临床免疫学检验

1、 临床免疫学检验临床免疫学检验 (clinical immunological test)(clinical immunological test)范畴范畴(category)(category)：l1 1、感染性疾病、感染性疾病(infection disease)(infection disease)l2 2、自身免疫性疾病、自身免疫性疾病(autoimmune (autoimmune ) )l3 3、超敏反应性疾病、超敏反应性疾病(hypersensitivity (hypersensitivity ) )l4 4、免疫缺陷、免疫缺陷/ /增殖性疾病增殖性疾病(immunoabnorma

2、l (immunoabnormal deficiency/proliferation)deficiency/proliferation)l5 5、肿瘤、肿瘤(tumour)(tumour)l6 6、移植、移植(transplantation)(transplantation)手段手段(measure)(measure)与目的与目的(objective)(objective)：l应用免疫学的理论应用免疫学的理论(theory)(theory)与技术与技术(technique)(technique)，研究疾病的病因，研究疾病的病因( (致病致病) )(pathogenesis)(pathogene

3、sis)、发生、发生(occur)(occur)、发展、发展(develop)(develop)和转归和转归(turn)(turn)，并对疾病进，并对疾病进行行诊断诊断(diagnosis)(diagnosis)、疗效监测、疗效监测(curative (curative effect monitor)effect monitor)和预防和预防(prevent)(prevent)。 内容内容(content)(content)：l 1 1、体液免疫检测、体液免疫检测(humoral(humoral) )l 2 2、细胞免疫检测、细胞免疫检测(cellular (cellular ) )l 3 3

4、、相关临床疾病的免疫检测、相关临床疾病的免疫检测 感染性疾病感染性疾病 自身免疫性疾病自身免疫性疾病 超敏反应性疾病超敏反应性疾病 免疫缺陷免疫缺陷/ /增殖、肿瘤与移植增殖、肿瘤与移植一、一、体液免疫检测体液免疫检测( (test)test)l（一）血清免疫球蛋白检测（一）血清免疫球蛋白检测 (human serum immunoglobulin (human serum immunoglobulin ) )l（二）血清补体检测（二）血清补体检测 (human serum complement (human serum complement ) )l（三）体液免疫相关其他检测（三）体液免疫相

5、关其他检测 (others (others ) )（一）血清免疫球蛋白检测（一）血清免疫球蛋白检测l免疫球蛋白免疫球蛋白（Immunoglobulins, IgImmunoglobulins, Ig）是具有是具有抗体抗体活性或化学结构与抗体相似活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。的球蛋白。 可分为分泌型和膜型两种，前者主要可分为分泌型和膜型两种，前者主要存在于血清等体液中，如存在于血清等体液中，如AbAb；后者称膜；后者称膜型免疫球蛋白（型免疫球蛋白（membrane Igmembrane Ig，mIgmIg），），是是B B细胞膜上的抗原受体细胞膜上的抗原受体(receptor)(recept

6、or)。l抗体抗体（antibodies, Abantibodies, Ab）是）是B B细胞识别细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的，能抗原后增殖分化为浆细胞所产生的，能与与相应抗原特异性相应抗原特异性(specific)(specific)结合结合(recognize antigen and binding)(recognize antigen and binding)并并发挥免疫功能发挥免疫功能(antigen and antibody (antigen and antibody reaction)reaction)的球蛋白。的球蛋白。所有抗体都是免疫球蛋白，所有抗体都是免疫球蛋白，

7、但免疫球蛋白不都是抗体。但免疫球蛋白不都是抗体。临床检测的血清免疫球蛋白临床检测的血清免疫球蛋白健康人血清主要健康人血清主要IgIg含量含量(content)(content)（g/Lg/L）年年 龄龄 IgG IgM IgAIgG IgM IgA新生儿新生儿 6.66.617.5 0.0117.5 0.010.06 0.060.06 0.060.210.216 6个月个月 2.62.66.9 0.086.9 0.080.57 0.260.57 0.261.001.001 1 岁岁 3.03.09.5 0.149.5 0.140.91 0.370.91 0.371.501.502 2 岁岁 4

8、.74.712.3 0.2112.3 0.211.45 0.411.45 0.411.751.758 8 岁岁 6.36.315.0 0.4615.0 0.462.51 0.472.51 0.472.202.201212岁岁 7.07.015.5 0.5815.5 0.582.91 0.492.91 0.492.402.401818岁岁 7.37.315.5 0.7015.5 0.703.21 0.513.21 0.512.612.61成人成人 7.07.016.0 0.7016.0 0.703.00 0.403.00 0.402.802.80检测手段检测手段(method)(method)：

