3.88 (1H, s), 4.78 (1H

13、, t, J = 8 Hz),13CNMR数据见表2。将该化合物的理化性质和波谱数据与文献9对照，可确定其结构。白色无定形粉末; ESIMS m/z：392 M+H+，分子式为C22H33NO5; 1HNMR (400 MHz，CDCl3)，: 0.98 (3H, s, H318)，1.04 (3H, t, J = 6.8 Hz, NCH2CH3)，3.14 (1H, t, J = 8 Hz), 3.27 (3H, s，OCH3), 3.50 (1H, s, H17), 4.01 (1H, d， J = 7.6 Hz, H9), 4.42 (1H, s)，4.50 (1H, m, H?6)，

14、4.75 (1H, m, H13)，4.82 (1H, s),13CNMR数据见表2。将该化合物的理化性质和波谱数据与文献9对照，可确定其结构。白色无定形粉末; ESIMS m/z：378 M+H+，分子式为C21H31NO5;1HNMR (400 MHz，CDCl3)， ?: 1.05 (3H, s, H318)，1.08 (3H, t, J = 7.2 Hz, NCH2CH3)，3.39 (1H, d, J = 1.2 Hz，H17), 3.79(1H, br s，H9), 3.93 (1H, d，J = 7.2 Hz), 4.59 (1H, d， J = 7.6 Hz), 4.84 (1H, s, J = 7.2 Hz),13CNMR数据见表2。将该化合物的理化性质和波谱数据与文献10对照，可确定其结构。表2 化合物1-5的13C NMR数据 (100MH, CDCl3)白色无定形粉末; ESI