第三章-药物的杂质检查

1、第三章 药物的杂质检查药物分析教研室药物分析教研室刘巍刘巍第一节、药物的杂质和限量第一节、药物的杂质和限量第三节、药物中一般杂质的检查第三节、药物中一般杂质的检查第二节、第二节、杂质杂质的检查方法的检查方法第四节、特殊杂质的检查和鉴定方法第四节、特殊杂质的检查和鉴定方法主要内容主要内容 药物的纯度药物的纯度是是指药物纯净的程度。是反映药品质指药物纯净的程度。是反映药品质量的一项重要指标。量的一项重要指标。 杂质超标可使药物的杂质超标可使药物的外观性状、物理化学常数发外观性状、物理化学常数发生变化生变化，甚至影响，甚至影响药物的稳定性、使活性降低、毒副药物的稳定性、使活性降低、毒副作用增加作用增

2、加一、药物的杂质与纯度一、药物的杂质与纯度：第一节 药物的杂质与限量 影响药物纯度的物质统称为影响药物纯度的物质统称为杂质杂质，是指药物中，是指药物中存在的存在的无治疗作用无治疗作用或或影响药物的稳定性和疗效影响药物的稳定性和疗效，甚至甚至对人体健康有害对人体健康有害的微量物质。的微量物质。 为保证药品质量，确保用药安全、有效，必须为保证药品质量，确保用药安全、有效，必须检查杂质，控制药物纯度。检查杂质，控制药物纯度。注意：药物纯度与试剂纯度共同点均规定所含杂质的种类和限量不同点药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑 试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和

3、使用目的加以规定,它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用.化学试剂不能代替药品！例. 临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是（ ）A. 所含杂质的生理效应不同B. 所含有效成分的量不同 C. 所含杂质的绝对量不同D. 化学性质及化学反应速度不同E. 所含有效成分的生理效应不同A A了解药物中杂质的来源与种类了解药物中杂质的来源与种类 有针对性地制订杂质检查项目的有针对性地制订杂质检查项目的方法方法和和限度限度了解药物中可能存在的杂质了解药物中可能存在的杂质 决定杂质检查的决定杂质检查的项目项目二、杂质的来源与种类二、杂质的来源与种类二、药物杂质的来源二、药物杂质的来源杂质的来源生产

4、过程储藏过程1.合成过程中，原料不纯或反应不完全，中间体、副产物在精制中未除尽2.制剂过程3.试剂、溶剂、还原剂残留4.异构体、多晶体5.使用的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化生产过程中引入杂质例子生产过程中引入杂质例子1: 双氯非那胺双氯非那胺ClClClClSO2ClSO2NH2ClClSO2ClSO2ClClClSO2NH2SO2NH2氯磺化ClSO3H胺化NH4OH胺化NH4OH（反应不完全引入邻二氯苯）（分解产生氯化铵）（未洗净引入氯化物）阿司匹林及双水

5、杨酯的合成路线：阿司匹林及双水杨酯的合成路线：生产过程中引入杂质例子生产过程中引入杂质例子2：（第六章）：（第六章）ONaCO2ONaCOOHH+OHCOOHOHCOOH+(CH3CO)2OHOHOOC+OCOCH3COOH+CH3COOHCOOHOOOH+ H2O (1)(1)保管不善或贮存时间过长保管不善或贮存时间过长 (2) (2)包装不当包装不当2. 2. 贮藏过程中引入贮藏过程中引入药品外界条件温度、湿度、日光、空气、微生物等水解、氧化、分解、聚合、异构化、晶型转化、潮解、发霉。产生杂质水解：具有酯键、酰胺键、苷键结构的药物容易发生水解，酸、碱催化下及加热下水解更甚氧化：具有酚羟基、

6、巯基、亚硝基、醛基、不饱和键结构的药物，容易在空气中氧化水解和氧化水解和氧化是药物贮存过程常见的杂质来源是药物贮存过程常见的杂质来源OCOCH3COOHOOHOOHHOHOHNHCH2N(C2H5)2OHCl H2OHNH3CH3COOCCH3COOCH3NO2NNClHNO贮藏过程中引入的杂质例子贮藏过程中引入的杂质例子1:抗甲状腺药卡比马唑抗甲状腺药卡比马唑CHOC2H5ClCH2OC2H5CHOC2H5CH2OC2H5H3CHNNNCH3SHNNCH3SCOOC2H5NNSCOOC2H5CH3胺化CH3NH2，CH3OH环合KSCN缩合ClCOOC2H5,C5H5N重排（甲巯咪唑）贮藏过

7、程中引入的杂质例子贮藏过程中引入的杂质例子2：（第八章）：（第八章） 贮藏过程中水解盐酸普鲁卡因注射剂 进一步脱羧转化对氨基苯甲酸 苯胺 引起毒性反应NH2COOCH2CH2N(C2H5)2水解NH2COOH脱羧NH2OOO三、药物杂质的分类三、药物杂质的分类按来源分类按来源分类一般杂质一般杂质特殊杂质特殊杂质（有关物质）（有关物质）可用于考核生产工艺和生产可用于考核生产工艺和生产控制是否正常控制是否正常指示性杂指示性杂质质如：如：水分、水分、 Cl Cl- - 、SOSO4 42-2-等等特定药物特定药物在生产和贮藏过程在生产和贮藏过程中引入的杂质，随药物的不中引入的杂质，随药物的不同而不同

8、同而不同按毒性分类按毒性分类有毒杂质有毒杂质信号杂质信号杂质重金属、砷盐等重金属、砷盐等一般无毒，含量多少可反映一般无毒，含量多少可反映出药物的纯度情况出药物的纯度情况按化学类别按化学类别和特性分类和特性分类有机杂质有机杂质无机杂质无机杂质残留溶剂残留溶剂影响药品的稳定性，影响药品的稳定性，并反映生产工艺本并反映生产工艺本身的情况身的情况特定杂质非特定杂质四、四、杂质的限量杂质的限量1.1.杂质限量杂质限量 在不影响药物疗效、稳定性及不发生毒性的前在不影响药物疗效、稳定性及不发生毒性的前提下，药物中所含杂质的提下，药物中所含杂质的最大允许量最大允许量。杂质量杂质量 杂质限量杂质限量 杂质量杂质