9、(Precipitation(PrecipitationReaction)Reaction) (In fluid phase)(In fluid phase) (In agar) (In agar)l （ringring、immune-turbidityimmune-turbidity、et alet al）（diffusiondiffusion）（electrophoresiselectrophoresis）(In fluid phase(In fluid phase )絮状沉淀试验：絮状沉淀试验：AgAgAbAb环环状状沉沉淀淀试试验验 透射免疫比浊：透射免疫比浊： （turbidimet

10、ryturbidimetry）在直射角度上测定光在直射角度上测定光的透射强度，以吸收的透射强度，以吸收光单位（光单位（A A）表示，）表示， A A值与复合物量呈正值与复合物量呈正比。比。l散射免疫比浊（终点散射散射免疫比浊（终点散射/ /速率散射）：速率散射）： （nephelometrynephelometry） 在光路的在光路的5 5-95-95角的方向上测量角的方向上测量散射光散射光强度强度和被测溶液中微粒浓度关系的一种方法。和被测溶液中微粒浓度关系的一种方法。 散射光散射光：一定波长的光线沿水平轴通过复合物：一定波长的光线沿水平轴通过复合物的混合液时导致光散射，散射光的强度与复合物的

11、混合液时导致光散射，散射光的强度与复合物量呈正比。量呈正比。 测定抗原抗体反应达平衡时测定抗原抗体反应达平衡时 ，终点（，终点（endend） 测定单位时间内抗原抗体形成最大量时测定单位时间内抗原抗体形成最大量时，速速 率（率（raterate）临床意义（临床意义（significancesignificance）：）：l1.1.血清多克隆血清多克隆IgIg水平增高水平增高 患者血清中各型患者血清中各型IgIg均升高，常见于各种均升高，常见于各种感染特别是慢性感染特别是慢性(chronic)(chronic)细菌感染，如肺结细菌感染，如肺结核、慢性支气管炎、慢性肝病自身免疫性核、慢性支气管炎、

12、慢性肝病自身免疫性(autoimmune)(autoimmune)疾病。疾病。SLESLE患者以患者以IgGIgG、IgAIgA升高升高较多见，类风湿性关节炎较多见，类风湿性关节炎IgMIgM增高为主。增高为主。l多克隆抗体多克隆抗体(polyclonal antibody):(polyclonal antibody): 由不同的由不同的B B细胞克隆产生的抗体细胞克隆产生的抗体. .l单克隆抗体单克隆抗体(monoclonal antibody):(monoclonal antibody): 由一个细胞克隆所产生的由一个细胞克隆所产生的只只识别单一识别单一 抗原决定簇的纯的抗体抗原决定簇的纯

13、的抗体. .l2.2.血清单克隆血清单克隆IgIg水平增高水平增高 患者血清中出现异常增多的单克隆蛋白患者血清中出现异常增多的单克隆蛋白（monoclonal proteinmonoclonal protein，MPMP（即（即M M蛋白）蛋白）达）达30g/L30g/L以上，而正常以上，而正常IgIg包括与包括与MPMP同类同类IgIg的含量的含量则显著降低。此类异常增多则显著降低。此类异常增多IgIg多无免疫活性多无免疫活性, ,主要见于免疫增殖性主要见于免疫增殖性(immunoproliferative)(immunoproliferative)疾病，如多发性骨髓瘤疾病，如多发性骨髓瘤(

14、multiple myeloma,(multiple myeloma,MM),MM),原发性巨球蛋白血症原发性巨球蛋白血症(primary macro-(primary macro-globulinemia)globulinemia)、重链、重链(heavy chain)(heavy chain)病、轻病、轻链链(light chain)(light chain)病等。病等。l新生儿、婴幼儿由于体液免疫功能尚不成新生儿、婴幼儿由于体液免疫功能尚不成 熟，免疫球蛋白的含量较成人低，熟，免疫球蛋白的含量较成人低，需按年需按年 龄组进行分析与判断龄组进行分析与判断。l关于血清关于血清IgEIgE和和

