090221高二生物《土壤中分解尿素的细菌的分离与记数2》（课件）(NXPowerLite)

1、土壤中分解尿素的细菌的分离与记数土壤中分解尿素的细菌的分离与记数2在做本课题的实验时，在做本课题的实验时，A同学从对应同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌个菌落。但是，其它同学在同样的稀释度下只落。但是，其它同学在同样的稀释度下只选择出大约选择出大约50个菌落。个菌落。其他同学认为其他同学认为A同学的结果有问题。同学的结果有问题。他们分析可能是他们分析可能是A同学的培养基被杂菌污同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生

2、长。养基上生长。实例实例2但是，但是，A同学确信自己的实验操同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。但是，样品不同。但是，A同学在设计实验同学在设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也的时候并没有设置对照，因而此时也拿不出令同学们信服的证据。拿不出令同学们信服的证据。你能通过设置对照，帮助你能通过设置对照，帮助A同学同学排除上述两个可能影响实验结果的因排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？素吗？一是由于土样不同，二是由于培一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。养基污染

3、或操作失误。究竟是哪个原究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。因，可以通过实验来证明。 一种方案：一种方案：可以由其他同学用与可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果同学一样的土样进行实验，如果结果与与A同学一致，则证明同学一致，则证明A无误；如果结无误；如果结果不同，则证明果不同，则证明A同学存在操作失误或同学存在操作失误或培养基的配制有问题。培养基的配制有问题。另一种方案：另一种方案： 将将A同学配制的培养基在不加土同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。以证明培养基是否受到污染。 通过这个事例可以看出

4、，实验结通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，果要有说服力，对照的设置是必不可对照的设置是必不可少的。少的。实验设计实验设计土壤中分解尿素的细菌的分离与记数土壤中分解尿素的细菌的分离与记数一、基本思路一、基本思路明确实验目的明确实验目的 弄清实验原理弄清实验原理 确立实验条件确立实验条件 考虑材料用具可能考虑材料用具可能的作用的作用 设计实验方案设计实验方案播放视频播放视频“土壤中分解尿素的细菌的分离与记数土壤中分解尿素的细菌的分离与记数”土壤中某样品细菌的分离与计数土壤中某样品细菌的分离与计数 从肥沃、湿润的土壤中取样。先从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土铲去表层土3cm左右，再取样

5、，将样左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。品装入事先准备好的信封中。二、实验步骤二、实验步骤1土壤取样土壤取样 每个稀释度下需要每个稀释度下需要3个选择培养个选择培养基，基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。还有个牛肉膏蛋白胨培养基。还有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，准备好准备好无菌试管和移液管无菌试管和移液管。实验步骤实验步骤2.制备培养基制备培养基设计原则设计原则1、设立重复组，（、设立重复组，（至少涂布三个平板至少涂布三个平板）2、对照原则、对照原则a、判断培养基中是否有杂菌污染，需、判断

6、培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养将未接种的培养基同时进行培养b、判断选择培养基是否有选择作用，、判断选择培养基是否有选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基接种后培养需设立牛肉膏蛋白胨培养基接种后培养 将将10g土样加入盛有土样加入盛有90mL无菌生理无菌生理盐水的锥形瓶中盐水的锥形瓶中,充分摇匀，吸取上清液充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有，转移至盛有9mL水的无菌试管中，水的无菌试管中，依次等比稀释至依次等比稀释至107稀释度，并按照由稀释度，并按照由107至至103稀释度的顺序分别吸取稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺平板涂布操作

7、。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。序涂布平板，不必更换移液管。实验步骤实验步骤3、样品的稀释与涂布平板、样品的稀释与涂布平板为什么分离不同的微生物为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？用的稀释范围相同吗？选用稀释倍数为选用稀释倍数为103107的稀释液，的稀释液， 因为土壤中各类微生物的数量因为土壤中各类微生物的数量(单单位：株位：株/kg)是不同的是不同的，例如在干旱土壤例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌

8、中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为数约为2 185万，放线菌数约为万，放线菌数约为477万，万，霉菌数约为霉菌数约为23.1万。万。因此，为获得不同因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离进行分离，同时还应当有针对性地提供同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。选择培养的条件。测定土壤中细菌的数量，一般选测定土壤中细菌的数量，一般选用用104、105和和106倍的稀释液进行平板倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104和和105倍稀释液；测定真菌的倍稀释液；测定真菌的数量，一般选用数