9、量药品合格药品合格药品不合格药品不合格百分之几表示（百分之几表示（% %）百万分之几表示（百万分之几表示（ppmppm）限量表示方法：限量表示方法：杂质限量控制方法杂质限量控制方法定量测定定量测定限量检查法限量检查法比较法比较法灵敏度法灵敏度法标准对照法标准对照法杂质的限量检测方法：杂质的限量检测方法：灵敏度法：灵敏度法： 在供试品溶液中加入试剂，在试验条件下反应，不得出在供试品溶液中加入试剂，在试验条件下反应，不得出现现正（负）反应正（负）反应。 既以检测条件下反应灵敏度控制杂质限既以检测条件下反应灵敏度控制杂质限量。量。不得发生浑浊取本品水浴试液氨试液调至微碱性加水至5min1mlCaCl

10、5ml25g. 0如：乳酸中杂酸的检查如：乳酸中杂酸的检查葡萄糖酸度检查（实验二）：葡萄糖酸度检查（实验二）：取本品取本品2.0g2.0g，加新沸过的，加新沸过的冷水冷水20ml20ml溶解后，加酚酞指示剂液溶解后，加酚酞指示剂液3 3滴与氢氧化钠滴定滴与氢氧化钠滴定液（液（0.02mol/ml0.02mol/ml）0.2ml0.2ml，应显粉红色。，应显粉红色。 例：肾上腺素中肾上例：肾上腺素中肾上腺酮的检查腺酮的检查 供试品液供试品液(2.0mg/ml)盐酸溶液盐酸溶液样品样品 (0.05mol/L)A A310nm310nm规定：规定：A A310nm310nm0.050.05比较法：比

11、较法： 取一定量供试品，在规定条件下测定待检取一定量供试品，在规定条件下测定待检杂质杂质的参数（如吸光度），的参数（如吸光度）， 与规定限量比较，判断供试与规定限量比较，判断供试品中杂质限量。品中杂质限量。葡萄糖注射液中葡萄糖注射液中5- 5-羟甲基糠醛的检测（实验二）：羟甲基糠醛的检测（实验二）：精密称取本品适量（约相当于葡萄糖精密称取本品适量（约相当于葡萄糖1.0g1.0g），置于），置于100ml100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法在法在284nm284nm波长处测定，吸光度不得大于波长处测定，吸光度不得大于0.320.32操作

12、操作: :平行试验平行试验比较两比色管的比较两比色管的颜色或浊度颜色或浊度，判断杂质限量，判断杂质限量是否符合规定。是否符合规定。管管2（对照管）（对照管）管管1（样品管）（样品管）标准对照标准对照法：最常用法：最常用 取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶液，取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶液，与一定量供试品配成的供试品容液在相同条件下处与一定量供试品配成的供试品容液在相同条件下处理，比较反应结果，判断供试液中所含杂质限度是理，比较反应结果，判断供试液中所含杂质限度是否符合规定。否符合规定。%100供试品量允许杂质存在的最大量杂质限量%100SCVL或：或：2.2.限量计算公式限量计算公式

13、（标准对照法）（标准对照法）L：杂质限量S：供试品量C：标准溶液的浓度V：标准溶液的体积示例示例3-13-1：茶苯海明中氯化物的检查：茶苯海明中氯化物的检查（求杂质限量）（求杂质限量）管管2 2（对照管对照管）：）：取标准取标准NaClNaCl溶液（溶液（1010 g Cl/mlg Cl/ml）1.5ml1.5ml按相同步骤制备成对照液按相同步骤制备成对照液管管1 1（样品管样品管）：）：取本品取本品0.30g0.30g，加水，加水50ml50ml、氨试、氨试液液3ml3ml、10%10%硝酸铵溶液硝酸铵溶液6ml6ml，水浴加热，水浴加热5min5min，加，加硝酸银试液硝酸银试液25ml2

14、5ml，水浴，水浴15min15min，放冷后定容至，放冷后定容至200ml200ml，取滤液，取滤液25ml25ml置于置于50ml50ml纳氏比色管中，加纳氏比色管中，加稀硝酸稀硝酸10ml10ml，加水至，加水至50ml50ml，暗处放置，暗处放置5min5min%100SCVL%04. 0%1002002530. 05 . 110106C=10 g/mlV=1.5 mlS=?示例示例3-23-2：谷氨酸钠中重金属的检查：谷氨酸钠中重金属的检查（求取样量）（求取样量）管管2 2（对照管对照管）：）：取标准铅溶液（取标准铅溶液（1010 g Pb/mlg Pb/ml）体积为体积为V V m

15、lml，平行操作后比较颜色，平行操作后比较颜色管管1 1（样品管样品管）：）：取本品取本品1.0g1.0g，加水，加水23ml23ml溶解后，溶解后，加醋酸盐加醋酸盐bufferbuffer（pH3.5pH3.5）2ml2ml，依法检查，与对，依法检查，与对照管比色，颜色不得更深照管比色，颜色不得更深%100CLSV已知：重金属限量为已知：重金属限量为10ppm10ppmml0 . 110100 . 1101066示例示例3-33-3：肾上腺素中酮体的检查：肾上腺素中酮体的检查 取本品取本品0.2g0.2g，加盐酸溶液（，加盐酸溶液（9200092000）定容至）定容至100ml100ml，在