15、IgDIgD的测定：的测定： 血清总血清总IgEIgE为为0.130.130.92mg/L;0.92mg/L; 血清总血清总IgDIgD为为0.60.62.0mg/L;2.0mg/L; IgE IgE值升高多见于超敏反应性疾病值升高多见于超敏反应性疾病, ,骨髓瘤骨髓瘤 IgDIgD值升高多见于骨髓瘤等。值升高多见于骨髓瘤等。 异常免疫球蛋白检测：异常免疫球蛋白检测：lM M蛋白蛋白/ /（Monoclonal immunoglobulins Monoclonal immunoglobulins ） 由一种单克隆由一种单克隆B B淋巴细胞异常增殖时产生的淋巴细胞异常增殖时产生的 具有相同结构和

16、电场移动率的具有相同结构和电场移动率的IgIg分子或分分子或分子片段，一般不具有抗体活性子片段，一般不具有抗体活性, ,又称副蛋白又称副蛋白（paraproteinparaprotein）。）。l冷球蛋白（冷球蛋白（cryoglobulincryoglobulin） 指血清中一种蛋白，指血清中一种蛋白，44不溶解，不溶解，3030易于易于 凝聚，凝聚，3737便溶解。存在于多种疾病，参便溶解。存在于多种疾病，参 与炎症或免疫复合物引起的疾病。与炎症或免疫复合物引起的疾病。M M蛋白的检测（免疫固定电泳）蛋白的检测（免疫固定电泳） ( (immunofixation electrophoresi

17、s)immunofixation electrophoresis)操作：待检血清操作：待检血清 + 抗血清抗血清IgG IgA IgM 链链 链链 I抗原抗体对应沉淀抗原抗体对应沉淀并被固定，染色等并被固定，染色等结果结果(result)(result)：与与M M蛋白检测相关蛋白检测相关(related)(related)疾病：疾病：l1 1、多发性骨髓瘤（、多发性骨髓瘤（multiple myelomamultiple myeloma）l2 2、巨球蛋白血症（、巨球蛋白血症（macroglobulinemiamacroglobulinemia）l3 3、重链病（、重链病（heavy cha

18、in diseaseheavy chain disease）l4 4、轻链病（、轻链病（light chain diseaselight chain disease）l5 5、半分子病（、半分子病（half-molecule half-molecule immunoglobulin disease immunoglobulin disease）l6 6、恶性淋巴瘤、恶性淋巴瘤(malignant (malignant ) )l7 7、良性、良性M M蛋白血症蛋白血症(benign (benign ) )例例:l多发性骨髓瘤（多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM） 是浆细胞异常增

19、殖的恶性肿瘤，也称浆细是浆细胞异常增殖的恶性肿瘤，也称浆细胞瘤（胞瘤（plasmocytoma）。是）。是IPD中最常见中最常见的一种类型。的一种类型。1873年由年由Butzky首先并命名。首先并命名。MM的主要临床特征：的主要临床特征：进行性的骨质破坏，如骨质疏松和溶骨性病变，进行性的骨质破坏，如骨质疏松和溶骨性病变，常有骨痛、易骨折，为常有骨痛、易骨折，为MM最典型特征；最典型特征；大量的大量的M蛋白导致血液粘度增高蛋白导致血液粘度增高,呈高粘血症或沉积呈高粘血症或沉积于肾小管中，肾小管上皮细胞淀粉样变性，发生肾病于肾小管中，肾小管上皮细胞淀粉样变性，发生肾病综合征。损害中枢神经系统，可

20、出现神经功能障碍；综合征。损害中枢神经系统，可出现神经功能障碍；骨髓损伤可引起贫血、粒细胞和血小板减少；骨髓损伤可引起贫血、粒细胞和血小板减少；浆细胞浸润其他组织，如脊髓和神经根受压时引起浆细胞浸润其他组织，如脊髓和神经根受压时引起运动功能障碍等；运动功能障碍等；男性多发，平均发病年龄男性多发，平均发病年龄46岁左右；岁左右；恶性程度高，预后不良；恶性程度高，预后不良；易感染。易感染。MM的主要免疫学特征：的主要免疫学特征：血清中出现大量的血清中出现大量的M蛋白：蛋白：IgG35g/L, IgA20g/L, IgM15g/L, IgD2.0g/L，IgE2.0g/L；或尿中有本周蛋白（；或尿中

