肌糖元的酵解作用

1、肌糖元的酵解作用n实验目的n1.学习检定糖酵解作用的原理和方法n2.了解糖酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义n实验原理n在动物、植物、微生物等许多生物机体内，糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行，本实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的条件下，经过一系列的酶促反应最后转变成乳酸的过程。肌肉组织中的肌糖元首先与磷酸化合而分解，经过己糖磷酸脂、丙糖磷酸脂、丙酮酸等一系列中间产物，最后生成乳酸。该过程可综合在下列反应式：n1/n（C6H5O5）nH2O2CH3CHOHCOOHn糖元乳酸n肌糖元的酵解作用是糖类供给组织能量的一种方式。当机体突然需要大量的能量

2、，而又供氧不足（如剧烈运动时），则糖元的酵解作用暂时满足能量消耗的需要。在有氧条件下，组织内糖元的酵解作用受到抑制，而有氧氧化则为糖代谢的主要途径。n糖元酵解作用的实验，一般使用肌肉糜或肌肉提取液。在用肌肉糜时，必须在无氧的条件下进行；而肌肉提取液，则可在有氧条件下进行。因为，催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉提取液中，而催化呼吸作用（即三羧酸循环）的酶系统，则集中在线粒体中，糖元可用淀粉代替。n淀粉存在于绿色植物的多种组织中（种子、块茎、干果）。n糖元是动物和细菌细胞内糖及其所反应的能源的一种储存形式，其作用与淀粉在植物中的作用一样，故有“动物淀粉”之称。n糖元或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生

3、成来观察，在除去蛋白质与糖以后，乳酸可以与硫酸共热变成乙醛，后者再与对羟基联苯反应产生紫红色物质，根据颜色的显现而加以鉴定。n该法比较灵敏，每毫升溶液含1-5g乳酸即产生明显的颜色反应，若有大量糖类和蛋白质等杂质存在，则严重干扰测定结果，因此，实验中应尽量除净这些物质。另外，测定时所用的仪器应严格地洗涤干净。n试剂和器材n1.材料家兔的肌肉n2.试剂n（1）0.5%糖元溶液（或0.5%淀粉溶液）、液体石蜡、15%偏磷酸溶液、氢氧化钙（粉末）、浓硫酸、饱和硫酸铜溶液。n（2）1/15mol/L磷酸二氢钾溶液（pH8.0）n1/15mol/L磷酸二氢钾溶液（pH7.4）n(3)对羟基联苯试剂；n3

4、.器材n试管及试管架、移液管（5ml、2ml、1ml、0.5ml）、滴管、量筒（10ml）、玻璃棒、恒温水浴、小台秤、剪刀及镊子、研钵、冰浴、表面皿、橡皮塞。n操作方法n1.制备肌肉糜：将家兔杀死后，立即剥皮，割取背部和腿部肌肉，在低温条件下用剪刀尽量把肌肉剪碎即成肌肉糜，低温保存备用（临用前制备）。n2.肌肉的糖酵解:取4支试管，编号后各加入6ml磷酸缓冲液(pH7.4)和2ml0.5%淀粉溶液。1、2号管为实验管；3、4号管为对照管。向对照管内加入15%偏磷酸4ml（沉淀蛋白质并终止酶反应）。然后，在每支试管中加入新鲜肌肉糜2g,用玻璃棒将肌肉碎块打散，搅匀，再分别加入少许液体石蜡（约1m

5、l/管），使它在液面形成一薄层以隔绝空气，并将4支试管同时放入37恒温水浴中保温。n2h后，取出试管，立即向试验管内加入15%偏磷 酸 4 m l ， 混 匀 。 将 各 试 管 内 容 物 离 心(3000r/min,15min)，弃去沉淀。量取每个样品的滤液4ml，分别加入已编号的试管中，然后向每管内加入饱和硫酸铜溶液2ml，混匀，再加0.8g氢氧化钙粉末，塞上橡皮塞后用力振荡。因皮肤上有乳酸，勿使手指接触，放置30min，并不时振荡，使糖沉淀完全。将每个样品离心(3000r/min,15min)，弃去沉淀。n3.乳酸的测定:取4支洁净、干燥的试管，编号，各加入浓硫酸1.5ml和4-8滴对

6、羟基联苯试剂，混匀后放入冰浴中冷却。n将每个样品的滤液0.5ml逐滴加入到已冷却的上述浓硫酸与对羟基联苯混合液中，边加边摇动冰浴中的试管，应注意冷却。n将试管内液体混合均匀，放入沸腾的水浴锅中煮沸10min，冷却后，比较和记录各管溶液的颜色深浅，并加以解释。脂肪转化为糖的定性实验n实验目的n学习和了解生物体内脂肪转化为糖的基本原理、检验方法和生理意义。n实验原理n糖代谢、脂肪代谢和蛋白质代谢是相互联系的，三类物质可以互相转化。n本实验以休眠的花生种子和花生的黄化幼苗为材料，定性地了解花生种子内贮存的大量的脂肪转化成为黄化幼苗中还原糖的现象。n试剂和器材n1.材料n花生籽、花生的黄化幼苗（在25暗室中培养8天）。n2.试剂n费林试剂、碘化钾碘溶液。n3器材n试管及试管架、竹试管夹、研钵、烧杯（100ml）、小漏斗、移液管及移液管架、量筒、水浴锅。n操作方法n取5粒花生、剥去外壳，放在研钵中碾碎成种糊。取少量种糊放在白瓷板上，加1滴碘化钾-碘溶液，观察有无蓝色产生？说明了什么？n将剩下的种糊放在小烧杯中，加入40ml蒸馏水，直接加热煮至沸腾，过滤。取1支试管。加入2ml滤液和3ml费林试剂，混匀，在沸水浴中煮2-3min,观