16、在310nm310nm处测定处测定 A A 0.050.05，求酮体限量，求酮体限量V样品=100 mlC酮体=?S样品=0.2 g%06. 01021015. 1%100ml/g1021002 . 0ml/g1015. 110043505. 0100)1,ml/g:%1 (100100113636%11%11%11样品酮体样品酮体CCLCEAEACcmlEEEEEclAcmcmcm一般杂质检查规则一般杂质检查规则 药品检验操作标准药品检验操作标准规定：规定： 1. 1. 遵循遵循平行操作原则平行操作原则 (1) (1)仪器的配对仪器的配对性：如性：如纳氏比色管应配对，刻纳氏比色管应配对，刻度

17、线高低相差不超过度线高低相差不超过2mm2mm (2) (2)对照品与供试品的同步操作对照品与供试品的同步操作 2. 2. 正确的取样及供试品的称量范围正确的取样及供试品的称量范围 3. 3. 正确的比色、比浊方法正确的比色、比浊方法 黑色的背景上黑色的背景上自上而下观察自上而下观察比浊法比浊法比色法比色法白色白色的背景上的背景上自上而下观察自上而下观察第二节 杂质的检查方法一、杂质的研究规范一、杂质的研究规范（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名称（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名称1.1.以杂质的化学名称作为项目名称以杂质的化学名称作为项目名称2.2.以某类杂质的总称作为项目的名称以某

18、类杂质的总称作为项目的名称3.3.以检测方法作为项目名称以检测方法作为项目名称（二）杂质检查项目的确定（二）杂质检查项目的确定（三）杂质限度的确定（三）杂质限度的确定（四）杂质检查方法的选择与验证（四）杂质检查方法的选择与验证杂质的检查方法杂质的检查方法 要求：专属、灵敏要求：专属、灵敏常用方法：常用方法： 化学分析法化学分析法 色谱分析法色谱分析法 光谱分析法光谱分析法 其它分析其它分析法法二、杂质的常用检查方法二、杂质的常用检查方法（一）化学方法：（一）化学方法：颜色、沉淀、气体颜色、沉淀、气体1. 显色反应检查法：显色反应检查法：目视比色法目视比色法ClOHOOH+ClOOOFe/3Fe

19、Cl3+O2NNH2CONHClOHClNO2+ NaNO2 + 2HClO2NN2+Cl-二盐酸萘基乙二胺显显色色氯氯硝硝柳柳胺胺ClCl5-氯水杨酸2-氯-4硝基苯胺O2NClNH2+ NaNO2 + 2HClO2NClN2Cl+ NaCl + 2H2O+NHCH2NH2NNNHCH2CH2NH2ClO2N二盐酸萘基乙二胺杂质：2-氯-4硝基苯胺5- 5-氯水杨酸检查（灵敏度法）：氯水杨酸检查（灵敏度法）： 取本品0.50g，加水10ml，煮沸2min，放冷，滤过，滤液加三氯化铁试液数滴，不得显红色或紫色2- 2-氯氯-4 -4硝基苯胺检查（标准对照法）：硝基苯胺检查（标准对照法）： 取本

20、品0.10g，加甲醇20ml，煮沸2min，放冷，加盐酸溶液（9 100 ）使成50ml，滤过，取滤液10ml，加亚硝酸钠试液5滴，放置10min，加2%氨基磺酸铵溶液1ml，振摇，再放置10min，加0.5%二盐酸萘基乙二胺溶液1ml，如显色，与2-氯-4-硝基苯胺10 g，加甲醇4ml和盐酸溶液（9 100 ）使成10ml溶液，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.05%）2. 沉淀反应检查法：沉淀反应检查法：例：盐酸肼屈嗪中游离肼的检查例：盐酸肼屈嗪中游离肼的检查H2NNH2 +CHOOHCHOHHNN+ H2O 方法：取本品0.10g，加水5ml与水杨醛的乙醇溶液（1 20）0.1

21、ml，1min内不得出现沉淀CHOCNH2NNH2 H2ONNNHNH2HCl3. 生成气体的检查法：生成气体的检查法：例：古蔡（例：古蔡（Gutzeit）氏法检查砷盐）氏法检查砷盐 原理：微量砷盐与新生态氢（Zn + 酸）生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色砷斑，与标准砷溶液生成的标准砷斑比较（黑色）（棕色）（黄色）3233233323322-33323HgAs3HBrAsH)HgBr(AsHgBr)(3AsHAsHHgBr)(2AsAs(HgBr)3HBrHgBr3AsHAsHOH33Zn9HZn3AsOAsH3Zn3HZn3As4. 滴定法：滴定法：定量测定杂质含量定量测定

22、杂质含量例例3-7：硫酸亚铁中高铁盐的检查：硫酸亚铁中高铁盐的检查642322222H3OSNa2NaIOS2NaI2KI2FeKI22Fe碘的显色薄层色谱法薄层色谱法(TLC)高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)气相色谱法气相色谱法(GC)毛细管电泳法（毛细管电泳法（CE）药物药物中中有关物质有关物质的检查的检查首选色谱法首选色谱法（二）色谱方法（二）色谱方法 根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析能力不同解析能力不同(R(Rf f值的差异值的差异), ), 加以分离和检查。加以分离和检查。1.1.薄层色谱法薄层色谱法(TLC)(TLC)灵敏

23、、简便、快速灵敏、简便、快速不需特殊的设备、费用低不需特殊的设备、费用低分离分离和鉴别同步和鉴别同步进行进行TLCTLC法特点：法特点：供 对LL0Rf=L/L0薄层色谱法薄层色谱法在杂质检查中的应用在杂质检查中的应用 1) 1) 杂质对照品法杂质对照品法 适用于杂质已知并有杂质对适用于杂质已知并有杂质对照品的情况。照品的情况。 方法：方法：根据杂质限量根据杂质限量, , 取供取供试品溶液和一定浓度的杂质对试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液照品溶液, ,分别点于同一薄层板分别点于同一薄层板上展开上展开, ,定位后进行检查。定位后进行检查。供 对供 对示例示例3-83-8：枸橼酸乙胺嗪中：枸橼酸