21、有本周蛋白（1.0g/24h尿）；尿）；血清中正常血清中正常Ig 水平明显降低；水平明显降低；骨髓中有无限扩增的异常浆细胞骨髓中有无限扩增的异常浆细胞（15%）为主要病理特征，组织证实有浆）为主要病理特征，组织证实有浆细胞瘤；细胞瘤；有溶骨性损害。有溶骨性损害。不同类型的多发性骨髓瘤不同类型的多发性骨髓瘤:类类 型型 发生率（发生率（%） 本周蛋白尿阳性（本周蛋白尿阳性（%） 临临 床床 特特 点点 IgG 5060 5070 典型症状典型症状 IgA 2025 5070 高粘综合征较多见高粘综合征较多见 IgD 12 90 骨髓外病变、溶骨病骨髓外病变、溶骨病 变多见，变多见，44%淀粉样变

22、淀粉样变 IgE 0.01 少见少见 IgM 1 90 高粘综合征最常见高粘综合征最常见非分泌型非分泌型 15 无无 溶骨病变较少，神溶骨病变较少，神 经系统损害较多见经系统损害较多见MM的发病机制的发病机制发病机制不明，与下列因素有关。发病机制不明，与下列因素有关。（1）是遗传与环境因素综合作用的结果。主要发生）是遗传与环境因素综合作用的结果。主要发生在在1号、号、11号、号、14号染色体，使浆细胞可发生永生化号染色体，使浆细胞可发生永生化（2）造血干细胞的异常）造血干细胞的异常 。形成浆细胞瘤。形成浆细胞瘤。（3）细胞因子的异常）细胞因子的异常 。MM患者可有患者可有IL-6异常增高，异常

23、增高，体外内实验证明体外内实验证明IL-6可促使可促使MM细胞增殖、生长和存细胞增殖、生长和存活，使活，使MM细胞增多。细胞增多。IL-6增高直接效应是抑制增高直接效应是抑制IL-4的的产生，从而抑制了正常的体液免疫功能。产生，从而抑制了正常的体液免疫功能。（4）与粘附分子、）与粘附分子、IL-6等信号传递受体和等信号传递受体和B细胞细胞12等抑制凋亡的受体高表达有关。等抑制凋亡的受体高表达有关。l本周蛋白（本周蛋白（bence-jones protein）: 1847年由年由Bence-Jones在病人的尿液中检在病人的尿液中检出而命名。已知出而命名。已知M蛋白不具有免疫活性，无蛋白不具有免

24、疫活性，无正常免疫球蛋白的功能，其轻链分子小可正常免疫球蛋白的功能，其轻链分子小可通过肾小球滤过从尿排除。通过肾小球滤过从尿排除。（本周蛋白是从尿中检出的（本周蛋白是从尿中检出的M蛋白轻链）蛋白轻链）冷球蛋白的检测冷球蛋白的检测( (定性定性) )：l冷球蛋白的冷球蛋白的定量分析定量分析鉴定沉淀中蛋白质类型，可将沉淀用冷缓冲鉴定沉淀中蛋白质类型，可将沉淀用冷缓冲液洗涤后，再溶于巴比妥缓冲液中，固定电液洗涤后，再溶于巴比妥缓冲液中，固定电泳或免疫电泳鉴定。泳或免疫电泳鉴定。l冷球蛋白检测的冷球蛋白检测的注意事项注意事项采血过程要保温，用品用预温，采血过程要保温，用品用预温，4下放置时下放置时间要

25、一周，正常人血清也可含有冷球蛋白，间要一周，正常人血清也可含有冷球蛋白，多数在多数在80g/L 以下。以下。（二）血清补体检测（二）血清补体检测l补体（补体（complementcomplement）是指血清中具有）是指血清中具有酶活性的一组不耐热球蛋白。酶活性的一组不耐热球蛋白。A. C1A. C1C9(C1qC9(C1q、r r、s)s)；B. BB. B因子、因子、D D因子、因子、P P因子、因子、H H因子；因子；C. C1C. C1抑制物、抑制物、C4C4结合蛋白、促衰变因子结合蛋白、促衰变因子 等。等。 溶血程度与补体含量的关系溶血程度与补体含量的关系:补体相关的实验室检测：补体

