填料培训教材

1、http:/填料培训教材http:/填料v正相：硅胶，或者是硅胶键合基团CN(腈基)、DIOL（二醇基）、NH2（氨基）等。 正相固定相是极性的，用来保留极性物质v反相：C18（十八烷基）、C8（辛烷基）、C2（乙基）、CH（环己烷基）、PH（苯基）都是反相固定相。 反相固定相用来保留非极性或弱极性的分析物v大孔树脂 一般用于天然产物的初步分离。在进行天然产物提取分离时，一般流程为：溶剂提取初处理（过大孔树脂、萃取、结晶等）高纯度精制（过硅胶柱、C18柱等）v离子交换树脂 离子交换树脂主要用与生物碱的富集v氧化铝 一般用于碱性化合物的分离 http:/柱子填料的选择柱子填料的选择v正相硅胶:微

2、酸性介质,用于中等极性及弱极性(不含酸碱)化合物分离vC18反相硅胶:用于纯化中等至高极性物质:碳水化合物,酸 性化合物,肽类,杂环化合物,离子化合物v氨基取代填料:用于碱性化合物的分离(不能用于醛/酮以及能与氨基反应的化合物).v氧化铝填料:碱性、中性、酸性v硅酸镁填料：用于纯化酸敏感性化合物和弱碱性化合物，特别是保护基团（如TMS）v氰基取代填料v双羟基（二醇）填料http:/正相硅胶v微酸性介质v活性基团 Si-OH氢离子很容易解离实际活性基团Si-O-v使用寿命较短，通常用于一次性柱http:/正相硅胶的不足v正相硅胶的酸性 pH可能会使酸性或碱性物质的分离困难 v要求对流动相进行修饰

3、碱性物质用TEA酸性物质用AcOHv分辨率低v从TLC到柱色谱重现性不好v修饰引起额外的不便分离前必须先更换和冲填溶剂分离后必须去除TEA 和AcOH v用适当的溶剂进行额外的抽提和洗涤v将混合物浓缩至油状，放在真空中过夜v修饰剂可能与化合物反应http:/C-18 反相填料v用于纯化中等至高极性物质: 碳水化合物, 酸性化合物, 肽类, 杂环化合物, 离子化合物v典型溶剂系统: Water/Acetonitrile, Water/Methanolv需要更长的平衡时间v流速比正相柱低v如果未变干而且保存在80%有机溶剂+20%水溶液中，可重复使用http:/其他介质v氨基取代介质v碱性氧化铝v

4、中性氧化铝v离子交换（SCX，SAX）v氰基取代http:/氨基取代介质v氨基基团连接在硅上，取代酸基团v碱性固定性v不需使用TEAv减少了由于酸/碱反应引起的副反应v对于含有碱性组分的化合物有更好的分离效果v既可用于正相，又可用于反相条件v无需从组分中去除溶剂，减少了过程时间v如果不使用时保存在异丙醇中，可重复使用SiNH2http:/碱性化合物的分离Normal Phase ColumnSolvents: Hexane/EtOAchttp:/碱性化合物的分离Amine ColumnSolvents: Hexane/EtOAchttp:/碱性氧化铝v碱性固定相v无需流动相修饰剂v用于纯化有碱

5、性特性的化合物http:/碱性化合物的分离Normal Phase ColumnSolvents: Hexane/EtOAcNON3-(1-Piperidinylmethyl)-4(3H)-QuinazolinoneNNN5,6-Dimethyl-1-(Piperidinomethyl)Benzimidazolehttp:/碱性化合物的分离Basic Alumina ColumnSolvents: Hexane/EtOAcNON3-(1-Piperidinylmethyl)-4(3H)-QuinazolinoneNNN5,6-Dimethyl-1-(Piperidinomethyl)Benzi

6、midazolehttp:/中性氧化铝v用于纯化对酸敏感的化合物http:/SCXSiSOHOOvSCX = Strong Cation Exchangev保留碱性化合物http:/SCX 柱:2 个可能的用途v除杂工具: 纯化含有碱性杂质的中性化合物v被吸附的碱性化合物可以用含5%NH3的MeOH进行洗脱v纯化具有碱性性质的化合物http:/碱性化合物的分离Normal Phase ColumnSolvents: Dichloromethane/methanolOOChromoneNNN1-(1-Piperidinylmethyl)-1H-Benzimidazolehttp:/碱性化合物的分