24、乙胺嗪中N-N-甲基哌嗪的检查甲基哌嗪的检查10 l 对照品溶液（50 g/ml）10 l 供试品溶液（50 mg/ml）展开剂：三氯甲烷-甲醇-氨溶液（13:5:1）供试品溶液如显相应供试品溶液如显相应杂质点，其颜色与对杂质点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，照品溶液主斑点比较，不得更深（不得更深（0.1%）%1.0/5010/5010%100mlmglmlglSCVL示例示例3-103-10：盐酸阿米洛利中有关物质检查：盐酸阿米洛利中有关物质检查 杂质对照品通常用来控制供试杂质对照品通常用来控制供试品中与之相同的杂质，但品中与之相同的杂质，但有时也有时也用来控制有关物质用来控制有关物质供 对

25、1 对210 g/ml4 g/mlABCDA斑点与斑点与C斑点对比斑点对比，荧光强度不，荧光强度不得更强；得更强；B斑点与斑点与D斑点对比斑点对比，荧光强度不，荧光强度不得更强得更强%5.0/2105/10105%100mlmglmlglSCVLA%2.0/2105/4105mlmglmlglLB2mg/ml 适用于杂质的适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品结构不能确定或无杂质对照品的的情况。情况。2)2)供试品溶液自身稀释对照法供试品溶液自身稀释对照法 将一定浓度供试品溶液进行稀释并将一定浓度供试品溶液进行稀释并作为对照溶液，然后与供试品溶液在作为对照溶液，然后与供试品溶液在同一板上展开比

26、较同一板上展开比较注意：注意：仅限于杂质斑点的颜色与主成仅限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或者相近的情况分斑点颜色相同或者相近的情况供 对供 对示例示例3-113-11：吡罗昔康中有关物质检查：吡罗昔康中有关物质检查取本品，加三氯甲烷制取本品，加三氯甲烷制成每成每1ml中含中含20mg溶液溶液稀释供试品稀释供试品，加三氯甲，加三氯甲烷制成每烷制成每1ml中含中含0.2mg溶液溶液ABCDA、B、C斑点与斑点与D斑点斑点对比对比，荧光强度不得更，荧光强度不得更强强%1202.0L3)3)杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法供 对1 对23-甲基黄

27、酮甲基黄酮-8羧酸羧酸ABCD示例示例3-133-13：盐酸黄酮哌酯中有关物质检查：盐酸黄酮哌酯中有关物质检查供试品溶液稀释液供试品溶液稀释液A斑点与斑点与C斑点（斑点（3-甲基黄酮甲基黄酮-8羧羧酸）对比酸）对比，颜色不得更深；，颜色不得更深；B斑点与斑点与D斑点对比斑点对比，颜色不得更，颜色不得更深深 无合适杂质对照品，或供试品显示的杂质斑无合适杂质对照品，或供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异时，采用点颜色与主成分斑点颜色有差异时，采用与供试与供试品相同药物作为对照作为品相同药物作为对照作为对照品对照品。4)4)对照药物法对照药物法供 对供 对 供 对符合杂质符合杂质限量要求限

28、量要求的对照品的对照品供1 供2 对示例示例3-143-14：马来酸麦角新碱马来酸麦角新碱符合杂质限量要求的符合杂质限量要求的马来马来酸麦角新碱酸麦角新碱对照品对照品5mg/ml5mg/ml5mg/ml5mg/ml0.2mg/ml0.2mg/ml不得显示杂质斑点不得显示杂质斑点TLCTLC在在杂质检查中的杂质检查中的应用应用杂质对杂质对照品法照品法自身稀自身稀释对照释对照二者并二者并用用对照药对照药物法物法已知杂质并已知杂质并能制备杂质能制备杂质对照品对照品无杂质对照无杂质对照品且杂质斑品且杂质斑点与主成分点与主成分斑点相近斑点相近多个杂质点，多个杂质点，有的有对照有的有对照品，有的没品，有的

29、没有对照品有对照品无杂质对照无杂质对照品，杂质斑品，杂质斑点与主成分点与主成分斑点有差异斑点有差异2.高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)分离效能高分离效能高专属性强专属性强灵敏度高灵敏度高分离分析同时进行分离分析同时进行特点特点: :HPLC检测杂质的方法：检测杂质的方法：外标法：外标法：也叫杂质对照品法，要求进样精确也叫杂质对照品法，要求进样精确加校正因子的主成分自身对照法：加校正因子的主成分自身对照法：杂质已知，以杂质已知，以主成分为对照（稀释的供试品溶液），用校正因主成分为对照（稀释的供试品溶液），用校正因子校正杂质峰的实测子校正杂质峰的实测面积面积不加校正因子的主成分自身对照法：

30、不加校正因子的主成分自身对照法：无杂质对照无杂质对照品时适用品时适用面积归一化法：面积归一化法：只用于结构相似，含量较高且限只用于结构相似，含量较高且限度范围较宽的杂质，粗略定量，不用于微量杂质度范围较宽的杂质，粗略定量，不用于微量杂质的的检查检查外标法外标法供试品：供试品：杂质杂质主成分主成分对照品：对照品：SASASSAA杂质限量：杂质限量：示例示例3-153-15：卡托普利中二硫化物的检查：卡托普利中二硫化物的检查供试品溶液：供试品溶液：0.5mg/ml0.5mg/ml对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品浓度对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品浓度5 5 g/mlg/ml色谱柱：色谱柱：OD