26、相关的实验室检测：l1 1、总补体溶血活性测定（、总补体溶血活性测定（CH50CH50） 反映主要补体反映主要补体C1C1C9C9成分的综合水平。成分的综合水平。 试管法：正常参考值范围试管法：正常参考值范围 50 50 100100U/mlU/ml 脂质体免疫法：其范围脂质体免疫法：其范围23 23 4646U/mlU/ml 测得值高：急性炎症、损伤、恶性肿瘤测得值高：急性炎症、损伤、恶性肿瘤 测得值低：补体消耗相关疾病测得值低：补体消耗相关疾病 补体合成降低（肝病）补体合成降低（肝病） 先天性缺陷先天性缺陷l2 2、补体单个成分检测（、补体单个成分检测（C3C3、C4C4、C1qC1q）

27、方法方法: :免疫比浊法、单向免疫扩散法免疫比浊法、单向免疫扩散法补体单个成分检测的意义补体单个成分检测的意义: :l若血清若血清C3含量增高，由于含量增高，由于C3是急性时相反应蛋是急性时相反应蛋白，在急性炎症、传染病早期、急性组织损伤、恶白，在急性炎症、传染病早期、急性组织损伤、恶性肿瘤、移植物排斥反应时增高。但是补体含量增性肿瘤、移植物排斥反应时增高。但是补体含量增高的临床意义不大。高的临床意义不大。l若血清若血清C3含量降低，见于合成能力低下，如慢性含量降低，见于合成能力低下，如慢性肝病；合成原料不足，如营养不良；补体消耗或丢肝病；合成原料不足，如营养不良；补体消耗或丢失增多，如系统性

28、红斑狼疮活动期、白血病化疗失增多，如系统性红斑狼疮活动期、白血病化疗后、大量失血、大面积烧伤。后、大量失血、大面积烧伤。l血清血清C4含量降低，见于多发性骨髓瘤、遗传性血含量降低，见于多发性骨髓瘤、遗传性血管性水肿、遗传性管性水肿、遗传性C4缺乏症等。缺乏症等。二、二、细胞免疫细胞免疫( (cellularcellular) )检测检测l参与机体细胞免疫反应的细胞参与机体细胞免疫反应的细胞 T T淋巴细胞淋巴细胞 B B淋巴细胞淋巴细胞 NKNK细胞（自然杀伤）细胞（自然杀伤） 中性粒细胞中性粒细胞针对细胞的数量针对细胞的数量(amount)(amount)、活性（功、活性（功能能 funct

29、ionfunction）、表面标志物）、表面标志物(membrane (membrane moleculesmolecules ) )表达表达(express)(express)程度。程度。T T细胞表面标志物细胞表面标志物( (主要主要):):1、羊羊RBC受体受体(E花环花环)2、T细胞抗原受体（细胞抗原受体（T cell receptor,TCR)3、CD3,CD4/CD8；CD28,152,154和和CD2等等（Cluster of differentiation；CD）4、丝裂原受体（、丝裂原受体（PHA/ConA）5、MHC分子（分子（MHV-类分子类分子）6、细胞因子受体、细胞因

30、子受体临床常见的细胞免疫检测项目临床常见的细胞免疫检测项目lT T细胞表面标志物检测细胞表面标志物检测(membrane molecules of T lymphocytes(membrane molecules of T lymphocytes) )通过检测通过检测T T淋巴细胞表面特有的标志物淋巴细胞表面特有的标志物识别，计数细胞总数；分析细胞亚群。识别，计数细胞总数；分析细胞亚群。方法：方法：E E玫瑰花环形成试验玫瑰花环形成试验(Erythrocyte rosette forming cell test)(Erythrocyte rosette forming cell test) T

31、 T细胞分化抗原（细胞分化抗原（CDCD）测定）测定(Cluster Differentiation of T cells(Cluster Differentiation of T cells ) )E E玫瑰花环形成试验玫瑰花环形成试验: :lT细胞表面有特异性绵羊红细胞细胞表面有特异性绵羊红细胞 (SRBC) 受受体，即体，即E受体。将受体。将T细胞与细胞与SRBC按一定比按一定比例混匀，置例混匀，置4至少至少2h或过夜，或过夜，T细胞表面细胞表面的的E受体能与受体能与SRBC结合形成以结合形成以T细胞为中细胞为中心，四周环绕心，四周环绕SRBC的花环样结构（见图的花环样结构（见图)镜检计