9、量，一般选用102、103和和104倍稀释倍稀释液液。注：注： 样品的稀释样品的稀释实验步骤实验步骤4.微生物的培养与观察微生物的培养与观察将涂布好的培养皿放在将涂布好的培养皿放在30下下培养。比较牛肉膏培养基和选择培培养。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。好记录。不同种类的微生物，往往需要不不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般同的培养温度和培养时间。细菌一般在在3037的温度下培养的温度下培养12d；放线；放线菌一般在菌一般在2528的温度下培养的温度下培养57d；而霉菌一般在而霉菌一般在2528的温度下培养的

10、温度下培养34d。注：注：一般来说，在一定一般来说，在一定的培养条件下的培养条件下(相同的培相同的培养基、温度及培养时间养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定同种微生物表现出稳定的菌落特征。的菌落特征。EMB培养基与大肠杆菌代谢产物产培养基与大肠杆菌代谢产物产生紫色带金属光边的菌落生紫色带金属光边的菌落 当菌落数目稳定时，选取菌落数当菌落数目稳定时，选取菌落数在在30300的平板进行计数。在同一稀的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对释度下，至少对3个平板进行重复计数，个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。的稀

11、释度计算出样品中细菌的数目。实验步骤实验步骤5.细菌的计数细菌的计数每克土壤样品菌数每克土壤样品菌数 = 某稀释倍数的某稀释倍数的菌落平均数稀释倍数细菌培养菌落平均数稀释倍数细菌培养时所用的稀释液体积时所用的稀释液体积一一无菌操作无菌操作1.取土用的小铁铲的盛土样的信封在取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。使用前都需要灭菌。2.应在火焰旁称取土壤。在火焰附近应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。都要在火焰旁操作。三、操作提示三、操作提示二

12、二做好标记做好标记注明培养基种类、培养日期、平板注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。培养样品的稀释度等。三三规划时间规划时间四、结果分析与评价四、结果分析与评价（是否有杂菌污染）结果：（是否有杂菌污染）结果：1、对照的培养皿中无菌落生长、对照的培养皿中无菌落生长2、培养物中菌落数偏高、培养物中菌落数偏高3、菌落形态多样，菌落数偏高、菌落形态多样，菌落数偏高分析：分析：1、未被杂菌污染、未被杂菌污染2、被杂菌污染、被杂菌污染3、培养基中混入其它氮源、培养基中混入其它氮源结果：结果：1、牛肉膏蛋白胨培养基菌落数明显大于、牛肉膏蛋白胨培养基菌落数明显大于选择培养基的数目选择培养基的数目

13、2、在某一稀释度下至少有两个或两个平、在某一稀释度下至少有两个或两个平板的菌落数相接近板的菌落数相接近3、若选取的是同一种土壤，统计结果数、若选取的是同一种土壤，统计结果数目相差太大。目相差太大。分析：分析：1、选择培养基具选择作用、选择培养基具选择作用2、操作成功、操作成功3、误差太大，可能是什么原因引起、误差太大，可能是什么原因引起五、课题延伸五、课题延伸挑选选择培养基中不同形态的菌落接入挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否变红。含酚红培养基的斜面中，观察能否变红。CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3脲脲 酶酶湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校200

14、9年上学期制作 03六、相关链接六、相关链接1、空气中微生物总数的检测、空气中微生物总数的检测2、水中细菌总数的检测、水中细菌总数的检测3、牛奶中细菌的分离与计数、牛奶中细菌的分离与计数4、土壤中真菌的分离与计数、土壤中真菌的分离与计数1.某同学在稀释倍数为某同学在稀释倍数为106的培养基的培养基中测得平板上菌落数的平均数为中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为时所用稀释液的体积为0.1ml）( )A. 2.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 练一练练一练1.某同学在稀释倍数为某同学在稀

15、释倍数为106的培养基的培养基中测得平板上菌落数的平均数为中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为时所用稀释液的体积为0.1ml）( )A. 2.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 练一练练一练2.用稀释涂布平板法来统计样品中用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比活菌的数目，其结果与实际值相比（ ）A.比实际值高比实际值高B.比实际值低比实际值低C.和实际值一致和实际值一致D.比实际值可能高也可能低比实际值可能高也可能低2.用稀释涂布平板法来统计样品中用稀释涂布平板法来

16、统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比活菌的数目，其结果与实际值相比（ ）A.比实际值高比实际值高B.比实际值低比实际值低C.和实际值一致和实际值一致D.比实际值可能高也可能低比实际值可能高也可能低下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是A. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水葡萄糖、尿素、琼脂、水B. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、琼脂、水葡萄糖、琼脂、水C. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、尿素、琼脂、水尿素、琼脂、水D. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、