31、SODS柱柱流动相：流动相：0.01M0.01M硫酸二氢钠硫酸二氢钠- -甲醇甲醇- -乙腈（乙腈（70:25:570:25:5）检测波长：检测波长：215nm215nm 按峰面积计算，原料药中二硫化物含量不得超过按峰面积计算，原料药中二硫化物含量不得超过1.0%1.0%，片剂中不得超过片剂中不得超过标示量标示量的的3.0%3.0%不加校正因子的主成分自身对照法：不加校正因子的主成分自身对照法：供试品：供试品：杂质杂质主成分主成分SA对照品：对照品：RARA稀释稀释RSAkA杂质限量：杂质限量：注意：注意：杂质与主成分响杂质与主成分响应因子相近（应因子相近（0.91.10.91.1）示例示例3

32、-183-18：利巴韦林中有关物质检查：利巴韦林中有关物质检查供试品溶液：供试品溶液：0.4mg/ml0.4mg/ml对照品溶液：供试品溶液稀释至对照品溶液：供试品溶液稀释至4 4 g/mlg/ml色谱柱：色谱柱：SCXSCX（离子交换柱）（离子交换柱）流动相：稀硫酸溶液（流动相：稀硫酸溶液（pH2.5 pH2.5 0.1 0.1）检测波长：检测波长：207nm207nm 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个峰面积不得大供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个峰面积不得大于对照液主峰面积的于对照液主峰面积的0.250.25倍（倍（0.25%0.25%），各杂质峰面积之），各杂质峰面积之和不得大于对照液

33、主峰面积（和不得大于对照液主峰面积（1%1%）对照品主成分供试品杂质对照品主成分供试品杂质供试品主成分供试品杂质AACCCCL100100%25. 0100125. 0%110011加校正因子的主成分自身对照法：加校正因子的主成分自身对照法：SARACR=CSS（药物对照品）的相应因子（药物对照品）的相应因子为为R（杂质对照品）的一半（杂质对照品）的一半 AR=AS/2RRSSSRSRCACAAACC/22杂质与主成分响应因子相差较远时杂质与主成分响应因子相差较远时S：药物对照品R：杂质对照品X：未知杂质S：另一已知药物RRSSCACAf/SSXXSXSXCAACCCAA/不加校正因子时：不加

34、校正因子时：fCAACSSXX/加校正因子时：加校正因子时：SARASARARRSSCACAf/f 的测定：的测定：供试品供试品XA稀释稀释对照液对照液SAfCAACSSXX/杂质定量：杂质定量：SXAkfA杂质限量：杂质限量：杂质的校正因子直接载入各杂质的校正因子直接载入各品种质量标准中品种质量标准中示例示例3-163-16：红霉素：红霉素A A有关杂质检查有关杂质检查供试品溶液：供试品溶液：4mg/ml4mg/ml对照品溶液：供试品溶液稀释至对照品溶液：供试品溶液稀释至0.2mg/ml0.2mg/ml色谱柱：色谱柱：ODSODS流动相：磷酸缓冲溶液流动相：磷酸缓冲溶液- -乙腈（乙腈（40

35、:6040:60）检测波长：检测波长：215nm215nm 红霉素红霉素B B和红霉素和红霉素C C按校正后的峰面积计算（分别乘按校正后的峰面积计算（分别乘以校正因子以校正因子0.70.7、1.01.0），均不得大于对照溶液主峰面积），均不得大于对照溶液主峰面积（5%5%）A对照液红霉素B供试液红霉素7.0AAA对照液红霉素C供试液红霉素0.1AAABC面积归一化法：面积归一化法：主成分主成分1A2A3A4A5A限量543211AAAAAA溶剂峰溶剂峰 供试品中结构相似、相对含量较高且限度范围供试品中结构相似、相对含量较高且限度范围较宽的杂质含量的粗略参考。结构相差较大时可较宽的杂质含量的粗略

36、参考。结构相差较大时可能会有较大的定量误差。能会有较大的定量误差。HPLCHPLC在在杂质检查中的杂质检查中的应用应用外标法外标法加校正因加校正因子主成分子主成分自身对照自身对照法法不加校正不加校正因子主成因子主成分自身对分自身对照法照法面积归一面积归一化化有杂质对照品，有杂质对照品，且进样量能够且进样量能够精确控制精确控制没有对照品的没有对照品的已知杂质控制，已知杂质控制，杂质的杂质的校正因校正因子子和相对保留和相对保留时间载入质量时间载入质量标准中标准中没有杂质对照没有杂质对照品，且杂质与品，且杂质与主成分响应因主成分响应因子相近子相近供试品中结构供试品中结构相似、相对含相似、相对含量较高

37、且限度量较高且限度范围较宽的杂范围较宽的杂质含量的粗略质含量的粗略参考参考3. 气相色谱法气相色谱法(GC)检查方法检查方法: : 除与除与HPLCHPLC相同的方法外，还有相同的方法外，还有标准溶液加入法。标准溶液加入法。 用于药物中用于药物中挥发性杂质挥发性杂质的检查的检查, , 如药物中残如药物中残留溶剂、农药残留量等。留溶剂、农药残留量等。标准溶液加入法：标准溶液加入法：消除基体干扰消除基体干扰供试品供试品XAisA定量加入杂质定量加入杂质XXXXisCCCAA杂质定量：杂质定量：4. 毛细管电泳法毛细管电泳法(CE)外标法外标法加校正因加校正因子主成分子主成分自身对照自身对照法法不加

38、校正不加校正因子主成因子主成分自身对分自身对照法照法面积归面积归一化一化 例例3-21: 3-21: 地蒽酚中二羟基蒽醌的检查地蒽酚中二羟基蒽醌的检查（三）光谱分析（三）光谱分析法法1. 1. 紫外分光光度法紫外分光光度法OOHOH地蒽酚地蒽酚二羟基蒽醌二羟基蒽醌OOHOHO0.001%0.001%地蒽酚地蒽酚0.0009%0.0009%二羟基蒽醌二羟基蒽醌432nmA0.12两性霉素两性霉素A A和两性霉素和两性霉素B B的的UV-VISUV-VIS图谱图谱 例例3-21: 3-21: 两性霉素两性霉素B B中两性中两性霉素霉素A A的检查的检查 取本品，加少量取本品，加少量DMSODMSO