32、数可得总花环镜检计数可得总花环(Et)形成率，亦即形成率，亦即T细细胞的百分率。胞的百分率。 正常参考值范围正常参考值范围 Et 64.4Et 64.46.7%6.7% Ea 20% Ea 20%40% 40% 流式细胞术流式细胞术( (flowcytometry,FCM)flowcytometry,FCM) ：CDCD3 3+T+T细胞细胞 616185%85%；CDCD4 4+T+T细胞细胞 282858%58%；CDCD8 8+T+T细胞细胞 191948%48%；CD4+/CD8+TCD4+/CD8+T细胞细胞比值比值 1.661.660.33(0.33(1)1)。 T T淋巴细胞功能

33、检测淋巴细胞功能检测(function(function) )lT T淋巴细胞体外培养淋巴细胞体外培养, ,在有丝分裂原作用下在有丝分裂原作用下细胞内核酸与蛋白质合成增加细胞内核酸与蛋白质合成增加, ,细胞发生母细细胞发生母细胞化胞化(transformation )(transformation ), ,或经混合或经混合(mixed) (mixed) 淋巴细胞培养等来帮助细胞免疫功能评估。淋巴细胞培养等来帮助细胞免疫功能评估。方法：形态学方法：形态学(morphologic counting )(morphologic counting ) 3 3H-H-胸腺嘧啶核苷掺入法胸腺嘧啶核苷掺入法

34、 ( (3 3H-thymidine incorporation)H-thymidine incorporation) MTT MTT法法(MTT colorimetry)(MTT colorimetry) Mixed lymphocyte culture Mixed lymphocyte culture (one-way/two-way) (one-way/two-way) Lymphocyte transformation (%) Lymphocyte transformation (%) =(transferred lymphocyte) =(transferred lymphocyte

35、)200200100%100% Reference value: Reference value: 70%70%( (3 3H-thymidine incorporation):H-thymidine incorporation): T T细胞经有丝分裂原刺激，向细胞经有丝分裂原刺激，向母细胞转母细胞转化时胞内化时胞内DNADNA合成活跃，合成活跃， 3 3H-H-胸腺嘧啶核胸腺嘧啶核苷作为原料摄入，苷作为原料摄入， 3 3H-H-胸腺嘧啶核苷的胸腺嘧啶核苷的掺入量与细胞增殖相关（掺入量与细胞增殖相关（SISI2 2，正常），正常）Stimulating index (SI)Stimulati

36、ng index (SI) = mean CPM of the stimulated cells/ = mean CPM of the stimulated cells/mean CPM of the corresponding control mean CPM of the corresponding control Cells (unstimulated=control )Cells (unstimulated=control )lMTTMTT法法(colorimetry):(colorimetry): 细胞增殖代谢活跃，细胞内线粒体脱细胞增殖代谢活跃，细胞内线粒体脱 氢酶活性增高，通过氢

37、酶活性增高，通过线粒体能量代谢线粒体能量代谢 使得使得MTTMTT代谢形成紫色甲潜，代谢形成紫色甲潜，经细胞溶经细胞溶 解分析吸光度，估计细胞增殖程度解分析吸光度，估计细胞增殖程度(SI(SI2)2)。 methyl thiazolyte trazolium;MTTmethyl thiazolyte trazolium;MTT 四甲基偶氮唑盐四甲基偶氮唑盐, ,为一种染料为一种染料. .混合淋巴细胞培养混合淋巴细胞培养(mixed culture)(mixed culture)： 将将两个无关两个无关的淋巴细胞混合培养，的淋巴细胞混合培养，由于不同个体由于不同个体MHCMHC的差异，彼此都以对

38、方的差异，彼此都以对方为抗原发生反应，为抗原发生反应，导致导致T T细胞转化细胞转化。 T T细胞转化能力可通过细胞转化能力可通过3 3H-H-胸腺嘧啶胸腺嘧啶核苷掺入法、核苷掺入法、MTTMTT法，检测分析。法，检测分析。B B淋巴细胞表面标志物检测淋巴细胞表面标志物检测lB B淋巴细胞表面标志物：淋巴细胞表面标志物： 1 1、膜表面免疫球蛋白（膜表面免疫球蛋白（SmIgSmIg） 2 2、分化抗原（、分化抗原（CD19CD192222和和CD29CD29） 3 3、FcFc受体受体(Fc receptor)(Fc receptor) 4 4、补体受体、补体受体(complement rec

