实验7基因组DNA的提取(综合性设计实验)

1、基因组基因组DNA的提取的提取实验目的实验目的1. 学习从生物体中分离核酸的原理和方法2. 掌握测定核酸的原理和方法3. 掌握核酸的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法4. 培养学生创新实践能力和团队合作精神，并强化科研反哺教学效果。选用材料选用材料1. 植物：自己准备植物：自己准备注意：实验体系要尽量小！注意：实验体系要尽量小！2. 理论准备理论准备 不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖

2、和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。实验方案实验方案1. 选择一种材料，查阅文献，并设计好提取基因组选择一种材料，查阅文献，并设计好提取基因组DNA的路的路线，及线，及DNA纯度的检测，含量的检测。纯度的检测，含量的检测。2. 请详细列出所需试剂的清单，以备订购请详细列出所需试剂的清单，以备订购以及详细的实验仪器列表，包括玻璃仪器和大型实验仪器以及详细的实验仪器列表，包括玻璃仪器和大型实验仪器名称（包括名称（包括浓度、体积）浓度、体积）成分成分质量或质量或体积体积配制方法配制方法备注备注20TAE缓冲液

3、pH8.5( ?mL )Tris碱？g冰醋酸？MLNa2EDTA.2H2O？g名称名称规格规格数量数量备注备注容量瓶10mL2实验要求和注意事项实验要求和注意事项 1、四人一组、四人一组 。 2、严格控制实验时间，在规定的时间内完成实验的、严格控制实验时间，在规定的时间内完成实验的设计、操作、结果分析和报告。设计、操作、结果分析和报告。 3、严格按照科研论文的格式写出实验报告。、严格按照科研论文的格式写出实验报告。 4、每个小组在全班同学前汇报实验结果。、每个小组在全班同学前汇报实验结果。 5、注意协调安排时间，保证休息。、注意协调安排时间，保证休息。 6、注意安全。、注意安全。时间安排时间安

4、排1. 提交初步方案、特别是所需试剂清单提交初步方案、特别是所需试剂清单2. 上午：实验准备；下午：实验上午：实验准备；下午：实验3. 进行报告进行报告实验条件实验条件 离心机：离心机： 1.5 ml 冷冻高速离心机冷冻高速离心机/高速离心机高速离心机 5 ml 冷冻高速离心机冷冻高速离心机 50 ml冷冻高速离心机冷冻高速离心机/低速离心机低速离心机 离心管：注明型号离心管：注明型号 DNA纯度的检测纯度的检测 分光光度计分光光度计260nm、280nm的吸光值，并的吸光值，并计算比值。计算比值。 核酸在核酸在260nm附近有强吸收，而蛋白质在附近有强吸收，而蛋白质在280nm附近有强吸收附近有强吸收 A260/A280 1.8-2.0之间纯度较高之间纯度较高 若小于若小于1.8，则有蛋白质污染，则有蛋白质污染 若大于若大于2.0，则有酚类物质污染，则有酚类物质污染图图1 玉米幼叶基因组DNA琼脂糖电泳图（17ul）第一次实验结果第二次实验结果CxMCBxBAM CxCBx BA实验结果实验结果第一次电泳第一次电泳A A：酚：酚/ /氯仿法氯仿法 B B：碱裂解法：碱裂解法 Bx Bx：碱裂解法原液稀释一倍后的稀释液：碱裂解法原液稀释一倍后的稀释液C C：碘化钾法：碘化钾法 Cx Cx：碘化钾法原液稀释一倍后的