39、溶解后，加甲醇定量稀释溶解后，加甲醇定量稀释为为100100 g/mlg/ml的溶液，于的溶液，于305nm305nm波长处测定吸光度，波长处测定吸光度，不得超过不得超过0.400.40两性霉两性霉素素A两性霉两性霉素素B305nm2. 2. 红外分光光度法红外分光光度法用于药物中无效或低晶型的检查，如甲苯达唑用于药物中无效或低晶型的检查，如甲苯达唑3. 3.原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法（四）其它方法（四）其它方法1.1.热分析热分析法（法（Thermal analysisThermal analysis） 测定物质的物理化学性质与温度关系的仪器分析方法热重分析法热重分析法(Therm

40、ogravimetric Analysis,TGA)差热分析法差热分析法(Differential Thermal Analysis,DTA)差示扫描量热法差示扫描量热法 (Differential Scanning Calorimetry,DSC)1 1）热重分析）热重分析法法 ( (TGA) )T TW W供试品TGA热重曲线W 应用应用热天平在程序控温热天平在程序控温的条件下测量物质的质的条件下测量物质的质量随温度变化的热分析技术量随温度变化的热分析技术, ,可计算出样品在相应可计算出样品在相应温度范围内减失质量的百分率温度范围内减失质量的百分率. . 升华、气化、分解升华、气化、分解出

41、气体、失去水等出气体、失去水等G1G2G310008006004002000WT1T2T3398838635478134226T()草酸钙(CaC2O4H2O)的热重曲线在温度T1时 CaC2O4H2O CaC2O4+H2O在温度T2时 CaC2O4 CaCO3+CO在温度T3时 CaCO3 CaO+CO2特 点分析样品用量少分析样品用量少, ,适用于适用于贵重药材或在空气中容易氧化药物干燥失贵重药材或在空气中容易氧化药物干燥失重重测定测定测定速度快测定速度快 可用可用于判断结晶水或吸附水于判断结晶水或吸附水, ,并推断结晶水含量并推断结晶水含量. .2 2）差热分析）差热分析法法 ( (DT

42、A) )在程序控制温度在程序控制温度下，测量供试品下，测量供试品和惰性参比物和惰性参比物( (常常用石英砂、煅制用石英砂、煅制MgO)MgO)之间的之间的温度温度差差与与温度温度( (或时间或时间) ) 关系的热分析技关系的热分析技术术TT供试品发生吸热反应温度低于参比物质从而产生吸热峰参比物质供试品发生放热反应温度高于参比物质从而产生放热峰草酸钙(CaC2O4H2O)TG和DTA曲线DTA用途：熔点测定熔程T T=0定性和纯度检定根据峰的数目、形状、位置对供试品进行纯度判别T供试品对照品3 3）差示扫描量热法）差示扫描量热法 ( (DSC) ) 测量保持供试品和惰性参比物的温度相同, 系统所

43、需输给供试品或参比物的能量差随温度(或时间)变化的热分析技术.样品参比加热炉至信号放大器加热器导线炉温控制器T供试品发生吸热反应温度低于参比物质从而产生吸热峰参比物质供试品发生放热反应温度高于参比物质从而产生放热峰DSC峰的正负与峰的正负与DTA峰正负物理意义正好相反峰正负物理意义正好相反用于待测物质的鉴别、晶型鉴别、纯度检查以及熔点和水分等的测定，更适合于测量物质在物理变化或化学变化中焓的变化。不纯物质的DSC图t(min)T不同纯度苯甲酸的DSC曲线温度97.2%98.6%标准品低共熔杂质用于待测物质的鉴别、晶型鉴别、纯度检查以及熔点和水分用于待测物质的鉴别、晶型鉴别、纯度检查以及熔点和水

44、分等的测定，更适合于测量物质在物理变化或化学变化中焓的等的测定，更适合于测量物质在物理变化或化学变化中焓的变化。变化。T对乙酰氨基酚阿司匹林熔点测定、药品真伪鉴别熔点测定、药品真伪鉴别多晶型及其转变表征多晶型及其转变表征应用热分析法检查药物纯度的条件样品纯度在98.0%以上杂质不与主成分反应杂质不与主成分形成共晶或固熔体杂质与熔融试样有化学相似性药物在熔融过程中化学性质稳定药物如存在多晶现象则必须全部转变成某一晶型甲磺酸二氢麦角毒碱的DSC-TGA曲线50100150200DSCTGA失溶剂失水分解2.酸碱度检查法：酸碱度检查法：（1）酸碱滴定法（2）指示液法（3）pH测定法3.物理性状检查法

45、：物理性状检查法：臭味与挥发性的差异（残渣）颜色的差异（溶液颜色检查）溶解行为的差异（澄清度检查）旋光性的差异 旋光度）旋光管长度（）溶液浓度（:100/:100dmImlgccI 第三节 药物中一般杂质的检查按来源分类按来源分类一般杂质一般杂质（信号杂质）（信号杂质）特殊杂质特殊杂质（有关物质）（有关物质）氯化物氯化物硫酸盐硫酸盐铁盐铁盐重金属重金属砷盐砷盐干燥失重干燥失重水分水分炽灼残渣炽灼残渣易碳化物易碳化物残留溶剂残留溶剂溶液颜色溶液颜色澄清度澄清度一、氯化物检查法一、氯化物检查法)(AgClAgNOCl3HNO3白色混浊药物：药物：对照：对照：)(AgClAgNO),(NaCl3HN

46、O3白色混浊 Vc比浊法原理比浊法原理： 是利用氯化物在是利用氯化物在硝酸硝酸酸性溶液中与酸性溶液中与硝酸银硝酸银试液试液作用作用, ,生成氯化银的白色浑浊液，与一定量生成氯化银的白色浑浊液，与一定量标准氯标准氯化钠溶液化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，以判断供试品中氯化物是否超过限量以判断供试品中氯化物是否超过限量。供供试试品品稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml标标准准溶溶液液稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml 暗处放置暗处放置5min5min( (避免避免AgClAgCl分解分解) )例：葡萄糖中氯化物检查例：葡萄糖中氯化物检查