39、eptor)(complement receptor) 5 5、EBEB病毒受体等病毒受体等(EB virus receptor) (EB virus receptor) l检测方法检测方法(method)(method)： 1 1、免疫荧光、免疫荧光(fluorescence immunoassay)(fluorescence immunoassay)法测法测SmIgSmIg（用（用5 5种抗种抗IgIg抗体抗体+B+B细胞细胞荧光显荧光显微镜下计数）微镜下计数）. .参考值参考值: : SmIgSmIg+ +细胞总数细胞总数161628%28%，其中，其中G G+ + 4 413%13%；

40、M M+ +7 713%13%；A A+ +1 14%4%；D D+ +5 58%; E8%; E+ +0 01.5%1.5%。 2 2、流式细胞术、流式细胞术(flowcytometry,FCM)(flowcytometry,FCM)检测检测B B细胞细胞分化抗原分化抗原（CD19CD19）. .参考值参考值: CD19: CD19+ +细胞细胞 11.74%11.74%3.73%3.73%B B淋巴细胞功能检测淋巴细胞功能检测(function):(function):1 1、B B淋巴细胞增殖淋巴细胞增殖(proliferation)(proliferation)试试验验2 2、溶血空斑

41、、溶血空斑(hemolytic plaque)(hemolytic plaque)试验试验3 3、酶联免疫斑点法（、酶联免疫斑点法（ELISPOTELISPOT）4 4、体内试验（皮试）、体内试验（皮试）(/)(/) ELISPOT:ELISPOT:l用抗原包被固相，加入待检的抗体产生细用抗原包被固相，加入待检的抗体产生细胞，再诱导其抗体的分泌。胞，再诱导其抗体的分泌。l分泌的抗体与包被于固相的抗原结合，在分泌的抗体与包被于固相的抗原结合，在抗体形成细胞周围形成抗原抗体复合物。抗体形成细胞周围形成抗原抗体复合物。l再加入酶标记二抗，通过底物的显色反应再加入酶标记二抗，通过底物的显色反应镜下计数

42、着色斑点，并记录显色的深浅、镜下计数着色斑点，并记录显色的深浅、范围，可评估范围，可评估B B细胞功能细胞功能斑点计数，数据分析斑点计数，数据分析阳性阳性阴性阴性lA and B：检测标本：检测标本（刺激后的待测细胞）（刺激后的待测细胞）lE and F：检测抗体对：检测抗体对照（相同数量刺激后的照（相同数量刺激后的待测细胞，使用待测细胞，使用PBS替替代了检测抗体）代了检测抗体）lC and D：阴性对照：阴性对照（相同数量的未刺激细（相同数量的未刺激细胞）胞）lG and H：背景对照：背景对照（只加入培养基，无细（只加入培养基，无细胞）胞）lH1 and H12：阳性对：阳性对照（重组的

43、细胞因子）照（重组的细胞因子）检测模式和结果示意图检测模式和结果示意图 体内试验（皮试）体内试验（皮试）l正常机体对某种抗原建立了细胞免疫后，正常机体对某种抗原建立了细胞免疫后，如用相同的抗原做皮肤试验时，常出现阳如用相同的抗原做皮肤试验时，常出现阳性的迟发型超敏反应。本试验不仅可以检性的迟发型超敏反应。本试验不仅可以检查受试者是否对某种抗原具有特异性细胞查受试者是否对某种抗原具有特异性细胞免疫应答能力，而且可以检查受试者总体免疫应答能力，而且可以检查受试者总体细胞免疫状态。细胞免疫状态。体内试验（皮试）体内试验（皮试）: :lB细胞功能减低或缺陷，可表现为体内细胞功能减低或缺陷，可表现为体内

44、Ig 和血型抗体量下降或缺如，患者对外源性和血型抗体量下降或缺如，患者对外源性抗原的应答能力减弱或缺如，仅产生极低抗原的应答能力减弱或缺如，仅产生极低或不能产生特异性抗体。故临床定量测定或不能产生特异性抗体。故临床定量测定受检者血清中各种受检者血清中各种Ig量和相应血型抗体可量和相应血型抗体可判断判断B细胞功能，也是诊断体液免疫缺陷的细胞功能，也是诊断体液免疫缺陷的重要指标。反之，如血清中一种或多种重要指标。反之，如血清中一种或多种Ig或轻、重链片段异常增高，表明或轻、重链片段异常增高，表明B细胞产生细胞产生Ig的功能异常增高。的功能异常增高。 l4 4、自然杀伤细胞（、自然杀伤细胞（NKNK