7、离SCX ColumnSolvents: Dichloromethane/methanolOOChromoneNNN1-(1-Piperidinylmethyl)-1H-Benzimidazolehttp:/SAXSiNClvSAX = 强阴离子交换v可结合酸性性质的化合物http:/SAX column:2 个用途v除杂工具: 纯化含有酸性杂质的中性化合物v被吸附的碱性化合物可以用含5%AcOH的MeOH进行洗脱v纯化具有酸性性质的化合物http:/酸性化合物分离Normal Phase ColumnSolvents: Hexane/EtOAcOOCOOHOHOHChromone2,4-Di

8、hydroxybenzoic acidhttp:/酸性化合物分离SAX ColumnSolvents: Hexane/EtOAcOOCOOHOHOHChromone2,4-Dihydroxybenzoic acidhttp:/氰基取代v当使用正相溶剂条件时，氰基取代硅胶的功能与正相硅胶相似v在反相条件下，与C-18功能相似v当用常规固定相分离困难时，可作为替代选择SiCNhttp:/二醇（双羟基）v对于正相硅胶分离困难，可用该介质代替v比正相硅胶的极性低v与正相硅胶具有不同的选择性SiOOHOHhttp:/ 1.Phenol2.Catechol3.Resorcinol4.Hydroquinon

9、e5.Pyrogallol6.Phloroglucinol 正相介质二醇介质30CConditions:Normal phase二醇固定相提高了分离效果http:/HPLC中常用的固定相中常用的固定相类别固定相特点反相(与离子对)固定相C18(十八烷基或ODS)稳定性好，保留能力强，用途广C8(辛基)与C18相似，但保留能力降低C3 、C4保留能力弱，多用于肽类与蛋白质分离C1(三甲基硅烷TMS)烷基中保留最弱，最不稳定苯基、苯乙基保留适中，选择性有所不同CN(氰基)保留适中，正反相均可使用NH2(氨基)保留弱，稳定性不够理想聚苯乙烯基在1pH13流动相中稳定，某些分离峰形好，柱寿命长http

10、:/类别固定相特点正相色谱固定相CN(氰基)稳定性好，极性适中，用途广OH(二醇基)极性大于CNNH2(氨基)极性强，稳定性不够理想硅胶耐用性好，价廉，操作不够方便，用于制备色谱较多尺寸排阻色谱固定相硅胶耐用性好，作吸附剂用硅烷化硅胶吸附性弱，溶剂兼容性好，适用于有机溶剂OH(二醇基)不够稳定，在凝胶过滤色谱中应用较多聚苯乙烯基广泛用于凝胶渗透色谱，水和强极性有机溶剂不相溶离子交换色谱固定相键合相稳定性与重现性均不理想聚苯乙烯基柱效不高，稳定，重现性好http:/ODS填料介绍填料介绍vODS-AQ填料vODS-E填料vCOSMOSIL制备填料C18-PREP C18-OPNhttp:/ OD

11、S-AQ填料填料(适用于分离亲水性化合物)基本参数基本参数载体：多孔硅胶微球粒径：30-50m键合相：C18pH范围：29特点特点通用型反相色谱柱重复性好含碳量较高，保留性好对生物样品适应性强性价比高http:/皂苷类化合物制备图皂苷类化合物制备图仪器：EZ Purifier 中压制备系统；色谱柱：3根12g制备柱串联，填料为ODS-AQ（30-50m） ； 流动相：A 0.1甲酸水溶液，B 乙腈，梯度洗脱。 监测波长：214nm；收集波长：254nm； 流速：25ml/min。http:/ ODS-E填料填料基本参数基本参数载体：多孔硅胶微球粒径：40-60m键合相：C18单封尾适合分离中等碱性以下化合物http:/制备填料提供基于多孔球形硅胶填料的正相和反相填料。硅胶填料采用多孔球形硅胶颗粒，与不规则硅胶相比具有更高的分离性能，更低的柱压和更好的