47、0.6g样品加样品加水至水至25ml6ml（10 g Cl/ml）40ml40mlH2OH2O50ml50ml限度：限度：0.010%010.06.010106%1006SCVLA注意注意事项及讨论事项及讨论 为了保证样品管与对照管的反应条件一致为了保证样品管与对照管的反应条件一致, ,要求样品管与要求样品管与对照管要平行操作。对照管要平行操作。平行试验平行试验加稀硝酸的目的加稀硝酸的目的 避免弱酸银盐如碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀的产生；避免弱酸银盐如碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀的产生；加速加速氯化银混浊的生成，产生较好的乳氯化银混浊的生成，产生较好的乳浊。浊。 50ml50ml供试液含稀硝酸供

48、试液含稀硝酸10ml10ml为宜。过多会增大氯化银的溶为宜。过多会增大氯化银的溶解度，使浊度降低。解度，使浊度降低。氯化物氯化物的最适检测浓度的最适检测浓度范围范围 50ml 50ml供试液中含供试液中含0.050.05- -0.08mg0.08mg的的ClCl- -，相当于标准氯化钠溶，相当于标准氯化钠溶液液(10(10 gClgCl- -/ml)/ml)5.0-8.0ml5.0-8.0ml时，所显浑浊梯度明显。时，所显浑浊梯度明显。 根据限量取用适宜的供试品量，使氯化物的浓度在适宜的根据限量取用适宜的供试品量，使氯化物的浓度在适宜的范围内。范围内。 稀释到稀释到40ml40ml后再加硝酸银

49、试液的目的后再加硝酸银试液的目的 使产生的使产生的AgClAgCl浑浊均匀。浑浊均匀。硝酸银加得过早，由于氯化物浓硝酸银加得过早，由于氯化物浓度过大而产生度过大而产生AgClAgCl沉淀而影响比浊。沉淀而影响比浊。供试品溶液不澄清处理方法供试品溶液不澄清处理方法 供试品溶解后溶液不澄清，应过滤，过滤时的滤纸要先用供试品溶解后溶液不澄清，应过滤，过滤时的滤纸要先用含硝酸的水溶液含硝酸的水溶液(1100)(1100)洗涤，除去滤纸中含有的氯化物。洗涤，除去滤纸中含有的氯化物。 供试品溶液有色时的处理方法供试品溶液有色时的处理方法 向供试品溶液中加入某种试剂向供试品溶液中加入某种试剂, ,使溶液颜色

50、褪去后再依法使溶液颜色褪去后再依法检查。检查。a. a. 外消色法外消色法例例：高锰酸钾中氯化物的检查：高锰酸钾中氯化物的检查 因溶液呈紫色，加入适量乙醇，使因溶液呈紫色，加入适量乙醇，使还原褪色后还原褪色后再检查。再检查。 b.b.内消色法内消色法 如枸橼酸铁如枸橼酸铁铵（铵（棕黄色棕黄色）中）中氯化物的检查：氯化物的检查： 作样品管第二份作对照管液标准滤液过滤第一份，分成二等份一定量的供试液 AgNO NaClAgNO HNO333供供试试品品稀稀AgNO31mlH2O标标准准溶溶液液稀稀AgNO31ml过滤过滤规定量规定量NaClVmlH2O50ml50mlVml二、硫酸盐检查法二、硫酸

51、盐检查法)(BaSOBaClSO4HCl224白色 2ml40、稀盐酸加水至样品ml样品管样品管比较浑浊程度放置氯化钡min105ml%25同上一定量标准液)(对照管对照管用水稀释至用水稀释至50mL浓度浓度：100 gSO42/ml注意注意事项及讨论事项及讨论 为了保证样品管与对照管的反应条件一致为了保证样品管与对照管的反应条件一致, ,要求样品管与要求样品管与对照管要平行操作。对照管要平行操作。平行试验平行试验加盐酸的目的加盐酸的目的 可防止可防止BaCOBaCO3 3或磷酸钡等弱酸形成钡盐沉淀；或磷酸钡等弱酸形成钡盐沉淀； 酸度过大可使硫酸钡溶解，降低检查灵敏度。酸度过大可使硫酸钡溶解，

52、降低检查灵敏度。 50ml 50ml溶液含稀盐酸溶液含稀盐酸2ml2ml为宜。为宜。不溶性药物的处理不溶性药物的处理 加入适量的有机溶剂将药物溶解后中依法检查加入适量的有机溶剂将药物溶解后中依法检查供试品溶液有色时的处理方法供试品溶液有色时的处理方法作样品管加水至与对照液同体积）氯化钡（滤液作对照管加标准硫酸钾滤液过滤）氯化钡（滤液过滤加水加盐酸取本品5ml25%25ml0ml. 45ml25%25ml 100ml6ml0g. 2三、铁盐检查法三、铁盐检查法1.硫氰酸铁法 (Ch.P 和USP采用) 36HCl3SCNFeSCN6Fe供试品显色，立即与同法制成的对照溶液比较加水溶解25ml稀H

53、Cl 4ml过硫酸铵 50mg加水稀释35ml30%硫氰酸铵溶液3ml加水至50ml注意注意事项及讨论事项及讨论 为了保证样品管与对照管的反应条件一致为了保证样品管与对照管的反应条件一致, ,要求样品管与要求样品管与对照管要平行操作。对照管要平行操作。平行试验平行试验硫酸铁铵硫酸铁铵最适检测浓度范围最适检测浓度范围 50ml 50ml供试液中供试液中含含1010- -5050g g的的FeFe3+3+，所显色泽梯度明显，所显色泽梯度明显，易于区别（吸光度易于区别（吸光度A A与浓度与浓度c c线性关系良好）。线性关系良好）。 根据限量取用适宜的供试品量，根据限量取用适宜的供试品量，使使FeFe