45、）免疫检测：）免疫检测：NKNK为一类大颗粒淋巴细胞，其表面为一类大颗粒淋巴细胞，其表面无专无专门门的识别标志，具有细胞介导的细胞毒的识别标志，具有细胞介导的细胞毒作用能直接杀伤靶细胞。作用能直接杀伤靶细胞。NKNK具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节等功具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节等功效，还参与移植排斥、超敏反应等效，还参与移植排斥、超敏反应等NKNK功能功能测定：测定：包括乳酸脱氢酶释放率、包括乳酸脱氢酶释放率、5151CrCr释放等等释放等等 。 5 5、吞噬细胞（、吞噬细胞（phagocytesphagocytes）功能检测：）功能检测： 吞噬细胞吞噬细胞 中性粒细胞（中性粒细胞（neutro

46、philsneutrophils） 单核单核- -吞噬细胞吞噬细胞 （mononuclear mononuclear /macrophages/macrophages） 吞噬细胞的吞噬活力吞噬细胞的吞噬活力 趋化（趋化（trendtrend） 吞噬（吞噬（phagocytosisphagocytosis） 胞内消化（胞内消化（eliminationelimination） 细胞免疫相关的主要细胞因子检测：细胞免疫相关的主要细胞因子检测：细胞因子细胞因子(cytokines):(cytokines):由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的，介导和调节免疫、炎症反应

47、的小分的，介导和调节免疫、炎症反应的小分子多肽。细胞因子少入血，检测局部含子多肽。细胞因子少入血，检测局部含量有意义；量有意义；细胞因子具网络特性，联细胞因子具网络特性，联合检测多信息分析有意义。合检测多信息分析有意义。细胞因子的种类：细胞因子的种类：1 1、白细胞介素（、白细胞介素（ IL-1IL-11818）2 2、集落刺激因子（、集落刺激因子（CSFCSF）（粒、巨噬细）（粒、巨噬细胞和混合）胞和混合）3 3、干扰素（、干扰素（IFNIFN）（）（、）4 4、肿瘤坏死因子（、肿瘤坏死因子（TNFTNF）（）（ 、 ） 5 5、转化生长因子、转化生长因子家族家族/ / （SGFSGF）6

48、6、趋化因子家族、趋化因子家族7 7、其他（表皮生长、血小板衍生）、其他（表皮生长、血小板衍生）常见细胞因子检测方法：常见细胞因子检测方法：1 1、生物学检测法（促细胞增殖和增殖抑制、生物学检测法（促细胞增殖和增殖抑制、细胞毒活性、抗病毒活性、趋化活性等）。细胞毒活性、抗病毒活性、趋化活性等）。2 2、免疫学检测法（、免疫学检测法（ELISAELISA、RIARIA、免疫印迹、免疫印迹、免疫斑点）。免疫斑点）。3 3、分子生物学法（、分子生物学法（RNARNA印迹、印迹、PCRPCR等）。等）。4 4、单个细胞产生细胞因子测定法（反向溶血、单个细胞产生细胞因子测定法（反向溶血空斑、反向空斑、反

49、向ELISAELISA斑点）。斑点）。IL-2/ IL-2RIL-2/ IL-2RlIL-2IL-2主要由活化的主要由活化的CD4+CD4+细胞产生，细胞产生，通过自通过自分泌和旁分泌作用于分泌分泌和旁分泌作用于分泌IL-2IL-2的细胞本身的细胞本身或近邻的或近邻的CD4+CD4+和和 CD8+CD8+细胞，是机体免疫网细胞，是机体免疫网络中最重要的调节因子。络中最重要的调节因子。l为为评价机体免疫功能的重要指标之一评价机体免疫功能的重要指标之一。l体液中含量低难以直接检测。体液中含量低难以直接检测。l通常检测由刺激原（通常检测由刺激原（PHA/ConAPHA/ConA）诱导单个）诱导单个核细胞在体外产生其的能力来反映。核细胞在体外产生其的能力来反映。IL-4IL-4l主要由主要由ThTh细胞经抗原或丝裂原刺激后细胞经抗原或丝裂原刺激后产生产生可调节可调节B B细胞及其他多种免疫细胞细胞及其他多种免疫细