54、3+3+的的浓度在适宜浓度在适宜的范围内。的范围内。 防止防止FeFe3 3+ +水解水解HCl的作用的作用过硫酸铵的作用过硫酸铵的作用 将供试品中的二价铁氧化为将供试品中的二价铁氧化为FeFe3 3+ +，同时防止光照条件，同时防止光照条件下硫氰酸铁还原火分解褪色下硫氰酸铁还原火分解褪色不溶解或对检查有干扰的药物不溶解或对检查有干扰的药物 经炽灼破坏后将铁盐转变为三氧化二铁后检查残渣经炽灼破坏后将铁盐转变为三氧化二铁后检查残渣2.巯基醋酸法 (BP采用)OH2COOSCHFeCOOHSCHFeHCOOHSCHFeCOOHHSCH2FeH2COOHSCHFe2COOHHSCH2Fe22222O

55、H222222222223红色四、重金属检查法（四、重金属检查法（PbPb） 重金属是指在实验条件下能重金属是指在实验条件下能与与S S2-2-作用呈色作用呈色的金的金属。属。 如：如：AgAg、PbPb、HgHg、CuCu、CdCd、BiBi、SbSb、SnSn、AsAs、NiNi、CoCo、ZnZn等。等。 重金属的存在影响药物的重金属的存在影响药物的稳定性稳定性及及安全性安全性。 生产过程中遇到铅生产过程中遇到铅(Pb)(Pb)最多，又易在体内积蓄最多，又易在体内积蓄中毒中毒, ,故检查时以铅为代表，故检查时以铅为代表，以铅的限量表示重金以铅的限量表示重金属限度属限度。 第一法第四法重金

56、属含量低的药物(25g)第三法使用范围硫化钠法溶于碱性水溶液而难于溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物方法硫代乙酰胺法溶于水、稀酸、乙醇的药物炽灼后的硫代乙酰胺法含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸、乙醇的药物第二法第一法 硫代乙酰胺法SHCONHCH5 . 3pHOHCSNHCH223223 H2PbSHSHPb22条件： 介质：醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 2ml 试剂：硫代乙酰胺(CH3CSNH2) 2ml 杂质对照液：PbNO3 (10g/ml) 25ml纳氏比色管黄色至棕黑色混悬液适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物甲甲乙乙丙丙对照品溶液对照品溶液供试品溶液供试品溶液供试品供试品+对照品对照品 当

57、丙管中显出的颜当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管中显出的颜色与甲管比，不得更深；管比，不得更深； 当丙管中显出的颜当丙管中显出的颜色浅于甲管时，应取色浅于甲管时，应取样按第二法重新检测样按第二法重新检测例：采用硫代乙酰胺法检查重金属时，供试品如有微量例：采用硫代乙酰胺法检查重金属时，供试品如有微量高铁盐存在，需加入的是（高铁盐存在，需加入的是（ ） A碘试液碘试液 B重铬酸钾溶液重铬酸钾溶液 C高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液 D维生素维生素C E过硫酸铵过硫酸铵D例：例：采用硫代乙酰胺法检查重金属时，供试品如有色需在采用硫代乙酰胺法检查重金属时，供试品如有色需在

58、加硫代乙酰胺前在对照溶液管中加入的是加硫代乙酰胺前在对照溶液管中加入的是（ ） A过氧化氢溶液过氧化氢溶液 B稀焦糖溶液稀焦糖溶液 C盐酸羟胺溶液盐酸羟胺溶液 D抗坏血酸抗坏血酸 E过硫酸铵过硫酸铵B第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法 缓缓炽灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml供试品 炭化 加热 HNO3 500-600H2SO4 除尽 放冷 完全灰化 蒸干HCl 2ml 水15ml 中性 按第一法检查 蒸干 氨试液注意：温控；除尽氧化氮温控；除尽氧化氮 适用于含有芳环、杂环、难溶于水、稀酸及乙醇药物第三法 硫化钠法PbSSNaPbNaOH22适用于溶于碱液，难溶于稀酸或酸中沉淀的药物 取供试品

59、适量，加取供试品适量，加NaOH试液试液5ml和水和水20ml溶解后，置于纳氏比色管中，加硫化钠试液溶解后，置于纳氏比色管中，加硫化钠试液5滴，滴，摇匀，与一定量的标准铅溶液同法处理后的摇匀，与一定量的标准铅溶液同法处理后的 颜色颜色比较。比较。五、砷盐五、砷盐检查法检查法古蔡氏古蔡氏法法白田道夫法白田道夫法Ag-DDCAg-DDC法法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）（二乙基二硫代氨基甲酸银法） 也可用作微量砷盐的含量测定也可用作微量砷盐的含量测定次磷酸法次磷酸法( (奇列氏法奇列氏法) )（BPBP）3233233323322-33323HgAs3HBrAsH)HgBr(AsHgBr)(3AsH

60、AsHHgBr)(2AsAs(HgBr)3HBrHgBr3AsHAsHOH33Zn9HZn3AsOAsH3Zn3HZn3As古蔡氏法（古蔡氏法（Gutzeit）（1 1）原理）原理 金属锌与酸作用产生的新生态氢与药物中微量金属锌与酸作用产生的新生态氢与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷盐反应生成具挥发性的砷化氢砷化氢, ,遇遇溴化汞试纸溴化汞试纸产产生黄色至棕色的砷斑生黄色至棕色的砷斑, ,与同条件下一定量标准砷溶与同条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较液所生成的砷斑比较, ,判断砷盐的含量。判断砷盐的含量。黄色黄色棕色棕色黑色黑色8cm有孔玻璃旋塞导气管AsH3发生瓶溴化汞试纸醋酸铅棉花(